Спосіб одержання імуногену з мікобактерій туберкульозу

Спосіб одержання імуногену з штамів мікобактерій туберкульозу, який включає висів та культи 3 17825 на середовищі з недостатньою кількістю ростових факторів. Найбільш близьке технічне рішення, вибране в якості прототипу, є спосіб одержання імуногену з штамів мікобактерій туберкульозу [Туберкулез сельскохозяйственных животных, под ред. Шишкова В.П., Урбана В.П. М.: Агропромиздат, 1991, с.194-197], який включає висів та культивування на середовищі мікобактерій з наступним приготуванням бактеріальної суспензії із зібраних клітин з титром 1010КУО/мл, які отримували шляхом тривалого пасажу вірулентних культур на середовищі з додаванням жовчі. Витрати часу для приготування імуногену не менше 60 діб. Недоліком цього способу є шкідливі умови праці робочого персоналу внаслідок використання вірулентних штамів мікобактерій туберкульозу, великі витрати часу на одержання імуногену внаслідок тривалого часу пасажування мікобактерій та культивування бактеріальних клітин на середовищах з недостатньою кількістю ростових факторів. В основу корисної моделі поставлена задача створити спосіб одержання імуногену з мікобактерій туберкульозу, який би виключав ризик зараження робочого персоналу за рахунок використання мікобактерій туберкульозу вакцинного штаму Mycobacterium bovis і був технічно простим у виконанні завдяки усуненню заходів спрямованих на безпеку робочого персоналу та виключенню окремих стадій одержання імуногену, а саме: атенуації, пасажу, а також мав менші витрати часу за рахунок використання стимулятора росту і середовища з достатньою кількістю ростових факторів. Поставлена задача вирішена тим, що в способі одержання імуногену з мікобактерій туберкульозу, який включає висів та культивування на середовищі мікобактерій з наступним приготуванням бактеріальної суспензії із зібраних клітин, згідно з корисною моделлю, культуру вакцинного штаму мікобактерій туберкульозу Mycobacterium bovis попередньо обробляють стимулятором росту протягом 24 годин при температурі 37°С і висівають на середовище ВКГ, культивують при 37°С протягом 48 годин, а бактеріальну суспензію готують із зібраних з поверхні середовища живих клітин. Використання мікобактерій туберкульозу вакцинного штаму Mycobacterium bovis забезпечує повну безпеку робочому персоналу, при цьому усувається необхідність спеціальних заходів без Комп’ютерна верстка А. Рябко 4 пеки, а також необхідність стадії атенуації мікобактеріальних клітин та їх пасажування, що спрощує спосіб одержання імуногену, а використання стимулятора росту та середовища ВКГ дозволяє прискорити ріст культури мікобактерій, при цьому одержання імуногену займає 3 доби, що зменшує витрати часу в 2-20 разів порівняно з прототипом. Можливість здійснення корисної моделі ілюструється таким прикладом, який не обмежує обсяг правової охорони: Приклад Вакцинний штам Mycobacterium bovis 0,1мг змішували з 2мл стимулятора росту і поміщали цю суміш в термостат на 24 години при 37°С. Потім простимульовані мікобактерії висівали на чашки Петрі зі свіжоприготованим середовищем ВКГ. Чашки витримували 48 годин при 37°С. Живі клітини збирали шляхом змиву фосфатно-сольовим буфером рН 7,4 з поверхні середовища і готували за стандартом мутності бактеріальну суспензію з титром 1010КУО/мл. Дія імуногену перевірялась на тваринах, які були імунізовані імуногеном одержаним способом, що заявляється. Специфічність одержаних сироваток досліджували методом гетерогенного твердофазного імуноферментного аналізу. Одержані сироватки крові тварин мали позитивну реактивність з антигенами вакцинного штаму Mycobacterium bovis у розведенні від 1:5 до 1:25, що свідчить про імуногенну активність приготованого вищезазначеним способом імуногену. Спосіб одержання імуногену з мікобактерій туберкульозу, що патентується, дозволяє здійснити його за короткий проміжок часу завдяки використанню стимулятора росту і середовища з достатньою кількістю ростових факторів та виключити ризик зараження робочого персоналу завдяки використанню вакцинного штаму. Технічне спрощення способу досягається виключенням окремих стадій, а саме: атенуації і пасажу при одержанні імуногену та усуненням необхідності спеціальних заходів, спрямованих на безпеку робочого персоналу. Використання запропонованого способу одержання імуногену з вакцинного штаму Mycobacterium bovis дозволить одержувати імуноген з імуногенною активністю достатньою для одержання поліклональних антисироваток з високими титрами антитіл. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601