Синтетичне живильне середовище для культивування мікобактерій туберкульозу і бцж

Синтетичне живильне середовище для культивування мікобактерій туберкульозу і БЦЖ, яке складається із: амонію лимоннокислого, калію фосфорнокислого двузаміщенного, магнію сірчанокислого семиводного, заліза лимоннокислого аміачного, гліцерину та дистильованої води, відрізняється тим, що воно додатково містить глікокол та має рН 6,5 при слідуючому співвідношенні компонентів: Глікокол 0,5-0,6 Амоній лимоннокислий 0,3-0,4 Калій фосфорнокислий двузаміщений 0,45-0,5 Магній сірчанокислий семиводний 0,3-0,4 Залізо лимоннокисле аміачне 0,005-0,006 Гліцерин 5,0-6,0 Вода дистильована решта до 100,0 при рН • 6,5-6,7 Винахід відноситься до ветеринарної мікробіології і може бути використаний для виготовлення живильних середовищ з метою культивування збудника туберкульозу і вакцинного штаму БЦЖ. Використання винаходу передбачається в галузі ветеринарної медицини та біологічній промисловості для вирощування і накопичення бактерійної маси мікобактерій. Відоме синтетичне живильне середовище Курської біофабрики для вирощування збудника туберкульозу бичачого виду складається із таких компонентів: Л-асларагіну, амонію лимоннокислого двузаміщеного, калію фосфорнокислого двузаміщеного, магнію сірчанокислого семиводного, заліза сірчанокислого закисного, лимонної кислоти, сірчанокислого цинку, гліцерину та дистильованої води (Євглєвський А О . автореф. дис. док. вет. наук 1990. Л). Існує також живильне середовище для вирощування мікобактерій туберкульозу до складу якого входять: калій фосфорнокислий однозаміщений, натрій фосфорнокислий двузаміщений, магній сірчанокислий семиводний, залізо лимоннокисле аміачне, Л-асларагін, твін-80, сироваточний бичачий альбумін, ДЛ-метіонін, натрій лимоннокислий, гліцерин (А.С. Nfi 1473343. C12N1/20). середовища входять: Л-аспарагїн, який не виробляється промисловістю України. Найбільш близьким за технічною суттю до заявляемого об'єкту є синтетичне живильне середовище Сотона, яке використовується в біологічній промисловості для вирощування збудника туберкульозу бичачого виду. До складу середовища входять: Л-аспарагін, лимонна кислота, магній сірчанокислий семиводний, калій фосфорнокислий двузаміщений, залізо лимоннокисле аміачне, гліцерин. На цьому середовищі не у всіх випадках накопичується достатня кількість бактерійної маси, вирощуваних культур мікобактерій. В основу винаходу, що передбачається, поставлено завдання - виготовити синтетичне живильне середовище для вирощування мікобактерій збудника туберкульозу і БЦЖ із вітчизняної сировини, яке володіє високими елективними властивостями та має низьку собівартість. Поставлене завдання вирішується шляхом заміни в складі синтетичного живильного середовища Л-аспарагіну на глікокол при слідуючих співвідношеннях компонентів, мас.%: Глікокол 0,5-0,6 Амоній лимоннокислий 0,3-0,4 Калій фосфорнокислий двузаміщений 0,45-0,5 Магній сірчанокислий семиводний 0,3-0,4 Залізо лимоннокисле амі Недостатком відомого середовища є його висока вартість, пов'язана з тим, що до складу со 00 00 о ю со О) 35088 ачне 0,005^-0,006 Гліцерин 5,0-б|0 Вода дистильована решта до 100,0 при рН 6,5-6,7 Аналіз відомих синтетичних живильних середовищ для' вирощування мікобактерій показав, що введення в склад середовища глікоколу знаходило використання в інших середовищах. Використання глікоколу в інших середовищах в сполуці з іншими компонентами не забезпечує середовищам такі властивості, які вони проявляють в заявляемому рішенні, тобто покращення ростових живильних властивостей середовища, при виключенні із складу компонента Л-аспарагіна. Порівняльний аналіз заявляемого живильного середовища і прототипа показує, що заявляємий склад синтетичного живильного середовища відрізняється від відомого заміною Л-аспарагіну та зменшення його лужності (рН) на рівні 6,5. Таким чином, даний склад компонентів та відповідне рН дає можливість підвищити ростові властивості, збільшити вихід бактеріальної маси. Синтетичне живильне середовище для вирощування мікобактерій туберкульозу і БЦЖ готують таким чином: В колбу з хімічного скла об'ємом 1 літр наливають 100 см 3 дистильованої води, яку підігрівають до температури 45-50°С. В колбі в указаній послідовності розчиняють слідуючі компоненти (мг)-залізо лимоннокисле аміачне 0,0050,006, глікокол 0,5-0,6. амоній лимоннокислий 0,30,4, калій фосфорнокислий двузаміщений 0,450,5, магній сірчанокислий семиводний 0,3-0,4, гліцерин 5,0-6,0. Після розчинення інгредієнтів розчин охолоджують до кімнатної температури, а потім доводять рИ до 6,5-6,7 за допомогою 25% розчину аміаку. Виготовлене середовище фільтрують через паперовий фільтр і стерилізують при 120°С на протязі 20 хвилин та зберігають при температурі 4°С не більше ЗО днів. Перед висівом культур мікобактерій на живильне середовище, його провіряють на стерильність шляхом утримання в термостаті при температурі 37°С на протязі 3 діб. В колбі із стерильним живильним середовищем бактеріологічною лопаткою (3-4 бак. лопатки) висівають окремо плівки культур збудників туберкульозу і вакцинного штаму БЦЖ, вирощених на живильному середовищі Павловського. Колби із висівами закривають ватно-марлевими пробками і розміщують в термостаті при температурі 37-38°С. За висівами ведуть спостереження на протязі 60 дйів. Приклад № 1. Живильне середовище готують, як вказано вище, в слідуючому співвідношенні компонентів, мас.%: Глікокол 0,5 Амоній ЛИМОННОКИСЛИЙ Калій фосфорнокислий двузаміщений Магній сірчанокислий семиводний Залізо лимоннокисле аміачне Гліцерин Вода дистильована решта до при рН 0,3 0,45 0,3 0,005 5,0 100,0 6,5 Приклад № 2. Теж, що і в прикладі № 1, в слідуючому співвідношенні компонентів, мас %: Глікокол 0,6 Амоній лимоннокислий 0,4 Калій фосфорнокислий двузаміщений 0,5 Магній сірчанокислий семиводний 0,4 Залізо лимоннокисле аміачне 0,006 Гліцерин 6,0 Вода дистильована решта до 100,0 • при рН 6,5 Приклад № 3. Живильне середовище готують як указано в прикладах № 1 і № 2, в слідуючому співвідношенні компонентів, мас.%: Глікокол 0,5 Амоній лимоннокислий 0,3 Калій фосфорнокислий двузаміщений 0,45 Магній сірчанокислий семиводний 0,3 Залізо лимоннокисле аміачне 0,005 Гліцерин 5,0 Вода дистильована решта до 100,0 при рН 6,7 Приклад № 4. Живильне середовище готують як указано в прикладі № 1, в слідуючому співвідношенні компонентів, мас.%: Глікокол 0,6 Амоній ЛИМОННОКИСЛИЙ 0,4 Калій фосфорнокислий двузаміщений 0,5 Магній сірчанокислий семиводний 0,4 Залізо лимоннокисле аміачне 0,006 Гліцерин 6,0 Вода дистильована решта до 100,0 при рН 6,7 Елективні властивості синтетичного живильного середовища визначають через 60 днів після висіву культур мікобактерій по ваговому виходу вирощеної сухої бактерійної маси Результати проведених досліджень висвітлені в таблиці. із матеріалів таблиці видно, що при вирощуванні культур мікобактерій на запропонованому середовищі із глікоколом при оптимальній кількості компонентів та його лужності (рН 6,5) (Приклад Nfl 1) вихід бактерійної маси у шт. Vallae становить 254 мг, епізоотичної культури мікобактерій бичачого виду - 242 мг, вакцинного штаму BCG - 258 мг в порівнянні із середовищем Сотона (прототип), яке відповідно давало вихід бак. маси у шт. Vallae 218 мг, епізоотичного 226 мг та BCG - 195 мг. Результати проведених досліджень свідчать про те, що при вирощуванні культур мікобактерій на розробленому синтетичному живильному середовищі із глікоколом при рН 6,5 при оптимальному складі компонентів вихід сухої' бактерійної маси був більше у штаму Vallae на 36 мг, епізоотичного штаму на 16 мг і у вакцинного штаму BCG на 4,0 мг (СР) ніж на середовищі Сотона (прототип). Крім цього, розроблене живильне середовище має високі елективні (ростові) властивості, в 10 раз дешевше за прототип і не потребує для її виготовлення імпортних компонентів. 35088 Вихід бактерійної маси на пропонуємому синтетичному живильному середовищі і середовищі Сотона в мг сухої речовини (СР) Штам мікобактерій Кількість бак. маси в мг (СР) Середовище, що пропонується при вмісті компонентів Середовище Сотона Приклад 1 Приклад 2 Приклад 3 Приклад 4 прототип М. Bo vis (Val)ae) 254 221 231 245 218 M.Bovis 242 233 235 239 226 258 197 207 234 195 (епізоотичний) BCG Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122)3-72-89 (03122)2-57-03