Живильне середовище для вирощування мікобактерій туберкульозу бичачого виду

Изобретение относится к микробиологии, а именно к средам для культивирования микобактерий туберкулеза и может быть использовано в работе научно-исследовательских институтов и диагностических лабораторий с целью накопления бактериальной массы для изучения культуральных, биологических свойств, а также для приготовления диагностических препаратов. Широко используется в бактериологических исследованиях синтетическая среда Моделя, состоящая из двухзамещенного фосфорнокислого калия, сернокислого магния, щавелевокислого аммония и глицерина. [1]. Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является среда Павловского, содержащая картофель и 5% водный раствор глицерина [23]. Недостатком указанной среды является то, что при дальнейшем изучении культур возбудителя туберкулеза бычьего вида, не удается выращивать и х в лабораторных условиях, такие штаммы требуют затраты времени для многократных пересевов, чтобы адаптировать их к росту на среде Павловского. Целью настоящего изобретения является повышение элективности среды, позволяющей выращивать субкультуры возбудителя туберкулеза бычьего вида без предварительного многократного пассажа. Указанная цель достигается тем, что в среду дополнительно вводят перевар Хоттингера с содержанием аминного азота 50 - 150мг % при следующем соотношении компонентов, г/л: При добавлении перевара Хоттингера в среду Павловского он выполняет новую функцию стимулирует приживаемость и вегетацию возбудителя туберкулеза бычьего вида, т.е. дает новый эффект, позволяющий повысить элективные свойства среды, который является следствием его сочетания с имеющимися компонентами в составе среды, что является существенным отличием предлагаемого состава питательной среды. Питательную среду готовят в два этапа: 1. Берут колбу с 1100 - 1200мл перевара Хоттингера и в течение 10 минут кипятят. Затем жидкость фильтруют через ватно-марлевый фильтр. К фильтрату добавляют дистиллированную воду, доводя содержание аминного азота до 100мг % и pH до 7,0 - 7,2 с помощью 20% раствора едкого натрия. После чего в перевар Хоттингера добавляют химически чистый глицерин из расчета 0,5%. 2. Картофельные клубни тщательно моют в теплой воде и очищают от кожуры, Затем вырезают металлическим пробойником цилиндры шириной 20мм и длиной 50мм, которые разрезают по диагонали так, чтобы они имели форму клиньев. После этого картофельные клинья помещают в 1% раствор двууглекислой соды на 1 час. Затем берут стерильные пробирки с перетяжкой в нижней части (РУ) и заполняют пробирки жидкой средой так, чтобы опущенный конец картофельного клина касался жидкости, Пробирки с питательной средой помещают в автоклав для стерилизации при температуре 120°C в течение 20 минут. Среду проверяют на стерильность в термостате и хранят при температуре +4°C. Пример 1. В опыт были взяты 11 эпизоотических культур возбудителя туберкулеза бычьего вида, выделенные от убитого крупного рогатого скота. Изучение ростовых свойств проводили путем высева выросших колоний микобактерий из патматериала на среде Левенштейна - Иенсена, с последующим пересевом в две пробирки предлагаемой среды и прототипа. После посева культур на питательную среду ватно-марлевые пробки обжигали над пламенем горелки, пропитывали парафином и закрывали, Пробирки с посеянными культурами инкубировали в термостате при +38°C в течение 90 дней. Учет результатов посевов проводили через каждые 7 дней. Питательная среда готовится как описано выше при следующем составе компонентов, г/л: Рост колоний микобактерий на среде выявили у 5 из 11 культур возбудителя туберкулеза бычьего вида через 21 - 30 дней после посева в виде единично расположенных или сливши хся нескольких шерохова тых круглой формы светлосерого цвета колоний. Пример 2. То же, что в примере 1. Однако, содержание в среде глицерина 5,0. При этом рост колоний на среде выявили у 6 из 11 культур. Пример 3. То же, что в примере 1. Однако, содержание в среде глицерина 6,0. При этом рост колоний на среде выявили у 6 из 11 культур микобактерий. Пример 4. Питательная среда готовится как описано выше при следующем составе компонентов, г/л: Рост колоний микобактерий на среде выявили у 9 из 11 культур возбудителя туберкулеза бычьего вида. При этом рост колоний на среде был более обильный. Пример 5. То же, что в примере 4. Однако, содержание в среде глицерина 5,0, При этом рост колоний микобактерий на среде выявили у всех 11 культур. Пример 6. То же, что в примере 4. Однако, содержание в среде глицерина 6,0. При этом рост колоний на среде выявили у 10 из 11 культур микобактерий. Пример 7. Питательная среда готовится как описано выше при следующем составе компонентов, г/л: Рост колоний микобактерий на среде выявили у 8 из 11 культур возбудителя туберкулеза бычьего вида. Пример 8. То же, что в примере 7. Однако содержание в среде глицерина 5,0. При этом рост колоний на среде выявили у 8 из 11 культур микобактерий. Пример 9. То же, что в примере 7. Однако содержание в среде глицерина 6,0. При этом рост колоний на среде выявили у 9 из 11 культур микобактерий. Сводные данные по примерам 1 - 9 представлены в таблице. Сравнительный анализ полученных данных показал, что предлагаемая питательная среда является более элективной к возбудителю туберкулеза бычьего вида, который лучше приживается и вегетирует, чем на прототипе. Кроме этого, не требуется длительного времени и дополнительных средств для многократного пассажа с целью адаптации к среде культур возбудителя туберкулеза бычьего вида. Предлагаемая среда легко приготовляема, не требует импортных химреактивов. Применение предлагаемой среды снижает материальные затраты при изучении культур возбудителя туберкулеза бычьего вида.