Спосіб контролю вмісту місцевої лікарської форми в тканинах

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для контроля за содержанием в тканях местных лекарственных форм, имеющих в своем составе поглощающие в УФ-диапазоне спектра веществе (левомицетин, метилурацил, сульфамиды и т.п.). Определение содержания местной лекарственной формы в тканях имеет большое значение при выборе метода лечения, а также для выработки рекомендаций по применению различных лекарственных препаратов, обладающих антисептическими свойствами. Известны способы определения количества лекарственных веществ, поглощающих в УФ области, в таблетках, мазях, растворах [1,2,3]. Известны способы определения лекарственных веществ, поглощающих в УФ-области спектра, в биологических жидкостях (кровь, плазма, моча) [4,5]. Эти способы не применимы для определения содержания лекарственных веществ в тканях. Известен способ определения содержания в биологических тканях мазей, содержащих в качестве основы полиэтиленгликоль (ПЭГ), методом ЯМР [6]. Недостатком этого способа является то, что он позволяет определять только ПЭГ, в связи с чем с его помощью невозможно изучать проникновение в ткани компонентов мазей, если в качестве основы используются жиры, вазелиновое масло или применяются другие лекарственные формы, не включающие ПЭГ. Наиболее близким к заявляемому является способ определения содержания левомицетина в тканях [7]. Способ заключается в следующем. Навеску ткани, обработанной мазью, отмывают от крови и гомогенизируют в стеклянном гомогенизаторе с трихлоруксусной кислотой. Гомогенат разбавляют дистиллированной водой, фильтруют, в полученный раствор добавляют цинковую пыль и хлористоводородную кислоту, инкубируют 15 мин. Затем пробы разбавляют водой, фильтруют и к фильтрату добавляют цитрат натрия. Инкубируют 5 мин и добавляют мочевину. Смесь инкубируют 15 мин. Добавляют раствор резорцина и инкубируют 10 мин. В растворах регистрируют оптическую плотность с помощью фотоколориметра. Для определения фонового значения оптической плотности такой же обработке подвергают ткань, не обработанную мазью. Для построения контрольной калибровочной кривой готовят набор проб с различной концентрацией левомицетина, к ним добавляют последовательно цинковую пыль с хлористоводородной кислотой и инкубируют 15 мин. Пробы разбавляют водой, фильтруют, добавляют нитрат натрия и инкубируют 5 мин. Добавляют мочевину, инкубируют 15 мин. Добавляют раствор резорцина, инкубируют 10 мин, В полученных окрашенных растворах регистрируют оптическую плотность на фотоколориметре с одним фильтром и строят калибровочную кривую зависимости оптической плотности от концентрации в растворе левомицетина. Далее вычисляется разность оптических плотностей окрашенных растворов обработанной и необработанной тканей и сравнивается полученное значение с калибровочными данными. По калибровочной кривой подбирают соответствующее значение концентрации левомицетина. Недостатком способа является его трудоемкость, а также возможность определения в тканях только левомицетина. Задачей изобретения является упрощение способа за счет сокращения числа процедур и расширение ассортимента исследуемых местных лекарственных форм. Для решения этой задачи в способе, включающем обработку ткани лекарственным веществом, гомогенизацию, получение надосадка и определение оптической плотности надосадка и лекарственного вещества, гомогенизацию осуществляют в водно-спиртовом растворе, при этом предварительно определяют исходный вес образца ткани и вес водно-спиртового раствора с образцом ткани, а оптическую плотность надосадка и лекарственного вещества определяют методом УФ-спектрофотометрии на длине волны максимального поглощения лекарственного вещества, и на основании полученных данных рассчитывают содержание лекарственного вещества по формуле где Emax - оптическая плотность на длине волны максимального поглощения лекарственного вещества; Е325 - оптическая плотность на длине волны 325 нм; Е1% - оптическая плотность водно-спиртового раствора лекарственного вещества, на длине волны максимального поглощения; Ро - вес образца ткани; Р - вес водно-спиртового раствора с тканью. Способ осуществляют следующим образом. Готовят водно-спиртовый раствор лекарственного вещества известной концентрации и на спектрофотометре записывают спектр поглощения в УФ-диапазоне. Определяют длину волны максимального поглощения лекарственного вещества и оптическую плотность на этой длине волны. Навеску ткани, обработанной лекарственным веществом, промывают от крови физиологическим раствором, помещают в водно-спиртовый раствор и взвешивают, гомогенизируют и центрифугируют при 3000 g. В полученном надосадке определяют оптическую плотность на длине волны максимального поглощения лекарственного вещества за вычетом оптической плотности нулевой линии. (Е325) (см.рис). Для определения фонового значения оптической плотности такой же процедуре подвергают необработанную лекарственным препаратом ткань. Концентрацию лекарственного вещества в ткани рассчитывают по вышеприведенной формуле. Пример 1. Определяли содержание мази левосина в мышечных тканях ран после проктологической операции. Сначала готовили водно-спиртовый раствор (50 г этилового спирта и 50 г дистиллированной воды) и 1 %-ный раствор мази (1 г мази и 99 г водно-спиртового раствора). В кювету автоматического спектрофотометра "Пай Уникам, СП-8000" (Англия) наливали 3 мкл мази, доливали до 3 мл растворителем, записывали спектр поглощения. Максимум поглощения лекарственного вещества находился на 270 нм, оптическая плотность лекарственного вещества в максимуме поглощения Е max =0,565. Учитывая, что 1 %-ный раствор мази в кювете разведен в 1000 раз, получили, что удельное поглощение 1%-ного раствора Е 1%=565. После этого определяли содержание левосина в тканях. Брали навеску обработанной левосином ткани - 0,05 г, промывали физиологическим раствором, помещали в 2 мл водно-спиртового раствора и гомогенизировали в гомогенизаторе. Разбавляли водно-спиртовым раствором до 10 мл и взвешивали - 12,05 г. Центрифугировали при 3000 g 15 мин. Надосадок помещали в кювету спектрофотометра и определяли оптическую плотность на длине волны 270 нм: Еmax = 0,72. При этом оптическая плотность на длине волны 325 нм составляла 0,20. Аналогично исследовали навеску ткани (0,60 г), не обработанную левосином: Еmax = 0,38, Е325 =0,20. Полученные данные подставляли в формулу Пример 2. Определяли содержание метилурациловой мази в ткани послеоперационных ран. Готовили 1 %-ный раствор мази. Для этого брали 1 г мази и 99 г водно-спиртового раствора, который готовили как в примере 1. Брали 0,3 мл этого раствора, помещали в кювету спектрофотометра, добавляли 2,7 мл растворителя, записывали спектр поглощения. Максимум поглощения находился на длине волны 260 нм. Величина оптической плотности Е 260 =0,89, Е на длине волны 325 равно 0,02, результирующая оптическая плотность 0,87. Учитывая разведение в кювете, определяли Е1%= 8,7. Брали навеску ткани из раны до нанесения мази (30 мг), помещали в водно-спиртовый раствор (2 мл), и гомогенизировали в гомогенизаторе. Доливали до 6 мл водно-спиртовым раствором и взвешивали - 6,03 г. Центрифугировали 15 мин при 3000 g. Раствор помещали в кювету спектрофотометра и определяли Е результирующее - 0,3. Через сутки, через 2 суток и через 3 суток после начала применения мази брали навески по 30 мг, обрабатывали как описано выше. Определяли DЕ1 - 0,3; DЕ2 - 0,33; DЕ3 - 0,32. По формуле рассчитывали содержание мази в тканях. Таким образом, заявляемый способ позволяет осуществлять динамический контроль за фармакинетикой лекарственных веществ местного применения, фиксировать их накопление в тканях. Способ позволяет расширить круг исследуемых лекарственных веществ. Так как с его помощью можно исследовать все местные лекарственные фермы, содержащие компоненты, поглощающие в УФ-области спектра, в то время как известным способом можно исследовать только левомицетин. При этом способ не трудоемок и требует в 2,5 раза меньших затрат времени.