Штам бактерій yersinia enterocolitica 075-2д-к серологічний варіант 05 для виготовлення антигену та аглютинуючої діагностичної сироватки

Корисна модель належить до ветеринарної мікробіології та стосується штаму Yersinia enterocolitica 075-2Д-К серологічний варіант О5, що використовується для виготовлення антигену та аглютинуючої діагностичної сироватки. Існують штами Yersinia enterocolitica сероваріанти О3, O6.30, O9, які використовують для виготовлення препарату «Набір компонентів для серологічної діагностики ієрсиніозів тварин» [ТУУ 46.15.091-95]. Набір цих сероваріантів не забезпечує збільшення можливості типізації, ідентифікації ієрсиній. В основу корисної моделі поставлено задачу одержати штам бактерій Yersinia enterocolitica 075-2Д-К серологічний варіант O5 для виготовлення антигену та аглютинуючої діагностичної сироватки шляхом селекціонування клону штаму, щоб забезпечити високу антигенну активність і специфічність. Штам Yersinia enterocolitica 075-2Д-К серологічний варіант О5, виділений в лабораторії вивчення хвороб рогатої худоби в 1986 році з лімфатичних вузлів корови, і зберігався в музеї культур бактерій лабораторії вивчення хвороб рогатої худоби ННЦ „ІЕКВМ” під номером О75-2Д. У 2005-2006pp. після клонування і типуваиня з референтною сироваткою Yersinia enterocolitica №6-212 сероваріант О5 штам отримав назву Yersinia enterocolitica №075-2Д-К сероваріант О5. Виготовлена проти цього штаму гіперімунна сироватка на кролях має моно специфічні варіантні властивості. Штам Yersinia enterocolitica 075-2Д-К серологічний варіант О5 зареєстрований під №12 в колекції мікроорганізмів ННЦ „ІЕКВМ” УААЩ61023, м. Харків, вул. Пушкінська, 83). Родина - Enterobacteriaceae, Рід Yersinia, Вид Yersinia enterocolitica. Штам Yersinia enterocolitica 075-2Д-К серологічний варіант О5 характеризується наступними ознаками. Морфологічні ознаки. При мікроскопічному дослідженні в мазках, пофарбованих за Грамом має вигляд грамнегативних дрібних паличок. Розмір клітин 0,8-1,2х0,5-0,8мкм. Культуральні ознаки. Добре росте на твердих, напіврідких і рідких живильних середовищах (МПА, агар Ендо, середовище Хотінгера, МПНРА, МПБ); ієрсинії рухливі при +25 - +28°С і нерухомі при +37°С; у висівах на МПА через 18-24 години утворюються круглі, дрібні (0,2-0,5мм) у діаметрі, випуклі, прозорі колонії з сіроблакитним відтінком в прохідному світлі; на МПБ спостерігається слабке помутніння і формування осаду на дні пробірки; на агарі Ендо через 24 години формуються дрібні, знебарвлені, прозорі колонії. Біохімічні властивості. Штам не утворює H2S, утилізує сечовину, розщеплює з утворенням кислоти глюкозу, мальтозу, сахарозу, не розщеплює лактозу, рамнозу, рафінозу. Каталазний тест позитивний. Антигенні властивості. Штам Yersinia enterocolitica 075-2Д-К серологічний варіант О5 має термолабільний джгутиковий антиген та термостабільний специфічний соматичний антиген, в основі якого лежить ліпополісахарид. В організмі хворих тварин утворюються антитіла до обох антигенів збудника. Патогенні властивості. Штам має відношення до захворювання тварин на кишковий ієрсиніоз з клінічними ознаками захворювання ентероколіти. Імуногенні властивості. Штам використано для імунізації кролів з метою отримання діагностичної аглютинуючої сироватки , яка не дає перехресної реакції аглютинації з антигенами сероваріантів О3, О6.30, О9 „Набору компонентів для серологічної діагностики ієрсиніозів тварин”. Приклад. Виготовлення антигену для імунізації кролів (2 кролі живою масою по 3,0кг) вирощували розплодку культури Yersinia enterocolitica 075-2Д-К серологічний варіант О5 на м’ясо-пептонному агарі при 28°С протягом двох діб. Культуру змивали фізіологічним розчином і доводили концентрацію бактерій до 20млрд.м.к./см3 за оптичним стандартом мутності і кип’ятили на водяній бані. З осаду готовили суспензію бактерій в концентрації 2млрд.м.к./см3, контролювали на стерильність висівами на МПБ, МПА, і використовували для імунізації тварин, розморожуючи флакони тільки один раз. Імунізацію проводили внутрішньовенно багаторазовим введенням у зростаючих дозах. Через 7 днів після імунізації у кролів відібрали кров та отримали сироватку. Активність сироваток досліджували в пробірочній реакції аглютинації. Антигени готували згідно діючої „Тимчасової інструкції по виготовленню набору компонентів для серологічної діагностики ієрсиніозів тварин”, затвердженої в установленому порядку та [ТУ У 46.15.091-95]. Результат дослідження наведено в таблиці 1. Одержана сироватка реагувала з антигеном Yersinia enterocolitica 075-2Д-К серологічний варіант О5 у титрі 1:1600 та не реагувала з антигенами Yersinia enterocolitica серологічні варіанти О3, О6.30, О9. Результати випробування активності і специфічності аглютинуючих сироваток з агаровими культурами викладено в таблиці 2. Як свідчать дані, наведені в таблиці 2, виготовлені аглютинуючі моноштамні сироватки серологічних варіантів О3, О6.30, О9, О8, О5 є високо специфічними при досліджені живих культур ієрсиній, гафній, сальмонел, псевдоманад і можуть бути використані у їх типуванні, але штам Y.enterocolitica сероваріант О9 має споріднені антигенні детермінанти з бруцелами і дає перехрест у пластинчатій РА. Використання штаму Yersinia enterocolitica 075-2Д-К серологічний варіант О5 для виготовлення іерсиніозного антигену та ієрсиніозної діагностичної сироватки, яка не дає перехресної реакції аглютинації зі штамами Yersinia enterocolitica серологічні варіанти ОЗ, О6.30, О9 буде сприяти діагностиці кишкового ієрсиніозу та ідентифікації епізоотологічних штамів ієрсиній. Штам бактерій Yersinia enterocolitica 075-2Д-К серологічний варіант О5 має високу антигенну активність і використання штаму буде сприяти швидкій діагностиці та ідентифікації штамів збудника ієрсиніозної інфекції та оперативно попереджувати захворювання на кишковий ієрсиніоз. Таблиця 1 №№ Компоненти реакції 1 Гіперімунна сироватка проти штаму Y.enterocolitica 075-2Д-К сероваріант О5 2 Гіперімунна референтна сироватка проти штаму Y.enterocolitica 6-212 сероваріант О5 3 Гіперімунна референтна сироватка проти штаму Y.enterocolitica 134 сероваріант О3 4 Гіперімунна референтна сироватка проти штаму Y.enterocolitica 102 сероваріант О6.30 5 Гіперімунна референтна сироватка проти штаму Y.enterocolitica 383 сероваріант О9 6 Негативна сироватка 7 Фізіологічний розчин Розведення сироваток 100 200 400 800 1600 3200 100 200 400 800 1600 3200 100 200 400 800 1600 3200 100 200 400 800 1600 3200 100 200 400 800 1600 3200 100 200 Ієрсиніозні антигени сероварів 075-2Д (О5) О3 О6.30 ++++ ++++ ++++ ++++ +++ ++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ ++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ ++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++ ++ О9 ++++ ++++ ++++ ++++ +++ ++ Таблиця 2 Агарові культури Y.enterocolitica О3 Y.enterocolitica O6.30 Y.enterocolitica О9 Y.enterocolitica О5 (О75-2Д-К) Y.enterocolitica О8 (О8 M) Y.frederiks Hafnia alvei 1383(гній) Ps. Aeruginosa Salmonella Dublin Br. abortus (7-26) Br. abortus (V-8) Br. abortus (B-l) Br.melitensis (Rev-la) Br. abortus (19-770) Ієрсиніозні сироватки сероваріантів у розведенні 1:10 О3 О6.30 О9 О5 О8 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++