Штам бактерій citrobacter “sp”( c.freundii gallinarum)”inv”-продуцент бактерійного антигену

Штам бактерій Citrobacter "Sp" (Cfreundn galhnarum) "mv" - продуцент баїсгерійного антигену, що використовують для серологічної діагностики цитробактерної інфекції у курей, який депонований та зберігається за номером П-01 у колекції мікроорганизмів лабораторії вивчення хвороб птиць Кримської дослідної станції ІЕКВМ Винахід відноситься до біологи, медичної та ветеринарної мікробіологи і може бути використаний при виробництві біологічно активних препаратів діагностичних цитробактерних антигенів, імунних сироваток, вакцин Має загально теоретичне значення при вивченні міжродових зв'язків Citrobacter і бактерій роду Salmonella Бактерії роду Citrobacter складають самостійну групу родини Enterobactenaceae (Bergey's, 1984) Однак, за ферментативними та серологічними властивостями вони схожі з сальмонелами Згідно первинної класифікації вони входили до триби Salmonellae (Edward P Ewmg W 1972) Серологічно однакові або близькі штами Citrobacter і Salmonella мають ідентичну або дуже схожу структуру вуглеводів їх О-антигенів Деякі серологічні групи Citrobacter володіють Vi-антигеном, який серологічне ідентичний з Vi-антигеном Salmonella typhymunum і Samoneha paratyphi С Бактерії роду Citrobacter зустрічаються досить часто, але їх виділенню та вивченню у Радянському Союзі не приділялося уваги Згідно літературних даних деякі серовари цитробактеров можуть викликати як спорадичні випадки так і спалахи захворювань у людей, які протікають по типу харчових токсикоінфекцій Вони можуть виділятися у якості етіологічного агенту при інфекціях сечо- та жовчовивідних шляхів, отітах, остеомієлітах, менінгітах (Килессо В А ,1985) У дослідах Бортнічук В , Садовський В , Сорокіна Н, (1997) показали етіологічну роль цитробактера у виникненні шлунково-кишкових захворювань новонароджених телят У пробах фекалій хворих телят регулярно виділялися ентеробактерп таких видів Eschenchia coll lersmia mterocohtica, Citrobacter amalonaticus, Citrobacter freundn, Citrobacter diversus У тільних корів встановлена сер о позитивність до представників Citrobacter, Ecoh, Yersima при значних тирах 1 128 - 1 256, що свідчить заданими авторів про їх патогенні властивості При вивченні факторів патогенності встановлено, що цитробактери являються вірулентними для білих мишей, володіють гемолітичною активністю Ізольований нами штам має переваги перед відомим штамом, в зв'язку з його видовим походженням від курей що може бути використано при виготовленні вакцин та діагностичних препаратів для птахів Штам Citrobacter freundii gallmarum має слідуючі характеристики Культурально-морфолопчні ознаки Бактерії представляють собою дрібні, рухливі палочки За Грамом фарбуються негативно Добре ростуть на звичайних живильних середовищах, з рН 7,2-7,4, оптимальна температура інкубування 37-37°С Термін інкубування 24-48 годин СО Ю (О При рості на м'ясо-пептонному бульоні (МПБ) викликають рівномірне помутніння, з невеликим осадом На м'ясо-пептонному агарі (МПА) - утворюють невеликі колони, округлі, прозорі На диференціальному середовищі Ендо колони безкольорові із сіруватим ВІДТІНКОМ, на середовищі Плоскірєва - ріст у вигляді випуклих колонів які фарбуються у тон середовища (лактозонегативні варіанти), на вісмут-сульфатному агарі через 48 годин інкубації цитробактер дає пишний ріст у вигляді чорних колоній без редукційної зони під колоніями, ріст супроводжується характерним неприємним запахом Фізюлого-бюхімічні характеристики Ріст бактерій не подавляється на середовищах, які містять жовчні солі та діамантовий зеле 61253 ний, спроможні утилізувати натрію цитрат та використовувати його у якості єдиного джерела вуглецю На середовищі Гісса з додаванням індикатора Андреде, вуглеводів, багатоатомних спиртів ферментує глюкозу з утворенням газу, а також ферментує маніт, рамнозу, сорбіт, арабшозу, лактозу, інозит Бактерії утворюють сірководень, не утворюють індолу, не розріджують желатину БІОХІМІЧНІ маркери для диференціації цитр о б актер у від сальмонел Цитробактери не володіють лізин декарбоксилазою, сальмонели декарбоксилюють лізин Цитробактери ростуть на середовищах у присутності цианіду калію (KCN), ріст сальмонел на середовищі з KCN відсутній або із запізненням БІОХІМІЧНІ маркери представлені у таблиці Таблиця Основні тести для диференціації цитробактера від сальмонел Ріст на диференціальних середовищах Вісмут-сульфітний агар Ріст на середовищі, що утримує ЛІЗИН Ріст на середовищі з цианідом калію Цитробактер Сальмонелла Через 24-48 годин інкубації утворюють Через 48 годин інкубації дає багачорні колонії з металевим блиском, при тий ріст, утворюючи чорні КОЛОНУ цьому і спостерігається редукційна зона без редукційної зони під колонією під колонією чорного кольору Не карбоксилює лізин Карбоксилює лізин Росте в присугності KCN Ріст відсутній Вірулентність Штам Citrobacter freundn gallmarum володіє вірулентністю для курчат добового та десятиденного віку Інтраорбітальне введення добової бульонної культури в об'ємі 0,2см , яка містить 108 мікробних клітин викликало розвинення генералізованої форми кишкової інфекції Захворювання протікало в гострій та під гострій формі, супроводжувалося гибеллю до 50% серед добових курчат та 30% у десяти денних При вивченні серологічного статусу птахів, що одужали встановлена серопозитивність до цитробактерного антигену в реакції аглютинації (РА) Титри антитіл були низькими 11 - 1 4 (0,7+0,1 Іодг) у курчат інфікованих в добовому ВІЦІ БІЛЬШ великі титри антитіл 1 8 - 1 16 (3 7 + 0,2 Іодг) виявили у курчат, інфікованих у 10 денному ВІЦІ Антигенні властивості, спроможность до анитілоутворення в организм і дорослих курей Формували групи дорослих курей (250 денного віку) по 10 голів в ДОСЛІДНІЙ та контрольній групах Птицю інфікували шляхом штраорбітального введення бульонної культури дитробактера в об'ємі 0,2см3, що містить 10 мікробних клітин Серологічний статус у курей визначали перед зараженням та після інфікування через 14 діб Зразки сироваток крові досліджували в реакції аглютинації, користуючись мікротитратором Такачі В якості антигену використовували змив бактеріальної культури Citrobacter freundn gallmarum, шактивовану 0,4% розчином формаліну На 14 добу після інфікування у курей в сироватці крові реєстрували антитіла в достатньо високих титрах 1 64 - 1 128 КЛІНІЧНИХ ознак хвороби не спо стерігали В контрольній групі сероконверм не встановлено Епідеміологічний маркер В зв'язку з широким розповсюдженням цитр о б акт ер а в природі, наявністю його серологічних варіантів, що об'єднують 32 серологічних О-группи та 88 Н-антигенів в 75 композиціях, його МІНЛИВІСТЮ, важливим являється розробка епідеміологічного маркеру За нашими спостереженнями встановлені слідуючи ознаки маркерів - у дорослих курей спостерігається латентна форма інфекції без прояву КЛІНІЧНИХ ознак захворювання, що характеризується порушенням яйценосності Місце локалізації Citrobacter freundii galhnarum у дорослих курей - жовткові фолікули, захворювання супроводжується їх запаленням Курчата добові та десяти денні при експериментальному інфікування хворіють кишковою формою інфекції Спосіб отримання штаму та його ідентифікація Проводять діагностичний забій курей, що мають порушення функції яйцеутворення або позитивно реагуючи із еритроцитарним пулорним антигеном Sal pullorum-gallmarum, відбір курей для діагностичного забою проводять до застосування антибіотиків або інших хіміотерапевтичних препаратів Матеріалом для бактеріологічного дослідження являється пунктат жовткових фолікулів, тому що у дорослих курей жовткові фолікули являються переважливим місцем локалізації збудника інфекції До посіву приступають як можно раніше безпосередньо у секційного столу Досліджуваний матеріал засівають прямим посівом у чашки із щільними селективно 5 61253 6 диференціальними середовищами агар Ендо, сульфітному агарі) Вивчають хараісгер росту на Плоскірєва, вісмут-сульфітний агар Наносять 1-2 щільних живильних середовищах краплини пунктату на поверхню агару, розтирають Ураховують розмір, форму, колір колоній, безперервними рухами шпателем на невеликій утворення пігменту, наявність специфічного запаДІЛЯНЦІ агару, після чого відірвав шпатель продовху Від первісної оцінки колоній залежить кінець жують розтирати поверхню що лишилася небактеріологічного дослідження При наявності козасіяною Посіви витримують при 37°С протягом лоній характерних для цитробактера вони 18-20 годин (48 годин для інкубації на вісмутпідлягають відсіву для біохімічних досліджень Комп'ютерна верстка Н Лисенко Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119