Спосіб одержання калусної тканини ломиносу виноградолистого (clematis vitalba l.)

Спосіб одержання калусної тканини ломиносу виноградолистого, що включає виділення експлан 3 24538 діб. Приклади конкретного виконання: Приклад 1 Готують живильне середовище Гамборга і Евелега, що містить мінеральні солі, мікроелементи, і са харозу за прописом Гамборга і Евелега [Урмацева В.В. Культивування калусних тканин на твердих живильних середовищах // Ме тоди культивування клітин. Сборн. Науч. праць - Л.: «Наука». - 1988. - С.232-241], агар - 8000, тіамін - 1,0, піридоксин - 0,5, нікотинова кислота - 1,0, аскорбінова кислота 5,0; фітогормони: 2,4діхлорфеноксіоцтова кислота - 2,5мг/л, 6бензіламінопурин - 0,4мг/л, розливають у культуральні судини (пробірки 2´20см), по 10мл живильного середовища, закривають металевими ковпачками з фольги, стерилізують в автоклаві при 121°С 40 хвилин, рН середовища до стерилізації 5,5-5,8. На поверхню середовища в стерильних умовах уводять експланти (сегменти зрілих листів Clematis vitalba L.), культивують у темряві при 25°С протягом 50 діб, після чого калус виймають із судин, відокремлюють від експланта, і висаджують на живильне середовище такогож ж складу. Дані про частоту калусо утворення наведені в таблиці 1. Приклад 2 Готують живильне середовище Гамборга і Евелега, що містить мінеральні солі, мікроелементи, і сахарозу за прописом Гамборга і Евелега, агар - 8000, тіамін - 1,0, піридоксин - 0,5, нікотинова кислота - 1,0, аскорбінова кислота - 5,0; фітогормони: 2,4-діхлорфеноксіоцтова кислота - 2,0мг/л, 6-бензіламінопурин - 0,4мг/л, розливають у культуральні судини (пробірки 2´20см), по 10мл живильного середовища, закривають металевими ковпачками з фольги, стерилізують в автоклаві при 121°С 40 хвилин, рН середовища до стерилізації 5,5-5,8. На поверхню середовища в стерильних 4 умовах уводять експланти (ювенільне листя Clematis vitalba L.), культивують у темряві при 26°С протягом 45 діб, після чого калус виймають із судин, відокремлюють від експланту, і висаджують для подальшого культивування за таких же умов. Дані про частоту калусо утворення наведені в таблиці 1. Приклад 3. Готують живильне середовище Гамборга і Евелега, що містить мінеральні солі, мікроелементи, і сахарозу за прописом Гамбога і Евелега, агар - 8000, тіамін - 1,0, піридоксин - 0,5, нікотинова кислота - 1,0, аскорбінова кислота - 5,0; фітогормони: 2,4-діхлорфеноксіоцтова кислота - 2,0мг/л, 6-бензіламінопурин - 0,3мг/л, розливають у культуральні судини (пробірки 2´20см), по 10мл живильного середовища, закривають металевими ковпачками з фольги, стерилізують в автоклаві при 121°С 40 хвилин, рН середовища до стерилізації 5,5-5,8. На поверхню остиглого середовища в стерильних умовах вводять експланти (вегетативні апекси ломиносу Clematis vitalba L.), культивують у темряві при 26°С протягом 55 діб, після чого калус виймають із судин, відокремлюють від експланту, і висаджують для подальшого культивування. Дані за частотою калусоутворення наведені в таблиці 1. Значимість глікозидів як біологічно активних сполук із широким спектром фармакологічної дії викликає інтерес до їх вивчення в клітинних культурах рослин. Використання замість інтактних рослин їхніх клітинних культур, отриманих біотехнологічними методами, має ряд переваг: зменшення антропогенного впливу на дику природу, можливість одержання фітомаси, що не містить полютантів (гербіцидів, пестицидів, важких металів і ін.), можливість керування процесом біосинтезу кінцевих продуктів і т.д. Таблиця 1 Частота калусоутвореня в культурі тканин Clematis vitalba L. у залежності від типу експланту і складу живильного середовища № прикладу 1 2 3 Тип і концентрація фітогормонів у Тип експланту живильному середовищі ІОК 2,4-Д 6-БАП 1,0 2,5 0,4 Сегменти зрілої листової пластинки 0 2,0 0,4 Ювенільні листки 0 2,0 0,3 Вегетативні апекси стебла Комп’ютерна в ерстка В. Мацело Підписне Частота калусоутворення, % 39,7±1,0 48,3±1,3 86,9±2,4 Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601