Спосіб кріоконсервування еритроцитів

Спосіб кріоконсервування еритроцитів, який включає додавання до них розчину кріопротектора оксіетилованого гліцерину зі ступенем полімеризації n=25 з наступним заморожуванням до 196 °С, який відрізняється тим, що кріопротектор вводять дозовано, при кімнатній температурі, зі швидкістю введення 0,09-0,36 мл/хв, витримують 50-60 хв і далі заморожують у шузі азоту. (19) (21) u200702420 (22) 05.03.2007 (24) 10.07.2007 (46) 10.07.2007, Бюл. № 10, 2007 р. (72) Грищенко Валентин Іванович, Компанієць Антоніна Михайлівна, Ніколенко Олександра Вікторівна, Чеканова Валентина Володимирівна, Троц Юлія Петрівна (73) ІНСТИТУТ ПРОБЛЕМ КРІОБІОЛОГІЇ І КРІОМЕДИЦИНИ НАЦІОНАЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ Н АУК УКРАЇНИ 3 24710 ваний на фізіологічному розчині NaCl, до досягнення його концентрації у суспензії клітин 15%. Одержану суспензію переносять у металевий контейнер місткістю 2мл і заморожують у шузі азоту. Зразки відігрівають на водяній бані при температурі 40°С протягом 40сек. Приклад 1. Еритроцити отримували з донорської крові людини, заготовленої на гемоконсерванті «Глюгицир», яка зберігалася після ексфузії не більш 2 діб при +4°С. Кріопротектор ОЕГ n=25, приготовлений на 0,9%-ому розчині NaCl у концентрації 30%, з'єднували з еритроцитами і заморожували в металевих контейнерах місткістю 2мл у шузі азоту. Зразки відігрівали на водяній бані при температурі 40°С протягом 40сек. Після заморожування-відтавання визначали кількість життєздатних клітин за процентом гемолізу після перенесення еритроцитів в ізотонічне середовище, гематокрит (загальний обсяг клітин, %) визначали в капілярах на мікроцентрифузі МГЦ-8. Осмотичну крихкість визначали після перенесення еритроцитів у 0,6 і 0,9% розчини NaCl. Результати наведені в Табл. 1 у порівнянні з прототипом. 4 З Табл. 1 видно, що після кріоконсервування заявленим способом показники осмотичної крихкості після поміщення еритроцитів в ізотонічне і гіпотонічне середовище нижчі у порівнянні з прототипом в середньому на 10-15% і, відповідно, кількість життєздатних клітин вища ніж в прототипі. Показники гематокриту теж свідчать про більш високу схоронність еритроцитів у заявленому способі. Приклад 2. Спосіб здійснювали аналогічно Прикладу 1, за винятком того, що кріопротектор додавали з різною швидкістю. Результати наведені в Табл. 2 З Таблиці 2 видно, що при дозованому додаванні ОЕГ у якості кріопротектора доцільне використання повільних швидкостей його введення (0,09-0,36мл/хв), що сприяє підвищенню показників схоронності еритроцитів після заморожування. Збільшення швидкості введення захисного середовища приводить до достовірного збільшення осмотичної крихкості, зниження кількості життєздатних клітин і показника гематокриту. Подальше зниження швидкості ведення кріозахисної речовини є таким, що важко виконується. Таблиця 1 Схоронність еритроцитів після кріоконсервування n=6 Спосіб кріоконсервування Заявлений Прототип Кількість життєздатних клітин, % 93-95 80-85 Осмотична крихкість у 0,6% NaCl, % 6,9±1,17 20,7±2,7 Осмотична крихкість у 0,9% NaCl, % 6,5±1,31 15,0±2,0 Гематокрит, % 27,6±0,9 22,2±1,0 Таблиця 2 Показники схоронності еритроцитів в залежності від швидкості додавання кріопротектора n=6 Швидкість додавання, мл/хв 1,8 0,8 0,52 0,36 0,18 0,09 Кількість життєздатних Осмотична крихкість клітин, % у 0,6% NaCl, % 74-75 28,5±1,4 82-83 19,1±1,5 87-89 15,6±2,0 89-94 8,85±2,46 93-94 9,37±2,63 93-95 6,9±1,17 Джерела інформації: 1. Виноград-Финкель Ф.Р., Федорова Л.И., Семенова Н.В. и др. Усовершенствование криоконсервирования эритроцитов при ультранизких температурах. // Проблемы гематологии и переливания крови. - 1980. - №9. - С.19-23. Комп’ютерна в ерстка І.Скворцов а Осмотична крихкість у 0,9% NaCl, % 25,6±0,47 17,5±0,56 12,3±1,4 8,86±2,95 6,72±0,29 6,5±1,31 Гематокрит, % 16,3±0,49 21,5±0,45 21,3±1,25 22,3±1,24 22,7±1,41 27,6±0,75 2. Лубяный В.Г., Бредихина Л.П., Шраго М.И. Криопротекторная активность олигомеров ОЭГ в низкотемпературном консервировании эритроцитов. // Криобиология и криомедицина. - 1981. Вып.8, - С.34-40. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601