Тест-система на основі мікрометоду реакції нейтралізації для діагностики ринопневмонії коней

Тест-система на основі мікрометоду реакції нейтралізації для діагностики ринопневмонії коней, що включає зв'язування вірусу із специфічни 3 25282 Для проведення обліку реакції імунодифузії скельця з компонентами реакції продивляються під падаючим світлом з використанням лупи із збільшенням в 2.5 рази. Контролем реакції слугує реакція антигену із специфічною сироваткою, що виражається утворенням чітко обмеженої лінії преципітації білого кольору між лунками заповненими антигеном і преципітуючую сироваткою. Результати реакції отримують після порівняння контролю із досліджуваними сироватками крові. У разі відсутності чітко вираженої лінії преципітації у контролі облік результатів не проводять. Застосування реакції імунодифузії для діагностики ринопневмонії коней досить тривале (72год), недостатньо чутлива (бо визначаються лише преципітуючі антитіла, трудомістка при масових дослідженнях, недостатньо об'єктивний облік результатів [1]. Суть корисної моделі в тому, що в розробленій тест-системі в десять раз скорочуються витрати реагентів, використання 96 лункових планшетів малого обєму і автоматичної восьмиканальної піпетки полегшує і прискорює постановку реакції. Внесення компонентів на сформований моношар полегшує постановку реакції і гарантує обєктивний результат дослідження. Спосіб постановки мікрометоду реакції нейтралізації здійснюється наступним чином. Для постановки реакції беруть робоче розведення герпесвірусу 100 ТЦЦ50. Для приготування дослідних проб у лунки планшета вносять по 0,1см 3 живильного середовища з антибіотиками. В перший ряд лунок додють по 0.1см 3 сироватки, яку перед дослідженням прогрівали у водяній бані 30хв при температурі 560С для інактивації неспецифічних інгібіторів. Після перемішування піпетуванням 0.1см 3 суміші переносять у наступний ряд лунок. Таким чином отримували двократні розведення сироваток. У кожну лунку вносять по 0.1см 3 вірусу ринопневмонії. Одночасно ставлять контролі: 1. Контроль культури клітин: у 4 лунки вносять тільки живильне середовище, для виявлення неспецифічної дегенерації клітин. 2. Контроль токсичності сироватки: у 4 лунки вносять сироватку в найменшому розведенні, яке використовували в реакції. 3. Контроль специфічності вірусу: - робоче розведення вірусу змішують з дворазовими розведеннями специфічної сироватки; Комп’ютерна в ерстка Л. Купенко 4 - робоче розведення вірусу змішють з дворазовими розведеннями нормальної сироватки; 4. Контроль робочого розведення вірусу: з робочого розведення вірусу готують 4 ряди десятикратних розведень, так щоб у лунках було по 100, 10, 1, 0,1 доз вірусу в об'ємі 0.2см 3. Планшет ставлять на 1 годину в СО2 інкубатор для контакту вірусу з сироватками. Потім суміші переносять в планшет із сформованим моношаром клітин, з якого попередньо видалили ростове середовище. Облік результатів реакції нейтралізації з контролями проводять щодня, протягом 4 діб, шляхом перегляду під малим збільшенням мікроскону. Реакцію вважаютьпозитивною при відсутності ЦПД в лунках з досліджуваною сироваткою, зважаючи на наявноість ЦПД у контролях вірусу, відсутність ЦПД в культурі, що інокульована сумішшю вір усу із специфічною імунною сироваткою і відсутності слідів дегенерації в контролях культури клітин. Титр сироваток розраховують за Рідом і Менчем і виражають в логарифмі з основою 2. Діагностичним титром проти 100 ТЦД50/см 3 вірусу вважають розведення сироватки 1:64 і більше. Якщо сироватка нейтралізує не менше ніж у 50% заражених лунок, то можна ставити позитивний діагноз на ринопневмонію коней. Експериментальні дослідження показали, що розроблена тест-система для діагностики ринопневмонії коней виявляється високочутливою, специфічною, а сам спосіб постановки мало трудомістким. Користуючись цим способом можна проводити масові діагностичні обстеженняь із значною економією антигену і контрольних сироваток. Запропонована тест-система знайде застосування у вір усологічних лабораторіях ветеринарної медицини та науково-дослідних установах. Використана література 1. Галатюк О. Є. Заразні хвороби коней - Житомир: Видавництво "Волинь", 2003. -280с. 2. Иммунологическая диагностика вирусных инфекций/ Под ред. Т.В. Перадзе, П. Халонена. Совместное издание СССР - Финляндия. - М: Медицина, 1985. - 302с. 3. Оськина В.В., Чекалина К.И., Габриэлян Н.И. //Лаб. дело. -1987. - №2. - С.23-25. 4. Бурмистров C.O., Габелова К.А., Андреева А.А., Опарина Т.И., Ар утюнян А.В.// Клин. лаб. диагностика. - 2001.- №6. - С. 10-12. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601