Імунокоригувальний засіб при основній терапії ревматичних захворювань

Настоящее изобретение относится к применению болеутоляющего и противовоспалительного известного препарата "Фитодолор" в качестве основного терапевтического препарата при лечении ревматических заболеваний. "Фитодолор", обладающий болеутоляющим и противовоспалительным действием, содержит водноспиртовые вытяжки (об.%): 50 - 70 Populus tremula, 10 - 30 Solidago virgaurea и 10 - 30 Fraxinus excelsior. В предпочтительном варианте композиция содержит (об. %) водно-спиртовых вытяжек 60 Populus tremula, 20 Solidago virgaurea и 20 Fraxinus excelsior. Пример. Для приготовления вытяжки Populus tremula берут 500кг свежеприготовленных частиц осины (Salicaceae L) (сырье может содержать кору и листья 1 : 2) и обрабатывают их в герметичной установке смесью 820кг 60об.% - ного этанола и 1700кг 44,5об.% - ного этанола в течение 16ч при 50°C. Общий объем загрузки в установке 1000л. В ходе обработки условия строго контролируются. Затем смесь профильтровывают на фильтр-прессе и затем из фильтрата отбирает пробу на анализ. Анализ осуществляют методами жидкостной хроматографии высокого давления и УФ-спектроскопии по условиям СМР ("Good Manufacturing Practice"). При этом определяют содержание в экстракте салицина и салицилового спирта, общее содержание глюкозидов и сухой остаток. Продолжительность анализа составляет 12ч. Аналогичным образом получают вытяжку Solidaginis virgaurea из 300кг свежеприготовленных частиц астры "Золотой корень" (asteraclae L), которые обрабатывает смесью 920кг 60об.% - ного этанола и 2080кг 41,5об.% ного этанола. В пробе фильтрата определяют содержание рутина/ферозида, общее содержание флавоноидов и сухой остаток. Аналогичным образом получают вытяжку Fraxinus excelsior из 460г свежеприготовленных частиц ясеня (aleaceae), которые обрабатывают смесью 800кг 60об.% - ного этанола и 1700кг 46,5об.% - ного этанола. В пробе фильтрата определяют содержание изофраксидина и сухой остаток. В заключение смешивают свежеприготовленные вытяжки трех компонентов лекарственного средства по изобретению, причем вытяжки берут в таких количествах, что в целевой смеси активные компоненты находятся в соотношении: Populus : Solidago : Fraxinus = 6 : 2 : 2. Получают лекарственный состав Phytodolor RN, содержащий 60% вытяжки Populus tremula, 20% вытяжки Solidago virgaurea и 20% вытяжки Fraxinus excelsior, а также 45,6об.% спирта. Весь процесс получения лекарственного средства в готовом виде, пригодном для употребления, осуществляется за 2 - 3 дня. "Фитодолор" можно использовать не только для немедленного лечения ревматических заболеваний, но, в большей степени, в качестве основного терапевтического агента. В качестве примера основного терапевтического действия ниже воспроизведены результаты исследований в ревматологическом отделении госпиталя, в частности, в форме РОЭ-значений. Можно видеть явное снижение этих значений. С уверенностью можно сказать, что, благодаря применению препарата, воспалительная активность ревматологических заболеваний, выраженная в терминах С-активного протеина, явно снижается. Некоторые результаты приведены в табл.1. Необходимо иметь в виду, что пациенты в обеих группах, участвующи х в исследованиях, дополнительно подвергались длительной основной терапии, которая была начата задолго до начала испытаний. Во время исследования на 5 пациентах, страдающи х ревматическим артритом, которые уже подвергались лечению, в результате дополнительного применения "Фитодолора" наблюдались изменения исходных значений в трех из пяти случаев в испытании на осаждение эритроцитов и в четырех из пяти случаев с Сактивным протеином в течение четырех недель. Исследование влияния "Фитодолора" (композиции согласно изобретению) на синовиальную фибробластовую клеточную культуру. Для исследования цитостатического действия испытуемой композиции определяли действие "Фитодолора" на фазы клеточного цикла. Отбирали синовиальные клетки пациентов, прооперированных по поводу поражения кристовидной связки, и после 10 пассажей эти клетки подвергали испытанию. Под оптическим микроскопом определили, что синовиальные клетки хорошо переносили добавление (24ч) препарата при разбавлении от 1 : 100. Поэтому применяли для экспериментов следующие разбавления испытуемой композиции: 1 : 100, 1 : 500, 1 : 1000 и 1 : 10000. Методика определения фаз клеточного цикла заключалась в следующем. Культуры инокулировали по 50000 клеток на 1мл и единицу на микрокамеру. Четырехкратное определение. После 24ч периода адаптации и 48ч инкубации в культуральной среде, к которой добавляли испытуемую композицию в указанных разбавлениях, в течение 30мин прибавляли аналог тимидина - бромдезоксиуридин (БрДУ) концентрации 20 микромолярной. БрДУ маркировал клетки, которые находились в S-фазе клеточного цикла. Далее осуществляли следующие этапы исследования: проникновение Твин 20 в ПБС через клеточную оболочку, добавление моноклонального антитела, маркировку связанного антитела кролик-анти-мышьродамин-конъюгатом, фиксирование, количественное окрашивание ДНК бис-амино-оксадиолом (БАО дифференцирование и оценка фазы покоя Co, постепенное автоматическое измерение зависимой от ДНК голубой флюоресценции окрашенных БАО ядер клеток, а также зависимой от БрДУ красной флюоресценции, причем из всех наблюдаемых клеток отмечали те клетки, которые находилась в S-фазе. Величины из обоих банков данных наносили на одну и ту же гистограмму, так что из отдельных классов гистограммы можно было считать принадлежность клеток к фазам Co/1, S и C2 + М. Получили следующие результаты по изучению фаз клеточного цикла. Композиция "Фитодолор" в нетоксичных концентрациях оказывает тормозящее пролиферацию действие, причем установлена зависимость от концентрации. Этот эффект можно было наблюдать в области разбавлений от 1 : 100 до 1 : 1000 (табл.2). Процентное содержание фаз клеточного цикла было рассчитано из четырех отдельных определений. Проведенные испытания четко показали, что композиция "Фитодолор" приводит к сокращению S-фазы клеток и, тем самым, к уменьшению клеток, которые проходят клеточный цикл. Часть клеток более длительный период времени находится в фазе C2. Это является благоприятным для клеток, поскольку в этой фазе действует механизм восстановления ДНК. Не происходит повышения митотического индекса, так как он лежит у эти х клеток ниже 1%. Таким образом, вышеописанные испытания подтверждают, что композиция "Фитодолор" на чисто растительной основе обладает биологической активностью, свойственной основным терапевтическим средствам. Исследуемая композиция "Фитодолор" вызывает подобно цитостатическим препаратам патогенетически релевантную пролиферацию клеток при хроническом полиартрите различного происхождения с хорошей переносимостью. Двойное действие препарата (с одной стороны, свойство снижать боль и воспаление), а также установленное свойство действия подобного цитостатистическому, позволяет использовать его в качестве основного терапевтического средства для долговременного лечения хронического полиартрита.