Сполука, що прискорює виведення імунних комплексів

Вещество, ускоряющее выведение иммунных комплексов, состоящее из белка А, отличающееся тем, что дополнительно содержит ковалентно связанные с белком А лактозные группы в количестве 3-9 на одну молекулу белка А. (19) (21) 96114194 (22) 11.11.1996 (24) 15.11.2000 (33) UA (46) 15.11.2000, Бюл. № 6, 2000 р. (72) Белозоров Олексій Павлович, Шуляк Леонід Миколайович, Мавров Іван Іванович 29689 связываться с иммунными комплексами, а не свободными иммуноглобулинами. Однако при этом он не ускоряет выведение ИК из крови. Как было показано проведенными нами исследованиями, введение в молекулу белка А с помощью ковалентных связей лактозных групп придает ему способность ускорять выведение ЦИК. Указанное свойство было обнаружено при содержании 3-9 групп лактозы на одну молекулу белка А. Возможны различные методы введения в молекулу белка А лактозных групп (Wilson G., J. Biol. Chem., 1978, v. 253, n. 7, p. 2070-2072., Belensky D.M. et al., Biochem. Biophys. Acta, 1984, v. 786, n. 3, p. 197-203.). Нами была использована методика G. Wilson (1978). Генноинженерный белок А производства НИИ иммунологии (Любучаны, Россия) инкубировали с лактозой и цианборгидридом (Serva) при 37°С в течение различных интервалов времени (12144 часов) после чего освобождали высокомолекулярные продукты диализом и гельхроматографией на Акрилексе П-6. Содержание лактозных групп в белке А после лактозилирования определяли фенольно-сернокислотным методом (Dubois М., et al., Anal. Bioсhem., 1956, v. 28, р. 350-356). Для определения способности лактозилированного белка А (ЛБА) ускорять выведение ЦИК вводили мышам внутрибрюшинно 1 мг бычьего сывороточного альбумина через день в ЗФР в течение 3 недель для вызывания иммунокомплексного процесса. Затем внутривенно вводили животным ЛБА в дозе 150 мкг, после чего через 20 и 40 минут определяли содержание ЦИК в крови твердофазным иммуноферментным методом (Белозоров А.П., Лаб. дело, 1989, n. 3, с. 24-26). Полученные результаты сравнивали с исходным уровнем ЦИК. Методика определения ЦИК состояла в том, что на полистироловые планшеты фиксировали очищенный препарат C1q инкубацией в течение 18 часов при 4°С, свободные сайты связывания забивали лошадиным сывороточным альбумином, после чего инкубировали в лунках исследуемые образцы сыворотки, разведенные в 20 раз раствором, содержащим 0,01 М ЭДТА, 0,05% твин 20 и 0,05 М забуференный физиологический раствор. После отмывания инкубировали в лунках конъюгат проти IgG мыши-пероксидаза хрена. После отмывания определяли пероксидазную активность – субстратно-буферной смесью, содержащей офенилендиамин (0,5 мг/мл) и 0,07 М цитратный буфер с рН 4,9. В таблице приведены результаты, полученные при определении активности ЛБА, содержащего 5,5 лактозных групп на одну молекулу белка А. Контрольным животным внутривенно вместо ЛБА вводили физиологический раствор. Полученные результаты свидетельствуют о выраженном снижении уровня ЦИК после внутривенного введения ЛБА вследствие элиминации ЦИК из крови клетками печени. В отличие от средств, стимулирующих клетки РЭС и другие клеточные элементы, ответственные за выведение ЦИК из циркуляции, ЛБА включает дополнительный путь удаления ЦИК, что может иметь преимущество в условиях блокады основных механизмов элиминации ЦИК. При изучении комплексов другого состава было установлено, что заметная активность обнаруживается только при наличии трех и более лактозных групп на одну молекулу ЛБА. Увеличение количества групп более 9 на молекулу ЛБА представляет известные технические трудности. Оно требует значительно более длительной инкубации в процессе синтеза и характеризуется снижением выхода продуктов реакции. В связи с этим можно считать, что оптимальными свойствами обладают ЛБА, содержащие 3-9 лактозных групп на одну молекулу ЛБА. Таблица Влияние ЛБА на уровень ЦИК у мышей опыт контроль n 5 5 уровень ЦИК в крови (Е 492) исходный 20 мин 0,843 0,033 0,570 0,04* 0,760 0,05 0,835 0,038 40 мин 0,575 0,815 * р