Спосіб одержання речовини, яка має протипухлинну активність

Спосіб одержання речовини, яка має протипухлинну активність, що включає екстракцію активної' речовини, який відрізняється тим, що як сировину використовують гонади мідій Mytilus galloprovincialis, які екстрагують сумішшю хлороформ : спирт (1:1) з наступним відділенням органічної фази, випарюванням її у вакуумі при температурі нижче ЗО" С, розчиненням у гексані з подаванням 85 % водного спирту в співвідношенні 1:1, відділенням гексанової фази і випарюванням у вакуумі при температурі нижче 30° С контрольованих іноземними державами, то ці обставини утруднюють одержання потрібної кількості сировини. До того ж, варто мати на увазі, що надмірний збір визначеного виду в одному районі, особливо на прибережному шельфі, може зробити несприятливий вплив на біорізноманіття й екологічну обстановку. Можливості порівняно простої марикультури чорноморського молюска Mytilus galloprovincialis, що володіє колосальною бюпродуктивністю, є економічними передумовами його використання як вихідної сировини для виробництва біологічно активних речовин У пропонованому способі одержання біологічно активної речовини використовуються гонади чорноморських мідій Mytilus galloprovincialis У гонадах мідій, як у репродуктивних органах, містяться в підвищених концентраціях біологічно активні речовини бюантиоксиданти, каротиноїди. У пропонованому способі одержання біологічно активної речовини не використовуються дорогі методи хроматографування на полімерах, а вихід кінцевого продукта в 10-12 разів більше, ніжу відомому способі В основу винаходу спосіб одержання речовини, яка має проти во пухлин ну активність, поставлена задача шляхом використання доступної і широко розповсюдженої природної сировини - гонад чорноморських мідій Mytilus galloprovincialis, забезпечити одержання кінцевого продукту. Поставлена задача досягається тим, що в способі одержання речовини, яка має противопухлинну активність, активну речовину одержують з гонад чорноморських мідій Mytilus galloprovincialis О 4106 шляхом екстракції сумішшю хлороформ:спирт, відділення хлороформенної фази, випарювання її у вакуумі при температурі нижче 30°С до одержання залишку з виходом 0,5-0,7% від сирої маси гонад. Спосіб реалізується таким чином. З чорноморських мідій Mytilus galloprovincialis виділяють сирі гонади. Вихід гонад залежить від стадії половозрілості молюсків. Для одержання гонад використовують мідії 3,4-й стадії" половозрілості по п'ятибальній шкалі. Сирі гонади гомогенізують у суміші хлороформ.етанол (1:1), центрифугують і залишок повторно гомогенізують у суміші хлороформ:этанол (2:1). Екстракт тричі відмивають водою від неліпідних домішок. Хлороформенну фракцію упарюють у вакуумі при температурі нижче 30°С. До отриманого ліпідного залишку додають гексан і 85%-ний водяний спирту співвідношенні (1:1) і суміш струшують у ділильній лійці. Гексанову фракцію відокремлюють, а водноспиртову фракцію екстрагують гексаном двічі Гексанові фракції поєднують і упарюють у вакуумі до постійної маси. Приклади реалізації способу. Приклад 1. З 3 кг мідій Mytilus galloprovincialis, вирощених у марігосподарствах Криму, виділяли 100 г сирих гонад. Сирі гонади гомогенізували в суміші хлороформ:этанол (1:1), центрифугували і залишок повторно гомогенізували в суміші хлороформ:зтанол (2:1) Екстракт тричі відмивали водою від неліпідних домішок Хлороформенну фракцію упарювали у вакуумі при температурі 25°С. До отриманого ліпідного залишку додавали гексан і 85%-ний водяний спирт у співвідношенні (1:1) і струшували суміш у ділильній лійці Гексанову фракцію відокремлювали, а водно-спиртову екстрагували гексаном ще 2 рази Гексанові фракції поєднували й упарювали у вакуумі до постійної маси. Вихід 0,5 г на сиру масу гонад Одержували ліпідну композицію зі змістом а-токоферолу ЗО мгна 1 г речовини. Приклад 2. З 10 г гонад чорноморських мідій, використовуючи прийоми, описані в прикладі 1, одержували ліпідну композицію з виходом 0,07 г на сиру масу гонад. Зміст а-токоферолу, визначений методом рідинної хроматографії, - 40 мг на 1 г речовини Дані по проти во пухлинної активності ліпідної композиції, отриманої з гонад мідій роду Mytilus galloprovmaalis, представлені в таблиці. Дослідження проводилися авторами в НДІ експериментальної діагностики і терапії пухлин Російського онкологічного центру. Комп'ютерна верстка А Крулевский Таблиця Гальмування росту солідних пухлин при підшкірному введенні* речовини, що володіє п роти вопухл инною активністю № пп. Доза (мг/кг) 1 2 3 4 5 5 10 20 40 80 Кількість мишей у групі 10 20 20 20 10 Са 755 Пухлина Льюис Акатол 62 72" 67** 76** 47 42 63* 46* 64* 61 58 45 51 *** *** Примітка: * - щоденні ін'єкції протягом п'яти днів; ** - середні дані з двох серій експериментів; *** - дослідження не проводилися. Усі дані для розрахунку показників у групах №№ 2, 3, 4 вірогідно відрізняються від контролю без лікування, Р < 0,05 . З таблиці випливає що ліпідна композиція виявляє противопухлинний ефект при щоденному підшкірному введенні в діапазоні доз від 5 до 80 мг/кг. Ліпідна композиція, що отримана з гонад чорноморських мідій М galloprovincialis по пропонованому способу, інгібує ріст 3-х солідних пухлин на 42-76%. Гальмування росту пухлини навіть на 30% робить препарат перспективним для створення лікарської форми (див. Апрышко Г Н., Нехорошее М.В). Речовина, одержувана по запропонованому способу, відрізняється низькою токсичністю і не викликає загибелі мишей, а також інших токсичних явищ у вивченій схемі терапії. Залежність противопухлинного ефекту від дози в розглянутому діапазоні доз відсутня. Це свідчить про те, що ліпідна композиція діє як модифікатор біологічних реакцій і може бути використана для створення нового препарату, застосовуваного в онкологічних клініках. Переваги способу одержання речовини, що володіє проти во пухл инною активністю, полягають у наступному. Сировинна база для одержання речовини не обмежена, а пропонована технологія забезпечує високий вихід речовини. Спосіб не вимагає складних І дорогих методик виділення. Крім того, отримана речовина відрізняється низькою токсичністю і може бути використана для створення нового препарату для онкологічних клінік Підписне Тираж 37 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601