Спосіб діагностики гіперреактивності тромбоцитів, асоційованої з порушенням обміну сірковмісних амінокислот, як предиктора тромбофілії

Спосіб діагностики гіперреактивності тромбоцитів, асоційованої з порушенням обміну сірковмісних амінокислот, як предиктора тромбофілії, що включає забір крові, стабілізування її після забору, розділення з отриманням багатої тромбоцитами 3 45019 ням стабілізованої крові 5хв. при 300g при 1822°С. Бідну тромбоцитами плазму отримують центрифугуванням багатої тромбоцитами плазми 20хв. при 1500g при 18-22°С. В багатій тромбоцитами плазмі визначається кількість тромбоцитів і при необхідності вона розводиться бідною плазмою до концентрації 250 000 клітин в 1мкл. Аліквоти багатої тромбоцитами плазми змішуються з розчинами L-цистеїну та L-гомоцистеїну, виготовленими ex tempore на 0,9% фізіологічному розчині натрію хлориду, у співвідношенні 9:1 в кінцевих концентраціях 0,1мМ. В контроль додається аналогічна кількість фізіологічного розчину. Проби інкубують при 37°С 15 хвилин, після чого визначається агрегація тромбоцитів на агрегометрі з використанням АДФ в кінцевих концентраціях 0,625 та 2,5мкМ. Реєструються ступінь агрегації (%), швидкість агрегації за перші 30с (%/хв.); час агрегації (с). Всі дослідження виконуються в дублях. Як інформаційні показники використовують ступінь та швидкість агрегації тромбоцитів та характер агрегаційної кривої. Підвищена чутливість тромбоцитів до проагрегантної дії гомоцистеїну та цистеїну діагностується, якщо після інкубації багатої тромбоцитами плазми з розчинами L-цистеїну та L-гомоцистеїну різко змінюється характер та параметри агрегаційної кривої - у відповідь на 0,625мкМ АДФ зворотна агрегація змінюється на незворотну агрегацію, у відповідь на 2,5мкМ АДФ двухфазна крива змінюється на однофазну, ступінь агрегації зростає 4 більш ніж на 50%, збільшується швидкість агрегації. Конкретний приклад застосування способу. У трьох пацієнтів з підвищеними рівнями гомоцистеїну та цистеїну досліджено агрегацію тромбоцитів, індуковану АДФ в кінцевих концентраціях 0,625 та 2,5мкМ, і виявлено, що її показники відповідають варіанту норми. Паралельно дослідження агрегації тромбоцитів була проведено запропонованим способом: в аліквоти багатої тромбоцитами плазми пацієнтів були внесені розчини гомоцистеїну та цистеїну і після 15 хвилин інкубації при 37°С досліджена агрегація тромбоцитів, результати порівнювались з контрольною пробою, яка інкубувалась з таким же об'ємом фізіологічного розчину. Як видно з таблиці, у пацієнта 1 збільшується ступінь та швидкість (більш ніж на 50%) АДФіндукованої агрегації тромбоцитів в присутності гомоцистеїну, у пацієнта 2 - в присутності гомоцистеїну та цистеїну, а пацієнт 3 виявився не чутливим до дії гомоцистеїну та цистеїну. Крім того, у пацієнтів 1 та 2 змінився характер кривої, індукованої 0,625мкМ АДФ, із зворотної на незворотну. Отже, у пацієнтів 1 та 2, на відміну від пацієнта 3, є латентна гіперреактивність тромбоцитів, асоційована з порушеннями обміну гомоцистеїну та цистеїну. Ці пацієнти потребують контролю за функціональним станом тромбоцитів, корекції порушень обміну гомоцистеїну та цистеїну і при прогресуванні змін призначення антиагрегантів. Таблиця Спосіб діагностики гіперреактивності тромбоцитів, асоційованої з порушенням обміну сірковмісних амінокислот Пацієнт Пацієнт 1 Пацієнт 2 Пацієнт 3 Проба Контроль Гомоцистеїн Цистеїн Контроль Гомоцистеїн Цистеїн Контроль Гомоцистеїн Цистеїн Ступінь агрегації, % АДФ, 0,625мкМ АДФ, 2,5мкМ 6,5 (100%) 56,1 (100%) 34,6 (532%) 99,2 (176%) 8,2 (126%) 54,2 (96,6%) 10,1 (100%) 63,5 (100%) 48,5 (480%) 100 (157%) 38,5 (381%) 100 157%) 8,4 (100%) 61,2 (100%) 10,1 (120%) 63,4 (103%) 9,6 (114%) 60,7 (99%) Таким чином, запропонований спосіб дозволяє виявити формування тромбофілії, асоційованої з порушеннями обміну сірковмісних амінокислот, ще Комп’ютерна верстка Л. Купенко Швидкість агрегації, % за хв. АДФ, 0,625мкМ АДФ, 2,5мкМ 10,8 (100%) 26,9 (100%) 28,9 (267%) 43,2 (160%) 11,2 (103%) 28,9 (107%) 15,4 (100%) 34,8 (100%) 58,2 (378%) 72,1 (207%) 21,3 (138%) 65,4 (188%) 12,3 (100%) 42,1 (100%) 12,6 (102%) 46,5 (110%) 11,8 (96%) 44,2 (105%) до розвитку клінічних проявів, і своєчасно обрати відповідні засоби корекції для профілактики тромботичних ускладнень. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601