Спосіб зменшення віддаленого метастазування

Спосіб зменшення віддаленого метастазування шляхом обмеження дисемінації злоякісних пухлин, який відрізняється тим, що здійснюють одноразове заморожування пухлини, наприклад за допомогою кріоаплікатора, довівши температуру на поверхні пухлини по термодатчику до -10...-15 °С, протягом від 30 с до 3,5 хв. з наступним природним відтаванням тканин. (19) (21) u200903782 (22) 17.04.2009 (24) 10.11.2009 (46) 10.11.2009, Бюл.№ 21, 2009 р. (72) КУЗЬМЕНКО ОЛЕКСАНДР ПЕТРОВИЧ, ЄВТУШЕНКО ОЛЕГ ІВАНОВИЧ, ТОФАН АНАТОЛІЙ ВАСИЛЬОВИЧ (73) НАЦІОНАЛЬНА МЕДИЧНА АКАДЕМІЯ ПІСЛЯДИПЛОМНОЇ ОСВІТИ ІМ. П.Л. ШУПИКА 3 45326 тавання зумовлює їх девіталізацію чи кріоруйнацію. Як моделі пухлин, здатних метастазувати у віддалені органи використовували штам карциноми Льюїса (3LL). Експериментальні дослідження проведені на експериментальних тваринах (миші лінії С-57 BL вагою 20-25г розплідника віварію Інституту експериментальної патології, онкології та радіобіології (ІЕПОР ) ім. Р.Є. Кавецького НАН України. Усі кількісні дані обробляли за методом варіаційної статистики з використанням критеріїв Стьюдента-Фішера. Прикладом конкретного виконання можуть бути наступні: Приклад 1. Експериментальній тварині миші лінії С-57 BL вагою 20г була перещеплена карцинома Льюїса (3LL) 20-30% суспензією клітин у ізотонічному розчині в об'ємі 0,1мл під шкіру зовнішньої поверхні нижньої третини гомілки. Через 11 діб після трансплантації пухлинних клітин, коли пухлина досягла у миші 1см3, виконали під етамінал-натрієвим наркозом (препарат вводили в черевну порожнину) хірургічне видалення пухлини у такій послідовності: тварину фіксували на спеціально виготовленому верстаті, волосяний покрив видаляли за допомогою депіляторію. Подовжнім розрізом в асептичних умовах розтинали шкіру, змащену 5% розчином йоду, відсепаровували її, прагнучи не порушувати капсули пухлини. Після видалення пухлини операційний розріз пошарове зашивали шовком N4/0 і змащували 5% йодом. Для визначення ступеня віддаленого метастазування карциноми Льюїса (3LL), експериментальну тварину забивали методом декапітації під ефірним наркозом на 25 добу після прищеплення. Метастази класифікували залежно від їх розмірів на великі (понад 3мм), середні (від 3 до 1мм) і дрібні (від 1 до 0,1мм). Під мікроскопом або під лупою в кожній долі легень підраховували кількість та розміри метастазів. Об'єм пухлини визначали за формулою Шрека. У конкретному випадку виявле3 но 32 метастази загальним об'ємом 146мм . Приклад 2. Експериментальній тварині миші лінії С-57 BL вагою 22г була перещеплена карцинома Льюїса (3LL) 20-30% суспензією клітин у ізотонічному розчині в об'ємі 0,1мл під шкіру зовнішньої поверхні нижньої третини гомілки. Через 10 діб після трансплантації пухлинних клітин, коли 3 пухлина досягла у миші 1см , під етаміналнатрієвим наркозом виконали кріогенну дію на пухлину за допомогою інструменту оригінальної конструкції. В подальшому усі дії здійснювали під етамінал-натрієвим наркозом з розрахунку 40мг/кг маси. Препарат вводили в черевну порожнину. Тварину фіксували на спеціально виготовленому верстаті, волосяний покрив видаляли за допомогою депіляторію. Як кріоагет використали рідкий азот. Температурний контроль у циклі заморожуКомп’ютерна верстка А. Крижанівський 4 вання-відтавання здійснювали за допомогою мідьконстантанових термопар. Що давало можливість контролювати швидкість охолоджування і кінцеву температуру робочої частини кріоапарату, підтримуючи таким чином однакові температурні характеристики інструментів у всіх дослідах. Термодатчики вводили на межі нормальної і пухлинної тканини з таким розрахунком, щоб датчики знаходилися у крайніх положеннях по більшому діаметру пухлини. Для стандартизації процесу заморожування-відтавання, охолоджування пухлини припинили з досягненням на термодатчиках температури -10°С … -15°С. Тривалість одноразового заморожування склала 1,5хв. Наступним було природне відтавання під час якого відбувається кріоруйнація ракових клітин. Для визначення ступеня віддаленого метастазування карциноми Льюїса (3LL), експериментальну тварину забивали методом декапітації під ефірним наркозом на 25 добу після прищеплення. Метастази класифікували залежно від їх розмірів на великі (понад 3мм), середні (від 3 до 1мм) і дрібні (від 1 до 0,1мм). Під мікроскопом або під лупою в кожній долі легень підраховували кількість та розміри метастазів. Об'єм пухлини визначали за формулою Шрека» У конкретному випадку вияв3 лено 9 метастазів загальним об'ємом 41мм . При оцінці отриманих результатів в двох групах експериментальних тварин(30 тварин основної і 30 тварин контрольної групи) відмічено, що кількість експериментальних тварин з карциномою Льюїса (3LL), що мали відділені метастази зменшилась у порівнянні з хірургічним видалення пухлини з 87,5±12 до 58,81±12, середня кількість метастазів на одну експериментальну тварину з 20,1±6,6 до 7,0±2,1, середній об'єм на одну експе3 до риментальну тварину з 129,1±50,9мм 3 26,2±10,3мм . Досвід застосування заморожування пухлин з метою зменшення частоти віддаленого метастазування, що був апробований у відділі імуномодуляції Інституту експериментальної патології, онкології та радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України засвідчив про його високу ефективність. Результати проведених експериментальних досліджень можуть слугувати експериментальним обґрунтуванням до використання кріодії у клінічній практиці. Джерела інформації 1. Володько НА. Метастазування злоякісних пухлин. Роль факторів пухлинного мікрооточення. Львів.Медицина світу,2002. - 200с. 2. Ахмедов Б.П. Метастатические опухоли. М., Медицина, 1984.-186с. 3. Балицкий К.П. Метастазирование опухолей. Патогенетические аспекті. К., Наукова думка. 1991.200с. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601