Спосіб зменшення рівня метастазування експериментальних пухлин

Спосіб зменшення рівня метастазування експериментальної карциноми, який поєднує хірургічне видалення пухлини та застосування антикоагулянту, який відрізняється тим, що перед операцією та протягом 6 діб післяопераційного періоду застосовується низькомолекулярний гепарин, зокрема надропарин кальцію Винахід відноситься до галузі онкологи, а саме до експериментальної онкології У патогенезі метастазування ключове значення надається системі коагуляції крові Підвищене фібриноутворення, внаслідок активації фактору X згортання крові та протромбіну раковими прокоагулянтами, сприяє формуванню метастатичних пухлин шляхом обкутування фібриновою сіткою циркулюючих ракових клітин та полегшення їх адгезії до капілярної стінки Фібрин також приймає активну участь в анпогенезі, що відбувається у метастатичній пухлині, оскільки ендотеліальні клітини організовуються у судинні канали тільки при наявності фібринового матриксу Здогадно, антикоагулянти, зокрема, низькомолекулярні гепарини, знижуючи інтенсивність фібриноутворення, можуть стати на перешкоді реалізації ВІДПОВІДНИХ етапів метастатичного процесу У експериментальних дослідженнях було показано, що введення нефракцюнованого гепарину лабораторним тваринам перед внутрішньосуд инною інокуляцією щурам суспензії клітин карциносаркоми Walker-256 призводило до пригнічення адгезії пухлинних клітин до ендотелію судин, зменшення КІЛЬКОСТІ пухлинних колоній, а також сприяло подовженню латентного періоду та збільшенню тривалості життя тварин (Agostmo D, Grossi CE, Chffton ЕЕ Effect of hepann on circulating Walker 256 carcinosarcoma cells J Natl Cancer Inst 1991, 27 17) гресію пухлинного процесу Крім того, застосування гепарину може призводити до розвитку гепариніндукованої тромбоцитопенії та феномену пперкоагуляцм після його ВІДМІНИ Наступним прототипом даного дослідження є застосування з метою пригнічення пухлинного процесу непрямого антикоагулянту пелентану у мишей із перещепленою легеневою карциномою Льюіс Введення препарату проводилося на фоні променевої терапії пухлини та сприяло зменшенню КІЛЬКОСТІ легеневих метастазів на 32% порівняно з контрольною групою (В М Зяблицкий, Л В Любина, Т Ю Михальская Усиление антиметастатического действия лучевой и химиотерапии ингибиторами системы гемостаза // Медицинская радиология и радиационная безопасность, 1998, № 5, С 1 4 - 1 7 ) Недоліком даного прототипу є те, що застосування нефракцюнованованого гепарину при злоякісному процесі сприяє посиленню анпогенезу у пухлинних вогнищах та стимуляції адгезивноагрегаційних властивостей тромбоцитів, що, в свою чергу, чинить потенціюючий вплив на про Недоліком даного прототипу є те, що у проведеному експерименті не застосовувалося хірургічне видалення пухлини, а також не використовувалися сучасні, широковживані, потужні та безпечні антикоагулянти, зокрема низькомолекулярні гепарини Задачею заявляемого винаходу є досягнення ефективного пригнічення метастатичного процесу в експерименті за рахунок видалення первинної пухлини та гальмування фібриноутворення і пухлинної неоваскуляризацм Заявлена задача досягається тим, що перед операцією та протягом 6 діб післяопераційного періоду застосовується низькомолекулярний гепарин, зокрема надропарин кальцію Спосіб лікування виконували наступним чином мишам лінії С57ВІ/6 із перещепленою в лапку легеневою карциномою Льюіс на 18 добу після ю 54277 трансплантації, коли первинна пухлина досягала об'єму 0,8 - 1,0см3, лапка з пухлиною видалялася Тварин розділено на дві групи дослідну та контрольну Мишам дослідної групи за 2 год до операції підшкірно вводилося ЗМО надропарину кальцію Дану разову дозу отримували шляхом розведення 0,3мл препарату активністю 7500МО у 25мл фізіологічного розчину, 0,01 мл якого вводилося миші Після видалення пухлини ін'єкції надропарину кальцію проводили раз на день протягом 6 діб В якості контрольної групи взято мишей, яким проводилося виключно видалення пухлини, але надропарин кальцію не вводився Показниками дисемінації карциноми Льюіс служили визначення об'єму легеневого метастазування та рівня ангіогенного фактору, який продукується пухлинними клітинами з метою стимуляції утворення кровоносних судин у пухлині Для вивчення динаміки об'єму легеневого метастазування та рівня ангіогенного фактору в певні терміни досліду, а саме до видалення пухлини та на 3, 7, 14 і 21 добу після операції, мишей забивали шляхом декапітацм і вилучали кров Візуально досліджували легеневу поверхню мишей, вимірювали розміри метастазів, вираховували об'єм кожного, та шляхом підсумовування визначали об'єм легеневого метастазування Кров використовували для дослідження рівня ангіогенного фактору імуноферментним методом Динаміку об'єму легеневого метастазування відображено у таблиці 1 На 18 добу після перещеплення карциноми (у таблиці - "до операції") метастази в легенях мишей візуально не реєструвалися Далі, згідно отриманим даним, у тварин обох досліджуваних груп за термінами обстеження після операції спостерігалося поступове зростання об'єму легеневого метастазування При порівнянні його динаміки в обох групах простежено, що темпи збільшення об'єму легеневого метастазування у мишей дослідної групи були ПОВІЛЬНІШИМИ Приріст об'єму легеневого метастазування у ДОСЛІДНІЙ групі на 7 добу після операції по відношенню до третьої склав 18,9мм3 (122,7%), на 14 добу в порівнянні з 7-ою - 23,7мм3 (69,1%), а на 21 добу після операції - на 14,2мм3 (24,5%) по відношенню до 14-ої доби У тварин контрольної групи різниця в аналогічні терміни дослідження склала, ВІДПОВІДНО, 38,6ММ 3 (197,9%), 25,9мм3 (44,6%) та 15мм3 (42,9%) Різниця між показниках об'єму легеневого метастазування в усіх випадках була високодостовірною Як видно з таблиці 1, на протязі всього післяопераційного періоду показники об'єму легеневого метастазування у тварин, де вводився надропарин кальцію, були суттєво меншими за показники контрольної групи На 3 добу після операції об'єм легеневого метастазування у ДОСЛІДНІЙ групі був меншим, порівняно з контрольною групою, на 4,1мм3 (21,03%), на 7 добу після операції - на 23,8мм3 (40,96%), на 14 добу після операції 26,0мм (30,95%) та на 21 добу після операції 47,8мм3 (39,83%) При цьому р < 0,001 у всіх випадках В таблиці 2 подано результати дослідження пухлинного ангіогенного фактору 3 даної таблиці видно, що на 3 добу після операції відмічалося значне зниження рівня ангіогенного фактору, що пов'язано із видаленням первинної пухлини У тварин дослідної групи рівень ангіогенного фактору зменшувався на 3 добу після операції на 138,02нг/мл (84,1%) Однак у подальших термінах дослідження спостерігалося його зростання, що підтверджує протікання дисемінації карциноми Льюіс Так, на 7, 14 та 21 добу після операції рівень ангіогенного фактору зростав, ВІДПОВІДНО, на 2,86нг/мл (11%), 4,18нг/мл (14,5%) та 17,97нг/мл (54,4%) порівняно з попередніми термінами дослідження У мишей контрольної групи на 3 добу після видалення пухлини спостерігалося зниження рівня ангіогенного фактору на 141,98нг/мл (83,0%) Подальший приріст концентрації ангіогенного фактору становив на 7, 14 та 21 добу, ВІДПОВІДНО, 7,89нг/мл (27,2%), 6,11нг/мл (16,6%) та 55,98нг/мл (130,1%) У всіх випадках різниця між показниками у різні терміни дослідження була високодостовірною (р < 0,001) Як видно з таблиці 2, показники ангіогенного фактору в контрольній групі у всі терміни дослідження перевищували ВІДПОВІДНІ показники у ДОСЛІДНІЙ групі На 3 добу після операції рівень ангіогенного фактору у тварин дослідної групи був менший за групу контролю на 3,01нг/мл (10,37%), на 7 добу - на 8,04нг/мл (21,78%), на 14 добу - 9,97нг/мл (23,18%), на 21 добу - 47,98нг/мл (48,46%) При цьому у всіх випадках р < 0,005 Проведена, поряд з видаленням первинної пухлини, терапія надропарином кальцію засвідчила про гальмування метастатичного процесу та зменшення рівня екскреції ангіогенного фактору злоякісними клітинами Слід зазначити наявність кореляції між змінами об'єму метастатичного ураження легень та рівня ангіогенного фактору в сироватці крові мишей із прещепленою карциномою Льюіс за умови застосування операції видалення первинної пухлини та введення надропарину кальцію Виявлений феномен дії представника групи низькомолекулярних гепаринів - надропарину кальцію, а саме сприяння зменшенню дисемінації ракового процесу після видалення пухлини, може бути пов'язаний з порушенням процесів адгезії метастатичних клітин до ендотелію внаслідок зниження фібриноутворення, та, як наслідок цього, їх подовженої циркуляції та загибелі у кровотоці за рахунок захисних дій організму Цілком імовірно, що препарат також сприяє пригніченню пухлинного росту шляхом інгібування процесів неоваскуляризацм у метастатичних вогнищах за рахунок зниження утворення фібрину, що сприяє їх існуванню у т з "дрімаючому" стані 54277 Таблиця 1 Зміни об'єму легеневого метастазування у мишей із перещепленою карциномою Льюіс після видалення первинної пухлини та застосування надропарину кальція, мм3 Групи Дослідна група (п = 15) Контрольна група (п = 10) Періоди обстеження До операції Р 3 доба 7 доба р Р 14 доба Р 21 доба < 0 001 72, 2 ±0,1 0 < 0 001 15 3 ± 0 1 < 0 001 34,3 ±0,1 < 0,001 58 0 ± 0 , 2 0 < 0 001 19 5 ± 0 1 < 0 001 58,1 ±0,2 < 0,001 84 0 ± 0 , 3 < 0 001 120 0 ± 0 , 2 Примітка п - КІЛЬКІСТЬ тварин Таблиця 2 Зміни рівня ангіогенного фактору в мишей із перещепленою карциномою Льюіс після видалення первинної пухлини та застосування надропарину кальцію, нг/мл сироватки Групи Періоди обстеження До операції Р Дослідна 164,03 ± < 0,001 група (п = 0,015 10) Контрольна 171,00 ± група (п = < 0,001 0,014 10) 3 доба Р 7 доба 26,01 ± 0,01 < 0,001 28,87 ± 0,02 < 0,001 33,05 ±0,1 < 0,001 51,02 ±0,23 29,02 ± 0,01 < 0,001 35,91 ± 0,02 < 0,001 Р Примітка п - КІЛЬКІСТЬ тварин ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24 14 доба 43,02 ± 0,01 Р 21 доба < 0,001 99,00 ± 0,01