Спосіб отримання тримірного остеопрогеніторного трансплантата

Спосіб отримання тримірного остеопрогеніторного трансплантата, який включає первинне виділення мезенхімальних стовбурових клітин з червоного кісткового мозку, їх культивування у поживному середовищі до необхідної кількості, нанесення культивованих мезенхімальних стовбурових клітин на клітинний носій, який відрізняється тим, що клітинний носій розміщують у силіконованому флаконі з культуральним середовищем та здійснюють дозоване нанесення культивованих клітин на носій кожні 30-40 хвилин по 10-20 млн. клітин до досягнення загальної кількості клітин на носії не менше 1 млн. на 1 см2 поверхні носія, після чого здійснюють культивування клітин на носії у флаконі з культуральним середовищем протягом 1-3 тижнів зі зміною середовища кожну 3 добу. (19) (21) u200905927 (22) 09.06.2009 (24) 25.11.2009 (46) 25.11.2009, Бюл.№ 22, 2009 р. (72) ГРИНЬ ВЛАДИСЛАВ КОСТЯНТИНОВИЧ, КЛИМОВИЦЬКИЙ ВОЛОДИМИР ГАРИЙОВИЧ, ПОПАНДОПУЛО АНДРІЙ ГЕННАДІЙОВИЧ, ОКСИМЕЦЬ ВОЛОДИМИР МИХАЙЛОВИЧ, ОБЕРЕМКО АЛЬОНА ВОЛОДИМИРІВНА, БУШЕ ВІКТОРІЯ ВАЛЕРІЇВНА (73) ДОНЕЦЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМ. М. ГОРЬКОГО, ДЕРЖАВНА УСТАНОВА "ІНСТИТУТ НЕВІДКЛАДНОЇ ТА ВІДНОВНОЇ ХІРУРГІЇ ІМ. В.К. ГУСАКА" АКАДЕМІЇ МЕДИЧНИХ НАУК УКРАЇНИ 3 45773 культивованих клітин на носій кожні 30-40 хвилин по 10-20млн. клітин до досягнення загальної кількості клітин на носії не менш 1млн. на 1см2 поверхні носія, після чого здійснюють культивування клітин на носії у флаконі з культуральним середовищем на протязі 1-3 тижнів зі зміною середовища кожну 3 добу. Спосіб здійснюють таким чином. Здійснюють первинне виділення мезенхімальних стовбурових клітин з червоного кісткового мозку та їх культивування до необхідної кількості. Клітинний носій («Остеоматрикс», «Тутопласт», демінералізований кістковий матрикс) промивають 0,9% розчином хлориду натрію, потім поміщають у силіконований флакон з поживним середовищем для культивавуння мезенхімальних стовбурових клітин. Через 2 години у флакон додають від 10 до 20млн. мезенхімальних стовбурових клітин. Флакон поміщають у СО2 -інкубатор з температурою повітря 37°С, 5% вмістом СО2 та 95% вологістю. Кожні 30-40 хвилині у флакон з клітинним носієм додають наступну кількість мезенхімальних стовбурових клітин. Таку процедуру здійснюють декілька разів (2 чи більше), доки загальна кількість клітин на клітинному носії не буде складати не менш 1млн. клітин на 1см2 площі клітинного носія. Менша кількість клітин призводить до уповільнення процесу формування міжклітинних взаємозв'язків та проростання клітин у Комп’ютерна верстка А. Крижанівський 4 середину носія. Культивування клітин на носії здійснюють на протязі 1-3 тижнів в залежності від об'єму клітинного носія. Зміну поживного середовища здійснюють кожні 3 доби. Культивування менш 1 тижня не дозволяє клітинам створити на поверхні носія моношар, міжклітинні взаємозв'язки та міцний зв'язок з носієм. Культивування більш 3х тижнів призводить до того, що на поверхні носія утворюється 2-4 рядний шар клітин, що є небажаним, тому що може привести до їх відкріплення від носія та вимивання з кров'ю або рановим ексудатом з реципієнтного ложа. Перевага наведеного способу полягає в тому, що під час культивування клітин у силіконованому флаконі на клітинному носії вони створюють міцні зв'язки між собою та носієм, проростають безпосередньо у клітинний носій на глибину до 40-50мкм, що сприяє збереженню більшої частки клітин у реципієнтному ложі, формуванню зв'язку трансплантованих клітин з клітинами кісткової тканини реципієнтного ложа та формуванню кісткової тканини de novo у місці трансплантації. Джерела інформації: 1. Щепкина Е.А., Кругляков П.В., Соломин Л.Н. и др. Клинический опыт трансплантации аутологичных мезенхимальных стволових клеток при лечении ложных суставов длинных трубчатых костей //Травма.-2007,-Т.8, №3.-С.248-252. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601