Спосіб визначення температурних умов інкубування еритроцитів з пео-1500

Спосіб визначення температурних умов інкубування еритроцитів з ПЕО-1500, що включає інкубування еритроцитів з ПЕО-1500 при досліджуваних температурах і їх деструкцію при відповідних температурах, який відрізняється тим, що деструкцію клітин проводять шляхом інкубування еритроцитів у розчині, що містить 4,0 М NaCl. (19) (21) u200911892 (22) 20.11.2009 (24) 25.05.2010 (46) 25.05.2010, Бюл.№ 10, 2010 р. (72) ШПАКОВА НАТАЛІЯ МИХАЙЛІВНА, ОРЛОВА НАТАЛІЯ ВІКТОРІВНА, АЛЕКСАНДРОВА ДАР'Я ІВАНІВНА, ДЕНИСОВА ОЛЬГА МИКОЛАЇВНА (73) ІНСТИТУТ ПРОБЛЕМ КРІОБІОЛОГІЇ І КРІОМЕДИЦИНИ НАЦІОНАЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ НАУК УКРАЇНИ 3 50069 Інкубування суспензії здійснювали при 37 і 0 °С протягом 2 хв. Потім 50 мкл цієї суспензії при відповідних температурах 37 і 0 °С додавали до 1 мл розчину, що містив 4,0 М NaCl. Кінцевий гематокрит складав 0,4 %. Після 5 хв. інкубації при 37 і 0 °С проби центрифугували. Далі методом спектрофотометрії при довжині хвилі 543 нм визначали гемоліз за кількістю гемоглобіну в надосадку, який виражали у відсотках по відношенню до 100 % гемолізу еритроцитів у присутності детергенту тритона Х-100 (кінцева концентрація 0,1 %). Аналогічно здійснювали спосіб для еритроцитів бика. Одержані результати наведені в Таблиці. З даних таблиці видно, що при 0 °С рівень гемолізу еритроцитів людини і бика у розчині, що містить 4,0 М NaCl, є менший, ніж при температурі 37 °С. 4 Це свідчить про те, що оптимальною температурою інкубування еритроцитів з ПЕО-1500 є температура 0 °С. Для перевірки результатів, що були отримані пропонованим способом, визначали температурні умови інкубування еритроцитів людини і бика з ПВО-1500 за прототипом [1]. З даних, наведених у Таблиці, видно, що результати, отримані при перенесенні еритроцитів у розчин 4,0 М NaCl, відповідають даним, що були отриманні при заморожуванні - відігріві клітин. Це свідчить про те, що пропонований спосіб, як і прототип, дозволяє однозначно оцінювати ефективність температур інкубування еритроцитів з ПЕО1500, але при цьому він є більш простим, потребує в 4 рази менше часу і дозволяє значно знизити матеріальні витрати. Таблиця Рівень гемолізу (%) еритроцитів людини і бика після деструкції (n=10) Еритроцити людини Еритроцити бика Заявлений спосіб 0 °С 37 °С 36±6 26±5 60±7 9±3 Джерела інформації: 1. Денисова О. М., Жегунов Г. Ф., Бабійчук Л. О. Кріоконсервування еритроцитів тварин під за Комп’ютерна верстка І.Скворцова За протoтипом 22 °С 0 °С 11,8±3,8 8,2±2,6 3,0±0,3 2,0±0,2 хистом поліетиленоксиду // Біологія тварин. - 2004. - Т. 6, № 1-2 – С. 104-110. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601