Селективне і диференційне живильне середовище для виділення штамів ентерогеморагічних e.coli 0157:н7 агар

Селективне й диференційне живильне середовище для виділення штамів ентерогеморапчних Е соїі 0157 Н7, що містить м'ясо-пептонний агар, сорбіт, жовч великої рогатої худоби, кристалвюлет, яке відрізняється тим, що має в своєму складі цитрат заліза і тіосульфат натрію, співвід ношення компонентів в даному середовищі становить м'ясо-пептонний агар - 35 гр сорбіт -12 гр жовч великої рогатої худоби - 4,5 гр гіпосульфіт натрію - 5,0 гр цитрат-аміачне залізо -1,5 гр нейтральний червоний - 0,03 гр кристал-вюлет - 0,001 гр, при цьому суміш сухих компонентів являє собою гігроскопічний порошок жовтувато-червонуватого кольору, без запаху (залишкова волога не більше 7,0%), рН готового розчину 7,1 ± 0,2, стерилізацію здійснюють при 121 °С на протязі 15хв Галузь техніки до якої належить винахід медична, ветеринарна мікробіологія, ветеринарносанітарна експертиза, лабораторна діагностика Аналогом є Мак-Каша сорбітол агар [1] - селективне і диференційне середовище для визначення коліформних мікроорганізмів і кишкових патогенів в якому замість лактози використовується сорбіт Але це слабо селективне середовище, оскільки шпбіція росту конкурентної мікрофлори лише часткова і у випадку невеликої КІЛЬКОСТІ КЛІТИН 0157 Н7 в мікробній асоціації виділення чистої культури цих ешерихій ускладнене Прототипом технічного рішення є сухий поживний агар, який використовують для виділення і культивування різних груп мікроорганізмів [2] В основу винаходу поставлена задача розробки селективного диференційного живильного середовища для виділення із КЛІНІЧНОГО матеріалу Е соїі серовару 0157 Н7 Селективне й диференційне живильне середовище для виділення штамів ентерогеморапчних Е сої і, які належать до серовару 0157 Н7 з фекалій, патологічного матеріалу, продуктів харчування, води, об'єктів навколишнього середовища і містить згідно винаходу в своєму складі м'ясо-пептонний агар - 35гр, сорбіт - 12гр, жовч великої рогатої худоби - 4,5гр, гіпосульфіт натрію - 5,0гр, цитрат-аміачне залізо - 1,5гр, нейтральний червоний - О.ОЗгр, кристал-вюлет 0,001 гр Е соїі 0157 Н7 має домінуюче значення в групі ентерогеморапчних ешерихій [3] Характерною особливістю штамів цього серовару є відсутність здатності ферментувати сорбіт, в той час як 94% всіх Е соїі ферментують сорбіт на протязі 24 год Диференційні властивості даного середовища заключаються в комбінацій сорбіту і нейтрального червоного При зброджуванні цукру утворюється кислота, яка обумовлює зміну кольору індикатору, в результаті чого формуються рожево-червоні колони, якщо ізолят не ферментує сорбіт - колонії безбарвні Концентрація карбопдрату в даному середовищі вища, ніж в інших диференційних середовищах з метою кращої візуалізацм патогенів і мінімізації проблеми уповільненого ферментування Селективні властивості даного середовища забезпечуються додаванням бичої жовчі, яка є інгібітором росту Грам-позитивних мікроорганізмів, особливо ентеро- і стрептококів Концентрація жовчі вища, ніж у вихідному середовищі, що забезпечує більш інтенсивне пригнічення росту су о> со ю 53979 путньої мікрофлори Для інгібування росту цих бактерій також використано кристал-вюлет Для підвищення диференційних властивостей в середовище введено цитрат заліза і тіосульфат натрію, які дають можливість визначити продукування сірководню формуванням колоній з чорним центром Технічний результат Дослідження росту тестштамів Е соїі 0157 Н7, Е соїі 09 К99, Salmonella typhimunum, Streptococcus faecahs, Staphylococcus aureus, Proteus vulgans показало високу чутливість і селективність середовища Ростові властивості штамів Е соїі 0157 Н7 на середовищ Мак-Канкі і на 0157 Н7 агарі не відрізнялися Обидва середовища забезпечували ріст всіх досліджуваних штамів при ПОСІВІ 0,1 мл мікробної суспензії з розведення 10 6 через 24год інкубування при Т 37 ± 1°С у вигляді круглих, безколірних гладеньких колоній діаметром 2 ± 0,2мм 0157 Н7 агар характеризується більш ефективним інгібуванням росту колоній мікробів-асоціантів, зокрема Грам-позитивні стафілококи і стрептококи не росли при ПОСІВІ 0,1 мл чистої мікробної культури на протязі 48 ± 2год інкубування при 37 ± 1°С На сорбітол Мак-Канкі агарі спостерігався ріст Streptococcus faecahs та Staphylococcus aureus при ПОСІВІ культури з розведення 10 1 Ріст сальмонел характеризувався формуванням темно-рожевивих, дещо червоновуватих, гладеньких, блискучих з чорним центром колоній діаметром 1,9 ± 0,2мм Проведені дослідження засвідчили високу чутливість, диференційність і селективність створеного середовища Значні інгібуючі властивості у відношенні мікробів-асоціантів забезпечують ефективність середовища при дослідженні зразків з фекалій, патологічного матеріалу, об'єктів навколишнього середовища, продуктів харчування Вища концентрація цукру і комбінація цитрату заліза та гіпосульфіту забезпечують високі диференцію ючі властивості при дослідженні різних видів мікроорганізмів ВІДОМОСТІ, ЯКІ підтверджують можливість здійснення винаходу В якості білкової основи середовища можна використовувати будьякий сухий поживний агар виробництва підприємств біологічної промисловості (при проведенні досліджень було використано сухий поживний агар НПО "Питательные среды") Всі компоненти середовища є доступними для придбання без обмежень в організаціях по реалізації продукції хімічної промисловості ("Макрохим", "Укрреахим", "Укрхимэкспо", "Укрлаборреактив") Середовище просте в приготуванні і легко може бути освоєне на виробництво При виготовленні середовища відважені згідно пропису формули інгредієнти м'ясопептонний агар - 35гр, сорбіт - 12гр, жовч великої рогатої худоби - 4,5гр, гіпосульфіт натрію - 5,0гр, цитрат-аміачне залізо - 1,5гр, нейтральний червоний - О.ОЗгр, кристал-вюлет - 0,001 гр розмішували в ступці до гомогенного стану, вносили до 1л дистильованої води, кип'ятили 5хв, фільтрували через ватно-марлевий фільтр, автоклавували при 121 °С 15хв, охолоджували до 45 - 50°С й розливали на ч Петрі Готове середовище має світлочервонуватий колір, прозоре МІЦНІСТЬ студня забезпечує посів досліджуваних матеріалів без пошкодження поверхні Бібліографічні дані 1 March S В , Ratnam S Sorbitol-MacConkey medium for detection of Eschenchia coh 0157 H7 associated with hemorrhagic colitis // J of Clm Microbiol -1986 - V 23, №5 - P 869 - 872 2 Справочник специалиста ветеринарной лаборатории Под редакцией Ю П Смияна - К Урожай, 1987 -363 с 3 Nataro К, Kaper J В Diarrheagemc E coh // Clm Microbiol Rev -1988 -V11 -P -164-178 TOB "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24