Спосіб виявлення рнк вірусу геморагічної септицемії форелі за допомогою зворотно-транскриптазної полімеразної ланцюгової реакції

Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Спосіб виявлення РНК вірусу геморагічної септицемії форелі за допомогою полімеразної ланцюгової реакції, що включає виявлення в досліджуваних зразках специфічних фрагментів нуклеїнової кислоти (РНК) за допомогою зворотно-транскриптазної полімеразної ланцюгової реакції (ЗТ-ПЛР), який відрізняється тим, що для проведення ЗТ-ПЛР використовують штучно синтезовані вироджені олігонуклеотидні праймери з наступною послідовністю нуклеотидів:

NO-5F - 5'-TGTCYGTKCTTCTCTCYTATG - 3'

NO-7R - 5'-ATCATCTTKTCCACMGAG - 3',

де: Y=C/T, M=A/C, K=G/T.

Текст

Спосіб виявлення РНК вірусу геморагічної септицемії форелі за допомогою полімеразної ла 3 54336 4 Таблиця № циклу 1 2 3 4 Температура 95°С 95°С 63°С 72°С 72°С 10°С Використовують два штучно синтезовані вироджені олігонуклеотидні праймери з наступною послідовністю нуклеотидів: NO-5F - 5'-TGTCYGTKCTTCTCTCYTATG - 3' NO-7R - 5'-ATCATCTTKTCCACMGAG - 3', де: Y=C/T, M=A/C, K=G/T. Праймери NO-5F та NO-7R специфічні консервативній ділянці гена нуклеопротеїну (N) вірусу геморагічної септицемії форелі і забезпечують синтез фрагменту ДНК розміром 247 н. з. при температурі віджигу 63°С. Виродженість олігонуклеотидних праймерів підвищує специфічність та враховує відмінності нуклеотидного складу гена нуклеопротеїну вірусу геморагічної септицемії форелі різних генотипів. Приклад: пробу (гомогенат патологічного матеріалу, тощо) (1 г) поміщають у пластикову пробірку ємністю 1,5 см3 і додають 0,5 см3 деіонізованої води. Суміш струшують і центрифугують, після чого проводять виділення РНК набором реагентів для виділення РНК. З виділеної РНК за допомогою реакції зворотної транскрипції синтезують кДНК. Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Час 4 хв. 0,5 хв. 0,5 хв. 0,5 хв. 4 хв. Зберігання Кількість циклів 1 30 1 Отриману кДНК (0,003-0,005 см3) поміщають у пробірку ємністю 0,5 см3 і додають 0,02 см3 (5Х) ПЛР-буфера, 0,001 см3 dNTP, по 0,00015 см3 кожного з праймерів, 0,0005 см3 Taq-полімерази та 1 краплю мінерального масла. Вміст пробірки струшують і центрифугують, а потім переносять в термоциклер з активною регуляцією температури, наприклад "Терцик" (Росія), якому задають вищевказану програму. Аналіз результату ЗТ-ПЛР проводять в 1,5% гелі агарози з барвником - бромистим етидієм. В лунки агарозного гелю вносять 0,010-0,012 см3 ампліфікованої суміші. Після проведення електрофорезу фрагменти ДНК виявляють під ультрафіолетовим світлом. Результат ЗТ-ПЛР може бути оцінено візуально по наявності смужок, що відповідають продуктам реакції. Промислове застосування - для виявлення вірусу геморагічної септицемії форелі з родини Rhabdoviridae роду Novirhabdovirus у патологічному матеріалі. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Method for revealing of rna of trout hemorrhagic septicemia virus by means of polymerase chain reaction

Автори англійською

Deriabin Oleh Mykolaiovych, Haidei Olha Serhiivna, Holovko Anatolii Mykolaiovych, Ushkalov Valerii Oleksandrovych, Babkin Mykhailo Valeriiovych

Назва патенту російською

Способ выявления рнк вируса геморрагической септицемии форели при помощи обратно - транскриптазной полимеразной цепной реакции

Автори російською

Дерябин Олег Николаевич, Гайдей Ольга Сергеевна, Головко Анатолий Николаевич, Ушкалов Валерий Александрович, Бабкин Михаил Валерьевич

МПК / Мітки

МПК: A61K 39/39

Мітки: реакції, зворотно-транскриптазної, спосіб, виявлення, форелі, рнк, допомогою, ланцюгової, вірусу, септицемії, полімеразної, геморагічної

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/2-54336-sposib-viyavlennya-rnk-virusu-gemoragichno-septicemi-foreli-za-dopomogoyu-zvorotno-transkriptazno-polimerazno-lancyugovo-reakci.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб виявлення рнк вірусу геморагічної септицемії форелі за допомогою зворотно-транскриптазної полімеразної ланцюгової реакції</a>

Подібні патенти