Кон’югат рекомбінантних поліпептидів-аналогів білків антигенів вірусу імунодефіциту людини (віл), мічених ферментом пероксидазою

Кон'югат рекомбінантних поліпептидіваналопв білків антигенів вірусу імунодефіциту людини (ВІЛ), мічених ферментом пероксидазою, в якому застосовується фермент пероксидаза, який відрізняється тим, що окислена перйодатом натрію пероксидаза з'єднується з рекомбінантними поліпептидами-аналогами білків ВІЛ - ENV-1, ENV2, GAG пептиду Gag у 0,1 М карбонат-бікарбонатному буфері (рН 9,6) у співвідношенні 2М / 1М ВІДПОВІДНО, Переносять суміш у хроматографічну колонку з закритим вихідним отвором, додають сухий сефадекс G-25 у КІЛЬКОСТІ 1 /5 від загальної ваги суміші, закривають колонку і витримують у темряві при 19 - 22°С від 3 до 19 годин Потім проводять елюцію кон'югату згаданим буфером, блокують ВІЛЬНІ реактивні групи, додаючи розчин NaBH4 у 0,1 мМ NaOH з концентрацією 5мг/мл - спочатку 1/2 0 частину від об'єму кон'югату (ЗО хвилин при 0°С), а потім 3/20 від об'єму кон'югату (1 година при 0°С) Після ЦЬОГО діалізують кон'югат при 4°С проти 0,1 М фосфатного буферу (рН 7,2) 20 - 24 години Додають стабілізатори і зберігають кон'югат у рідкому стані при 0 - 10°С 6 МІСЯЦІВ Приклад 2 Спосіб отримання кон'югату рекомбінантного поліпептиду ENV-1 або ENV-2, що є аналогами білків антигенів ВІЛ-1 або ВІЛ-2, з пероксидазою Всі процедури виконують аналогічно прикладові 1 Пропоновані кон'югати порівнювали з кон'югатом білку А з пероксидазою Порівнювали чутливість та специфічність визначення антитіл проти антигенів ВІЛ в сироватках та плазмі крові людини Досліджено вибірку з 750 реактивних сироваток та вибірку з 1300 сироваток, що включають набір негативних та потенційно хибно реактивних сироваток, які не містять антитіл до ВІЛ сироватки отримано від різних контингентів 00 со (О ю 57638 осіб - донорів, вагітних жінок, від осіб, хворих на або Ід М) в сироватці та плазми крові людини туберкульоз, ревматоїдний артрит, гепатити В і С, Використана література а також від онкологічних хворих Визначення про1 Wilson M B & Nakane Р К In the водили за відомою методикою [3] твердофазного "Immunofluorescence and Related Techniques" імуноферментного аналізу (Knapp W , Holubar К ,Wick G , eds), Elsevier, Amsterdam/New-York, p 215-221 Показано, що пропоновані кон'югати підвищують чутливість тест-системи до 99,7%, а специфі2 Tijssen P and Kurstak E Highly efficient and чність - до 99,5 % в порівнянні з ВІДПОВІДНИМИ поsimple methods for the preparetion of peroxidase and казниками - 99,1% і 98,36% при застосуванні active peroxidase-antibody conjugates for enzyme пероксидазного кон'югату, до складу якого входить immunoassays Analyt Biochem 1984, vol 136, білок А pp 451-457 Таким чином, пропоновані кон'югати забезпе3 A T Михайлов, В Н Симирский "Методы иммуночують більш надійне виявлення антитіл проти ВІЛ химического анализа в биологии развития" М (незалежно від класу імуноглобулінів - Ig G, Ід А "Наука", 1981 Комп'ютерна верстка О Воробей Підписано до друку 05 07 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна