Тест-система для виявлення аутоантитіл до ендогенного або антитіл до екзогенного інсулінів в сироватках та плазмі крові людей (іфа-ат-інс)

Тест-система для виявлення аутоантитіл до ендогенного або антитіл до екзогенного інсулінів в сироватках або плазмі крові людей (ІФА-АТ - інс), що побудована за принципом гетерогенного імуноферментного аналізу, включає імуносорбент та кон'югат, яка відрізняється тим, що на тверду фазу сорбується напівсинтетичний інсулін людини, а як кон'югат використовуються моноклональні антитіла до імуноглобулінів людини, мічені ферментом Винахід належить до медицини та може використовуватися для проведення діагностичних імунологічних досліджень сироваток крові людей з метою виявлення антитіл до інсуліну Виявлення аутоантитіл до ендогенного інсуліну та контроль їх рівня мають важливе КЛІНІКОдіагностичне значення у визначенні груп ризику захворювання на цукровий діабет серед дитячого та дорослого населення [1, 2] Необхідність кількісної оцінки вмісту антитіл до екзогенного інсуліну у хворих на цукровий діабет з'явилася в результаті встановлення кореляції між важкістю КЛІНІЧНОГО протікання та прогнозом захворювання, строками терапії інсуліном та появою антитіл до нього [3] Відома імуноферментна тест-система [4] для виявлення антитіл (AT) до інсуліну в сироватках та плазмі крові людей В основі тест-системи лежить використання суміші інсулінів свинячого, бичачого та рекомбінантного людського в якості антигену з імунодомшантними епітопами, що реагують з антитілами до інсуліну Як кон'югати використовуються політональні кролячі антитіла до імуноглобулінів людини, що мічені ферментом (пероксидазою хрону) В основу винаходу поставлено завдання створити тест-систему, побудовану за принципом гетерогенного імуноферментного аналізу [5], з використанням напівсинтетичного інсуліну людини, нанесеного на тверду фазу та моноклонального кон'югату, що дає змогу виявляти аутоантитіла до ендогенного та антитіла до екзогенного інсуліну в сироватках або плазмі крові людей з підвищеною чутливістю та специфічністю незалежно від типу діабету та стадії захворювання Приклад 1 Визначення антитіл до інсуліну в сироватці хворої К 1964 року народження Діагноз инсулінзалежний цукровий діабет, тяжка форма в стані декомпенсації Визначення проводять за відомою методикою [5] твердофазного імуноферментного аналізу (ТІФА) Для цього 5мкл сироватки крові хворого вносять у планшет-імуносорбент з фіксованим на ньому напівсинтетичним інсуліном людини Планшет шкубують протягом бОхв у термостаті при температурі 37°С, відмивають 4 рази, вносять в усі заглиблення планшета по ЮОмкл робочого розчину кон'югату, міченого ферментом, та шкубують протягом ЗО хвилин при температурі 37°С Після 6-кратного відмивання планшету вносять розчин проявника з хромогеном, витримують у темряві 20хв і потім зупиняють ферментативну реакцію кислотою Облік результатів реакції проводять на спектрофотометрі Оптична густина зразка прямо пропорційне КІЛЬКОСТІ антитіл у сироватці Значення КІЛЬКОСТІ антитіл до інсуліну в сироватці хворого, визначену при застосуванні нашої тест-системи, порівнювали з даними, отриманими при використанні тест-системи "ORG-520", виробництва фірми "ORGentech" Досліджена двома тест-системами сироватка О (О ю 57640 Н , Алексеев Л П Иммунологические подходы к предикции инсулинзависимого сахарного диабета // Пробл эндокринол , 1999, №6, 3-9 2 Ch Verge, G S Eisenbarth/ Natural History of Autoimmumty in Type I Diabetes Melhtus // in Diabetes Melhrus, Eds by Le Roith D Taylor S I , Olefsky Y M Lippmcott-Raven, Philadelphia, New York, 1996, 287-297 3 Beaufort С E , Sodoyez J С , Koch M , Bruming G J , Sodoyez-Goffaux F Insulin autoantibodies and immune response to human insulin therapy in 24 Type 1 (insulin-dependent) diabetic children superiority of radio binding assay over solid phase assay// Diabetes Res Clm Pract, 1993, Jul, 21(1) 19-24 4 Immunometnc Enzyme Immunoassy for the quantitative determination of autoantibodies to bovine, porcine and recombmant human insulin ' "ORG 520", ORGentec Diagnostika GmbH, Mainz / Germany Таким чином, запропонована тест-система за5 Сорокина H В , Гаврилова E M , Егорова А М , безпечує виявлення антитіл до інсуліну, надійна Донецкий И А Использование иммуноферментнопри використанні, має високу специфічність та го анализа для контроля активности антисыворочутливість ток к инсулину // Ж микробиол , эпидемиол и иммунол , 1985, №4, 73-76 Використана література 1 Зверева Я С , Дубинкин И В , Зилов А В , Таклас хворого була ідентифікована як позитивна за наявністю антитіл до інсуліну Приклад 2 Визначення чутливості та специфічності запропонованої тест-системи Досліджували сироватки отримані зі станції переливання крові (29 достеменно негативних сироваток) та з відділення клінічної фармакології Інституту ендокринологи та обміну речовин (15 достеменно позитивних сироваток) Всі сироватки досліджено в 3-х повторностях кожною з двох тест-систем за описаною методикою 3 15 позитивних сироваток показано наявність антитіл до інсуліну в 14, що складає 93,3 % чутливості, з 29 негативних зразків виявилися дійсно негативними 27 сироваток (93,1% специфічності) в пропонованій тест-системі 3 використанням тест-системи "ORG-520", виробництва фірми "ORGentech" було виявлено 11 позитивних сироваток з 15 зразків, що складає 73,3% чутливості, з 29 негативних сироваток - 24 зразка (82,7% специфічності) Комп'ютерна верстка О Воробей Підписано до друку 05 07 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна