Спосіб визначення вмісту циркулюючих ендотеліальних клітин у плазмі крові

Спосіб визначення вмісту циркулюючих ендотеліальних клітин у плазмі крові, що полягає в отриманні суспензії ендотеліоцитів у аутологічній цитратній плазмі з наступним підрахунком їх у камері Горяєва під мікроскопом, який відрізняється тим, що клітини у мікропрепараті визначають люмінесцентно-мікроскопічним методом на принципових засадах поляризованої флуоресценції. (19) (21) u201011243 (22) 20.09.2010 (24) 10.03.2011 (46) 10.03.2011, Бюл.№ 5, 2011 р. (72) СУСЛА ОЛЕКСАНДР БОГДАНОВИЧ, МИСУЛА ІГОР РОМАНОВИЧ (73) ДЕРЖАВНИЙ ВИЩИЙ НАВЧАЛЬНИЙ ЗАКЛАД ТЕРНОПІЛЬСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМЕНІ І.Я. ГОРБАЧЕВСЬКОГО 3 57841 гують упродовж 15-20хв. зі швидкістю 30003500об/хв для осадження ендотеліальних клітин. Потім надосадову плазму видаляють, а отриманий осад суспендують у 0,1мл 0,9% розчину натрію хлориду і перемішують. Ендотеліальні клітини підраховують у 2-х сітках камери Горяєва у полі зору мікроскопа за методом поляризованої флуоресценції, а кількість ендотеліоцитів виражають їх вмістом віл крові. Приклад 1. Кров із ліктьової вени в кількості 4,5мл внесли у пластикову пробірку, що містила 0,5мл 3,8% розчину натрію цитрату. Суміш центрифугували 20хв. зі швидкістю 1500об/хв., після чого 1мл плазми змішали з 0,2мл натрієвої солі аденозиндифосфату в концентрації 1мг/мл, струшували впродовж 10хв. і повторно центрифугували в попередньому режимі. Супернатант перенесли в іншу пробірку і центрифугували впродовж 20хв. зі швидкістю 3000об/хв, після чого надосадову плазму видаляли, а отриманий осад суспендували в 0,1мл 0,9% розчину натрію хлориду і перемішували скляною паличкою. Вміст ендотеліоцитів у вигляді полігональної форми клітин з яскрозеленим світінням визначали за методом поляризованої флуоресценції і підраховували у 2-х сітках камери Горяєва, а результат виражали кількістю клітин з розрахунку на 1л крові. Комп’ютерна верстка Н. Лиcенко 4 Приклад 2. За наведеним способом визначали вміст ендотеліальних клітин у 23 хворих Із термінальною нирковою недостатністю, які перебували на хронічному гемодіалізі. Завдяки запропонованому способу визначення клітин було методично зручним, а результати високоточні, тоді як за відомим способом вказаний аналіз вимагав значних затрат часу, відрізнявся складністю і не забезпечував необхідного рівня точності. Таким чином, запропонований спосіб забезпечує точніше, а отже інформативніше, порівняно із способом-прототипом, визначення вмісту ендотеліальних клітин у плазмі крові, може бути використаний в медичній практиці для об'єктивної оцінки функціональної активності ендотелію в нормі і патології. Джерела інформації, які слід взяти до уваги: 1. Hladovec J. Circulating endothelial cells in acute myocardial infarction and angina pectoris / J. Hladovec, I. Prerovsky, V. Stance [et al.] // Klin. Wochenshr. - 1978. - Vol.56. - P.1033-1036. 2. Ridler P.J. Polarized fluorescence studies of electrically oriented DNA-dye solutions / Peter J. Ridler and Barry R. Jennings // International Journal of Biological Macromolecules. - 1980. - Vol.2, №5. P.313-317. Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601