Спосіб одержання трансплантатів плодових оболонок

Спосіб одержання трансплантату плодових оболонок, який включає їх відмивання, експозицію в середовищі консервування, яке містить димексид, розрізання на фрагменти, заморожування і зберігання при низькій температурі, який відрізняється тим, що димексид беруть у концентрації 5%, а заморожування здійснюють поетапно спочатку заморожують до -20°С, потім переносять на 1015хв у пари азоту із наступним зануренням у рідкий азот Винахід відноситься до галузі медицини, зокрема трансплантологи Плодові оболонки (хоріальна й амнютична) містять широкий спектр біологічно активних речовин, протеїни, ЛІПІДИ, ферменти та ш Наявність цих речовин дозволяє застосовувати плодові оболонки для лікування різноманітних патолопй Даних про способи одержання трансплантатів хоріальної оболонки в літературі не знайдено Відомий спосіб одержання трансплантату амнютичної оболонки [1] Амнютичну оболонку відмивають розчином Ерла, який містить пеніцилін, стрептоміцин, неоміцин, амфотерезин, і розміщують на нітроцелюлозні фільтри Фільтри з оболонкою розрізають на фрагменти розміром Зх4см, вміщують у стерильні контейнери з розчином Дюльбекко і гліцерином, і заморожують до -80°С Недоліком цього способу є нетривалий термін зберігання трансплантату (до 1 року), а також великі матеріальні витрати, пов'язані з використанням дорогих середовищ для відмивання і заморожування оболонки Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб одержання трансплантату амнютичної оболонки шляхом заморожування до -70°С [2] Амнютичну оболонку відмивають у сольовому розчині і вміщують послідовно у фосфатні буфери, які містять 4, 8 і 10% димексиду (ДМСО) Після цього її переносять на нітроцелюлозний фільтр і розрізають на фрагменти Одержані фрагменти укладають у контейнер із 10% розчином ДМСО і заморожують в холодильнику до -70°С Недоліки способу При -70°С плодові оболонки можуть зберігатися тільки до 1 року При більш тривалому зберіганні вони втрачають свої ВИХІДНІ властивості (життєздатність, склад і т д ) , що робить їх непридатними для трансплантації Експозиція оболонки у декількох середовищах консервування ускладнює спосіб, бо потребує додаткових трудових і часових витрат Зберігання у середовищі крюпротектора передбачає використання контейнерів відносно великих розмірів, що потребує додаткових площ у крюбанку і ВІДПОВІДНИХ економічних витрат Трансплантати, заморожені до -70°С, складно транспортувати на великі відстані, так як для цього необхідні спеціальні холодильники Задачею винаходу є створення такого способу одержання трансплантатів плодових оболонок, який би забезпечував їхнє тривале зберігання при одночасному спрощенні і зменшенні вартості способу Ця задача вирішується тим, що в способі одержання трансплантатів плодових оболонок, який включає їхнє відмивання, експозицію у середовищі консервування, яке містить димексид, розрізання на фрагменти, заморожування і зберігання при низькій температурі, димексид беруть у 5% концентрації, а заморожування здійснюють поетапно спочатку заморожують до -20°С, потім переносять на 10-15хв у пари азоту із наступним зануренням у рідкий азот Вибір 5% концентрації ДМСО для обробки плодових оболонок обумовлений тим, що така (22)30 10 2002 (24)15 07 2003 СО 00 ю 58223 концентрація не є токсичною для клітин і, в той же час, проявляє крюзахисний ефект Поетапне заморожування забезпечує поступову адаптацію клітин плодових оболонок до низьких температур, виключаючи таким чином ризик ушкодження при зануренні у рідкий азот Трансплантати плодових оболонок, одержані способом, що заявляється, можуть зберігатися у життєздатному стані необмежений час, при цьому вони зберігають свою СТІЙКІСТЬ, еластичність, легко зшиваються голкою Після розморожування 8085% епітеліальних клітин зберігають свою життєздатність, а сполучнотканинні елементи - ЦІЛІСНІСТЬ мембранних структур Технологія одержання трансплантатів не потребує значних витрат праці і часу, спеціального дорогого устаткування і матеріалів Можливість зберігання оболонок без середовища консервування дає можливість зменшити розміри контейнерів, що закладаються на зберігання, і таким чином зекономити місце у сховищі, а також зменшити витрати азоту Трансплантати за необхідності можуть бути перенесені у судину Дьюара і транспортовані до місця призначення Приклад здійснення способу Оболонки заготовлюють із плаценти, одержаної під час операції кесарева січення 3 оболонок видаляють кров, ВІДДІЛЯЮТЬ амнютичну оболонку від хоріальної, вміщують в окремі флакони з фізіо Комп'ютерна верстка Н Лисенко логічним розчином і ДВІЧІ відмивають Потім оболонки переносять у флакони з консерванотом, який містить 0 2л 0 9% NaCI, 250мг канаміцину або гентаміцину і 10мл ДМСО (5%), витримують у ньому ЗОхв Потім амнютичну й хоріальну оболонки вміщують в окремі стерильні лотки і розрізають на фрагменти розміром 5х10см Фрагменти укладають у поліамідні контейнери, які герметизують і маркірують Заморожують поетапно спочатку до 20°С, потім вміщують на 10-15хв у пари азоту, після чого занурюють у рідкий азот і зберігають до моменту використання У випадку одержання трансплантатів для використання в офтальмологи, оболонки після експозиції в консерванті вміщують на нітроцелюлозні фільтри епітеїлально-базальної мембраной уверх і разом із фільтрами розрізають на квадрати розміром 2х2см, після чого вміщують у контейнери Трансплантати плодових оболонок проходять обов'язкове дослідження на сифіліс, ВІЛ, гепатити В і С, краснуху, герпес, ЦМВ, токсоплазмоз, мікоплазму і бактеріальну забрудненість Джерела інформації 1 Shwu-Huey Lee, MD, and Sheffer С G Tseng, MD Amniotic Membrane Transplantation for Persistent Epithelial Defects with liberation 2 Panda A-, Dua H S , Azuara-Blanco A , Pillar С Amniotic membrane transplantaion in ophthalmology (freshly preserved tissue) //Br J Ophthalmol 1999-83 P 748-752 Підписано до друку 05 08 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна