Спосіб лікування патогенно індукованого апоптозу гепатоцитів при захворюваннях печінки

Спосіб лікування патогенно індукованого апоптозу гепатоцитів при захворюванні печінки, що передбачає введення лікарських засобів, який відрізняється тим, ще вводять вітчизняний рослинний гепатопротектор "Артишоку екстракт" із розрахунку середньотерапевтичної лікувальної дози ОД50 протягом шести тижнів і більше. (19) (21) u201011186 (22) 20.09.2010 (24) 11.04.2011 (46) 11.04.2011, Бюл.№ 7, 2011 р. (72) МОРОЗ ВАСИЛЬ МАКСИМОВИЧ, РИКАЛО НАДІЯ АНАТОЛІЇВНА (73) ВІННИЦЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМ. М.І.ПИРОГОВА 3 58332 Проводиться введення з лікувальною метою вітчизняного рослинного гепатопротектору «Артишоку екстракт. Здоров'я» із розрахунку середньотерапевтичної лікувальної дози ОД50 протягом шести тижнів і більше. Застосування даного препарату дозволяє зменшити рівень фрагментації ДНК ядер печінкових клітин, як показника патогенно індукованого апоптозу, що підтверджується методом проточної цитометрії. Спосіб лікування патогенно індукованого апоптозу гепатоцитів при захворюваннях печінки, який передбачає введення вітчизняного рослинного гепатопротектору «Артишоку екстракт. Здоров'я» із розрахунку середньотерапевтичної лікувальної дози ОД50 протягом шести тижнів і більше є ефективним методом зменшення загибелі гепатоцитів шляхом апоптозу при гострих і хронічних ураженнях печінки запального і дистрофічного ґенезу, що буде корисним для застосування у дорослих та дітей з даною патологією. Приклад: Двадцяти чотирьом статевонезрілим щурам з вихідною масою тіла 50-60г інтрагастрально через шлунковий зонд вводили 20% олійний розчин ССІ4 в дозі 0,1 мл/100 г маси двічі на тиждень протягом трьох місяців. Паралельно в якості пиття замість води тваринам давали 5% розчину етанолу для моделювання хронічного токсичного гепатиту. Восьми щурам паралельно із гепатотоксинами щодня протягом шести тижнів перорально вводили гепатопротектор «Урсохол» (діюча речовина - урсодезоксихолієва кислота) у лікувальнопрофілактичному режимі із розрахунку ОД50. Перерахунок середньотерапевтичної лікувальної дози рекомендованої для людини на 1 кг маси тіла на масу тіла щура проводився за константою біологічної активності за методикою Ю. Р. Риболовлєва (1979, 1982). Іншій піддослідній групі тварин (8 щурів), які знаходилися за тих же умов експерименту, щоденно вводили гепатопротектор «Артишоку екстракт. Здоров'я». До контрольної групи увійшло 8 інтактних здорових щурів з ідентичною вихідною масою тіла. Після виведення тварин з експерименту під наркозом здійснювали забір тканини печінки для визначення фрагментації ДНК методом проточної цитометрії. З цією метою в стерильних умовах під капсулою з лівої великої частки із свіжого матеріалу вирізали шматочок тканини печінки розміром 0,5 см3, який негайно промивався стерильним 0,9% фізіологічним розчином NaCl і поміщався у фосфатно-сольовий буфер рН 7,4 (Sigma) в переносний холодильник з температурою +4/+8°С для подальшого дослідження вмісту ДНК в ядрах клітин печінки МПЦ. Комп’ютерна верстка Л. Купенко 4 Суспензії ядер з клітин печінки одержували за допомогою набору для дослідження ядерної ДНК «CyStain DNA» фірми «Partec» (Німеччина) відповідно до протоколу-інструкції виробника. Даний набір дозволяє швидко і одночасно проводити екстракцію ядер і мітити ядерну ДНК диамідинофеніліндолом (ДАПІ) [A. Krishan, P. D. Dandekar , 2005; Maier P., Wenk-Siefert I., Schawalder H.P., 1993]. Печінку подрібнювали на шматочки розміром приблизно 1-2 мм3 з наступною обробкою ДАПІ. Отриману нуклеарну суспензію тканини печінки пропускали через одноразові фільтри CellTrics з діаметром 50 мкм. Цитометричне дослідження фаз клітинного циклу та вимірювання кількості ДНК проводили в ядерній суспензії, отриманій зі шматочків свіжої печінки, не пізніше ніж через 2 години після виведення тварини з експерименту. Фрагментація ДНК виконана програмними засобами FloMax (фірма Partec, Німеччина) методом виділення Sub-G1 ділянки на ДНК-гістограмах, яка представлена на гістограмі інтервалом RN1. Цитофлуориметричний аналіз проводився на багатофункціональному науково-дослідному проточному цитометрі "Partec PAS" фірми Partec (Німеччина) у НДЦ ВНМУ ім. М. І. Пирогова. Для ініціації флуоресценції ДАПІ використовувалася ртутна УФ-лампа, реєстрація відбувалася в УФспектрі. Із кожного зразка нуклеарної суспензії аналізувалося не менше 20 тисяч подій. При цитофлуориметричному дослідженні було встановлено, що у тварин із хронічним токсичним гепатитом, які не отримували лікування рівень фрагментації ДНК печінкових клітин становив 5,32±1,66 % проти 2,57±0,55 % у інтактних тварин контрольної групи (р