Агаро-буферна сольова суміш (абсс) – середовище для постановки реакції преципітації при діагностиці лейкозу великої рогатої худоби

Агаро-буферна сольова суміш - середовище для постановки реакції преципітації з агару мікробіологічного, натрію хлористого, яка відрізняється тим, що вона додатково містить натрій фосфорнокислий двозаміщений, калій фосфорнокислий однозаміщении та метилоранж при наступному співвідношенні компонентів, мас % агар 2,2-2,7 натрій хлористий 0,08-1,2 натрій фосфорнокислий двозаміщений 0,80-0,90 калій фосфорнокислий однозаміщении 0,2-0,26 метилоранж 0,03-0,07 дистильована вода при рН 7.0+0.2 оешта Запропонований винахід відноситься до ветеринарної вірусологи та біотехнологм і може бути використаний при діагностиці лейкозу великої рогатої худоби (ВРХ), можливо застосування на підприємствах біологічної промисловості Існує спосіб одержання агара для мікробіологічних досліджень з морських водоростей шляхом кип'ятіння та відділення гелюподібної маси, промивання, концентрація та сушіння (А с СССР №254443, кл C08NB37/12, 1969) Цей спосіб не дає високої якості агару Для підвищення якості агару додають фосфатний буфер з рН 7,4±0,2 (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред М О Биргера, М Медицина, 1982, с 68) Найближчим за технічним рішенням, вибраним як прототип, є середовище сусло агар (А с СССР №1065475А, кл C12N1/20, от 07 01 84, Бюл №1) Для готування живильного сусло-агарового середовища стерильне нехмільне пивне сусло розводять водопровідною або дистильованою водою до змісту 7-8% вуглеводів по Баллингу, установлюють рН 7,0-7,4, потім додають 2,5-3% мікробіологічного агар-агару, кип'ятять до розчинення агару і фільтрують, потім розливають у стерильний посуд - матраци по ЗООмл Стерилізують при 0,5-0,7атм 40хв Після стерилізації значення рН сусла-агару повинне бути 6,8-7,0 Недоліком сусло-агарового середовища є недостатні ростові властивості В основу винаходу, що передбачається, поставлено задачу одержати агаро-буферну сольову суміш (АБСС) - середовище для постановки реакції преципітації з агару мікробіологічного, натрію хлористого (NaCI), шляхом додавання натрію фосфорнокислого двозаміщеного (ІЧагНРО^НгО), калію фосфорнокислого однозаміщеного (КН2РО4) та метилоранжу при наступному співвідношенні компонентів, мас % агар 2,2-2,7 натрій хлористий 0,08-1,2 натрій фосфорнокислий двозаміщений , , 0,80-0,90 калій фосфорнокислий однозаміщении 0,2-0,26 метилоранж 0,03-0,07 дистильована вода при рН 7,0±0,2 решта, щоб забезпечити використання середовища АБСС для постановки реакції преципітації при діагностиці лейкозу ВРХ Метиловий оранжевий (МО) (геліантин) (пдиметиламіноазотбензолсульфонат натрію) органічний синтетичний барвник, що використовують, як кислотно-азотний індикатор при титруванні розчинами сильних кислот, а також для визначення водневого показника (рН) середовища Перехід 1 00 ю 58721 забарвлення МО - від червоного до оранжевозеленого спостерігається в інтервалі значень рН 3,1-4,4 („Каталог сухих питательных сред, выпускаемых в СССР для медицинской бактериологии", М , 1980, в 1, С 14-15) Аналіз відомих технічних рішень в галузі ветеринарної вірусологи та біотехнологм дозволяє зробити висновок про відсутність ознак, що схожі з суттєвими ВІДМІННИМИ ознаками АБСС, що заявляється, та признати це рішення, ВІДПОВІДНИМ критерію „суттєві ознаки" Новий склад компонентів дозволяє знизити собівартість, підвищити ростові властивості середовища, що пропонується, та підвищити діагностичну ефективність при діагностиці лейкозу АБСС одержують таким чином Готують наважку агару мікробіологічного та піддають и промиванню у проточній (48 годин) та дистильованій воді (24 години) До розрахункового об'єму дистильованої води додають 2,4-2,5% агару (суха наважка), 0,08-1,2% (NaCI), 0,80-0,90 (Na2HPO4-2H2O), 0,20-0,26 (КН2РО4) та метилу оранжевого - 0,05% Суміш кип'ятять на повільному вогні при постійному помішуванні до повного розчину агару Після ЧОГО проводять автоклавування суміші при 1,2-1,4 атмосферах на протязі ЗО хвилин Рідку суміш, ще в гарячому стані центрифуговують при G200-300, надосадову рідину піддають люфілізацм Готову суху АБСС - середовище для постановки реакції преципітації при діагностиці лейкозу ВРХ, гомогенізують до одержання однорідної маси Готове сухе середовище за умов зберігання при 4°С придатне до використання на протязі двох років Приклад 1 Середовище готували за наведеною схемою при наступному співвідношенні компонентів, мас% агар 2,2 натрій хлористий 0,08 Комп'ютерна верстка Л Ціхановська натрій фосфорнокислий двозаміщений 0,80 калій фосфорнокислий однозаміщений 0,2 метилоранж 0,03 дистильована вода при рН 7,0±0,2 решта, Приклад 2 Те, що в прикладі 2 при наступному співвідношенні компонентів, мас% агар 2,7 натрій хлористий 1,2 натрій фосфорнокислий двозаміщений 0,90 калій фосфорнокислий однозаміщений 0,26 метилоранж 3,07 дистильована вода при рН 7,0±0,2 решта, Приклад З Те, що в прикладах 1 та 2 при наступному співвідношенні компонентів, мас% агар 2,4 натрій хлористий 1,0 натрій фосфорнокислий двозаміщений 0,86 калій фосфорнокислий однозаміщений 0,24 метилоранж 0,05 дистильована вода при рН 7,0±0,2 решта, В прикладі 3 інтенсивність росту і накопичення бактеріальної маси за період культивування (60 діб) була вищою і оптимальним є склад середовища наведений у цьому прикладі Приклад 4 Для постановки реакції преципітації при діагностиці лейкозу ВРХ ліофільне середовище АБСС, розчиняли у 200см3 стерильної дистильованої води і витримували в термостаті при 37°С три години Після розчинення, рН середовища доводили до 7,0±0,2 Середовище розливали у стерильні бактеріологічні пробірки по 4-4,5см3 і в похилому положенні коагулювали при 90°С протягом однієї години в апараті для інактивації сироватки крові Таким чином, АБСС - середовище для постановки реакції преципітації при діагностиці лейкозу ВРХ відповідає усім пред'явленим вимогам та є повноцінною основою для приготування ряду багатокомпонентних диференціальнодіагностичних середовищ Підписано до друку 05 09 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна