Синтетичне живильне середовище для культивування збудника бешихи свиней

Синтетичне живильне середовище, що містить: калій фосфорнокислий двозамінений, магній сірчанокислий семиводний, лимонну кислоту, залізо лимоннокисле аміачне, гліцерин, воду дисти льовану, яке відрізняється тим, що додають аспарагін, глюкозу, середовище Ігла-МЕМ при наступному співвідношенні компонентів, мас. %. L-аспарагін 0,4-0,5 калій фосфорнокислий двозамінений 0,035-0,05 лимонна кислота 0,18-0,2 залізо лимонно-аміачне 0,004-0,005 гліцерин 2,5-3,0 глюкоза 1,2-1,5 магній сірчанокислий семиводний 0,04-0,05 Ігла-МЕМ 20-50 вода дистильована до 100 рН 7,2±0,2. Корисна модель відноситься до ветеринарної мікробіології, а саме до виготовлення живильних середовищ, для культивування збудника бешихи свиней. Використання передбачається в галузі ветеринарної медицини та біологічної промисловості для одержання алергенів, які використовують для прижиттєвої діагностики бешихи свиней Існують живильні середовища для культивування збудника бешихи, такі як бульйон Хоттінгера, бульйон Мартена, МПБ [„Лабораторные исследования в ветеринарии. Бактериальные инфекции: Справочник / Сост. Б.И. Антонов, В.В. Борисова, П.М. Волкова и др ; Под ред. Б.И. Антонова. - М.: Агропромиздат, 1986]. Недоліком відомих живильних середовищ є вміст білкових компонентів живильного середовища, які ускладнюють отримання алергенів, які б не давали неспецифічних імунобіологічних реакцій. Прототипом рішення, що заявляється, є синтетичне живильне середовище [патент України №55922 от 23 07.2002, КЛ.А61К39/04, C12N1/100], яке використовують для культивування туберкуліногенних штамів мікобактерій. До його складу входять калій фосфорнокислий двозаміщений, магній сірчанокислий семиводний, лимонна кислота, залізо лимоннокисле аміачне, гліцерин, вода дистильована. містить- калій фосфорнокислий двозамінений, магній сірчанокислий семиводний, лимонну кислоту, залізо лимоннокисле аміачне, гліцерин, воду дистильовану, шляхом додавання аспарагіну, глюкози, середовища Ігла - MEM при слідуючому співвідношенні компонентів, мас.%. L - аспарагін - 0,4-0,5, калій фосфорнокислий, двозамінений 0,035- 0,05, лимонна кислота 0,180,2, залізо лимонно-аміачне 0,004-0,005, гліцерин 2,5-3,0, глюкоза-1,2-1,5, магній сірчанокислий, семиводний 0,04-0,05, Ігла - МЕМ-20-50, вода дистильована - до 100, рН-7,2±0,2, щоб забезпечити ефективність синтетичного живильного середовища для культивування збудника бешихи свиней. Синтетичне живильне середовище для культивування збудника бешихи свиней готують таким чином' в колбу з хімічно чистого скла об'ємом 1000см3 наливають 90см3 води дистильованої, яку підігрівають до температури 50-60°С. Потім у колбу в указаній послідовності розчиняють слідуючи компоненти (мг) - аспарагін - 0,4-0,5, калій фосфат двозмінний - 0,05, лимонна кислота - 0,2, магній сірчанокислий семиводний - 0,05, залізо лимонноаміачне - 0,005, гліцерин - 3,0 Після розведення інгредієнтів у колбу додають дистильовану воду до 100см. Одержаний розчин охолоджують до кімнатної температури і 25% розчином аміаку доводять ph до 7,2-7',4. Виготовлене таким чином середовище фільтрують через бумажний фільтр, стерилі В основу корисної моделі поставлено задачу розробити сентетичне живильне середовище, що Ю О CD 6054 зують при 112°С на протязі 20 хвилин, та зберігазалізо лимонно-аміачне -0,005 ють при температурі +4°С 20 діб. гліцерин -3,0 Перед висівом культур збудника бешихи до магній сірчанокислий семисинтетичного живильного середовища додають водний -0,05 розчин MEM у співвідношенні 20-50% і 40% розчин MEM -50 глюкози, щоб вміст складав 1% у середовищі. вода дистильована -до 100 ph-7,2-7,4 Живильне середовище перевіряли на стериІнтенсивність росту культур визначали за опльність шляхом утримання в термостаті при темтичним стандартом мутності. Через 72 години після висіву культур шт.419, збудника бешихи свипературі 37°С на протязі 3-5 діб. Після цього у жиней. вильне середовище висівали 10% 24-часової бульйонної культури збудника бешихи шт 149, шт. Елективні властивості синтетичного живильно419-к. Культивування проводили у термостаті при го середовища визначали по інтенсивності росту культур за оптимальним стандартом мутності че37°С на протязі 4 діб рез 72 години після висіву культури шт419 збудПриклад №1 Живильне середовище готували ника бешихи свиней. Результати проведених дояк вказано вище, при слідуючому співвідношенні сліджень наведені в таблиці. компонентів, мас %• L - аспарагін -0,4-0,5 Із матеріалів таблиці видно, що при вирощуванні збудника бешихи свиней шт419 на запропокалій фосфорнокислий двонованому синтетичному живильному середовищі замінений -0,05 при мінімальній кількості компонентів (приклад лимонна кислота -0,2 №1) інтенсивність росту культури становила 200залізо лимонно-аміачне -0,005 250млн., оптимальній (приклад №2) - 600млн., гліцерин магній сірчанокисмаксимальній - 250-ЗООмлн.мікр.клітин у 1см3, тоді лий -3,0 як на середовищі (прототип) цей показник станосеми водний -0,05 вив 250млн.мікр клітин в 1см3. MEM -20,0 Із вирощених культур на синтетичному жививода дистильована -до 100 ph-7,2-7,4 льному середовищі був виготовлений алерген, Приклад №2 Теж, що і в прикладі №1 при сліякий вводили кролям через 3 тижні після сенсибідуючому співвідношенні компонентів, мас %: лізації. Реакція на введення алергену становила L-аспарагін -0,4-0,5 15мм-25мм. калій фосфорнокислий двоРеакція у сенсибілізованих кролів на алерген, замінений -0,05 одержаний із культур збудника бешихи, вирощелимонна кислота -0,2 них на середовищі становила 5мм-12мм. залізо лимонно-аміачне -0,005 Результати проведених досліджень свідчать гліцерин -3,0 про те, що при вирощуванні збудника бешихи свимагній сірчанокислий семиней на розробленому синтетичному живильному водний -0,05 середовищі при оптимальному співвідношенні MEM -30,0 компонентів інтенсивність росту культури шт.419 вода дистильована -до 100 ph-7,2-7,4 була більше, в порівнянні із прототипом (таблиця). Приклад №3. Теж, що і в прикладі №1 при сліАлергічні реакції у сенсибілізованих кролів на дуючому співвідношенні компонентів, мас.%1 алерген, отриманий із синтетичного живильного L - аспарагін -0,4-0,5 середовища були більш специфічними, ніж на калій фосфорнокислий двоалерген, отриманий із середовища - прототипу. замінений -0,05 лимонна кислота -0,2 Таблиця На середовищі, що пропонується, при Показники ВМІСТІ компонентів Кількість мікробних клітин в 1CM J середовища Кількість білка мг/мл Комп'ютерна верстка В Мацело Приклад 1 200-250 2,9 Приклад 2 600 6,1 Підписне Середовище прототип Приклад 3 300 3,5 250 2,8 Тираж 28 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601