Синтетичне живильне середовище для культивування мікобактерій

Синтетичне живильне середовище для культивування мікобактерій, що містить калій фосфорнокислий двозаміщений, магній сірчанокислий семиводний, натрій лимоннокислий, залізо лимоннокисле аміачне, гліцерин і дистильовану воду, яке Передбачений винахід відноситься до ветеринарної мікробіологи для виготовлення живильних середовищ з метою культивування збудників туберкульозу та атипових мікобактерій і може використовуватися з ветеринарній медицині та біологічній промисловості для вирощування і накопичення бактерійної маси мікобактерій Відоме синтетичне живильне середовище Курської бюфабрики для вирощування збудника туберкульозу бичачого виду, яке містить Л-аспарапн, амоній лимоннокислий двозаміщений, калій фосфорно - кислий двозаміщений, магній сірчанокислим, залізо сірчанокисле закисне, гліцерин, лимонну кислоту, сірчанокислий цинк (Автореферат дис А А Звглевського на здобуття док вет наук, 1990 р) Розроблено також живильне середовище для вирощування мікобактерії туберкульозу, що містить калій фосфорнокислий однозаміщений, натрій фосфорнокислий двозаміщений, магній сірчанокислий, залізо лимоннокисле аміачне, Л-аспарапн, гліцерин, твін-80, сироваточний бичачий альбумін, ДЛ-метионін, натрій лимоннокислий (А с № 1473313, C12N1/20) Найбільш близьким не технічною суттю до заявляемого об'єкту є синтетичне живильне середовище Сотона яке використовують у біологічній промисловості для вирощування збудника тубер відрізняється тим, що воно додатково містить амоній щавелевокислий і стимулятор росту мікобактерій - натрій янтарнокислий, при наступному співвідношенні компонентів, мас % Амоній щавелевокислий 0,3-0,5 Калій фосфорнокислий 0,4-0,8 двозаміщений Магній сірчанокислий 0,04-0,06 семиводний Натрій лимоннокислий 0,04-0,06 Залізо лимоннокисле аміачне 0,002-0,004 Натрій янтарнокислий 0,001-0,005 Гліцерин 3,0-4,0 Вода дистильована рН - 7,0-7,2 решта кульозу бичачого виду, до складу якого входить Ласпарапн, лимонна кислота, магній сірчанокислий, калій фосфорнокислий двозаміщений, залізо лимоннокисле аміачне, гліцерин Недоліком цього середовища є висока собівартість пов'язана з тим, що до складу його сходить Л-аспарапн, який промисловість України не виготовляє Крім того, на цьому середовищі не в усіх випадках пишно виростають культури мікобактерій в першій генерації Задачею передбаченого винаходу є вишукування компонентів для синтетичного живильного середовища, що готує вітчизняна промисловість для вилучення з и складу імпортного Л-аспарапну, підвищення його елективності і зменшення собівартості Вирішення цієї задачі знайдено шляхом вилучення Л-аспарапну та зведенням до складу синтетичного живильного середовища - амонія щавелевокислого і натрія янтарнокислого при такому співвідношень компонентів мас % Амоній щавлевокислий 0,3-0,5 Калій фосфорнокислий двозаміщений 0,4-0,8 Магній сірчанокислий семи0,04 - 0,06 водний Натрій лимоннокислий 0,04 - 0,06 О ю 45999 Залізо лимоннокисле аміачне Натрій янтарнокислий 0,002 0,004 0,001 0,003 3,0 - 4,0 100см; Гліцерин Вода дистильована рН- 7,0 -7,2 Аналіз відомих синтетичних живильних середовищ для дорощування мікобактерій показав, що солі амонія щавлевокислого і натрія янтарнокислого використовують і в інших відомих середовищах Однак використання їх в цих середовищах разом з іншими компонентами не забезпечувало тих властивостей, які вони виявляють в заявляемому рішенні, а саме поліпшення ростових властивостей живильного середовища при виключенні із середовища компонента Л-аспарапна Порівняння заявленого живильного середовища з прототипом свідчить про те, що заявлений склад синтетичного живильного середовища відрізняється від відомого виключенням Л-аспарапну та введенням до його складу нових компонентів, а саме - солі амонія щавелевокислого, натрія янтарнокислого Таким чином, цей склад компонентів придає живильному середовищу високі ростові властивості та забезпечує більше накопичення бактерійної маси Синтетичне живильне середовище виготовляють так в колбу ємкістю один літр наливають 100см3 дистильованої води, яку підігрівають до 40 - 45°С В указаній ПОСЛІДОВНОСТІ В НІЙ розчиняють такі компоненти (мг) залізо лимоннокисле аміачне - 0,002 - 0,004, амоній щавлевокислий - 0,3 - 0,5, калій фосфорнокислий двозаміщений - 0,4 - 0,8, магній сірчанокислий семиводний - 0,04 - 0,08, натрій лимоннокислий - 0,04 - 0,03, натрій янтарнокислий - 0,001 - 0,003, гліцерин - 4,0 - 4,0 Після розчинення компонентів розчин (змістимо колби) охолоджують до кімнатної температури і 25% розчином аміаку доводять рН до 7,0 - 7,2 Виготовлене живильне середовище фільтрують через паперовий фільтр, стерилізують в автоклаві при 120°С протягом 20 хвилин і зберігають при температурі 4°С не більше ЗО діб Перед висівом культур мікобактерій на живильне середовище його перевіряють на стерильність шляхом витримання в термостаті при 37 - 38°С протягом трьох діб 4 В колбі з стерильним живильним середовищем роздільно висівають бактеріологічною петлею (3 - 5 бак петлі) плівку культур збудника туберкульозу і атипових мікобактерій, які виросли на живильному середовищі Павловського Колби з посівами закривають ватно - марлевими пробками, які накривають целофаном або пергаментною бумагою і розміщують в термостаті при температурі 37,5 - 38,0°С За посівами ведуть спостереження протягом 60 діб Приклад № 1 Живильне середовище готують як вказано вище, при такому співвідношенні компонентів, мас % Амоній щавелевокислий 0,3 Калій фосфорнокислий двозаміщений 0,4 Магній сірчанокислий семиводний 0,04 Натрій лимоннокислий 0,04 Залізо лимоннокисле аміачне 0,02 Натрій янтарнокислий 0,001 Гліцерин 3,0 Вода дистильована решта рН-7,0-7,2 Приклад № 2 Теж, що і в прикладі № 1 при слідую чому співвідношенні компонентів, мас % Амоній щавлевокислий 0,4 Калій щавлевокислий двозаміщений 0,6 Калій сірчанокислий семиводний 0,05 Натрій лимоннокислий 0,05 Залізо лимоннокисле аміачне 0,003 Натрій янтарнокислий 0,003 Гліцерин 3,5 Вода дистильована решта рН 7,0-7,2 Приклад № 3 Теж, що і в прикладі № 1 та № 2 при слідую чому співвідношенні компонентів мас % Амоній щавлевокислий 0,5 Калій фосфорнокислий двозаміщений 0,8 Магній сірчанокислий семиводний 0,06 Натрій лимоннокислий 0,06 Залізо лимоннокисле аміачне 0,003 Натрій янтарнокислий 0,003 Гліцерин 4,0 Вода дистильована решта РН 7,0-7,2 Елективні властивості синтетичного живильного середовища визначають через 60 діб після висіву культур мікобактерій по виходу сухої бактерійної маси Вихід бактерійної маси на вивчаємому елективному живильному середовищі і середовищі Сотона в мг сухої речовини (СР) КІЛЬКІСТЬ бак маси з мг (СР) Штам мікобактерій Шт М бовшус-8 Шт М бовіс / епізоотична культура шт Нзт RV шт М авіум-780 шт М скрофуляцеум шт М фортуїтум Визчаєме середовище, що містить компоненти Приклад № 1 Приклад № 2 Приклад № 3 191 242 228 Середовище Сотона 225 220 240 220 230 229 2320 242 280 249 255 253 329 238 233 249 318 241 232 248 325 З матеріалів таблиці видно, що при вирощуванні культур мікобактерій на вивчаємому середовищі із щавлевокислим амонієм і натрієм янтарнокислим при мінімальному співвідношенні 45999 компонентів (Приклад № 1), вихід бактеріальної КІЛЬКІСТЬ бактерійної маси становила у шт М маси у шт М бовшус-8 був 191мг, епізоотинної бовшус-8 - 225мг, епізоотичної культури М бовіс культури мікобактерій бичачого виду - 220, шт Н37 230, шт Нзт RV - 241, шт М авіум - 230, шт М RV- 229, шт М авіум - 230, шт М скрофуляцеум скрофуляцеум - 248, шт М фортуїтум - 325 мг СР 242, шт М фортуїтум - 280мг СР При Результати проведених досліджень свідчать оптимальному співвідношенні компонентів в про те, що при вирощуванні культур мікобактерій живильному середовищі (Приклад № 2) на розробленому синтетичному живильному накопичення бактерійної маси становило у шт М середовищі з щавлевокислим амонієм і натрієм бовіс-8 - 242мг, епізоотичної культури М бовіс янтарнокислим при оптимальному вмісту 240, шт Нзт RV - 249, шт М авіум - 255, шт М компонентів вихід сухої бактерійної маси був скрофуляцеум - 253, шт М фортуїтум - 329мг СР більше у збудника туберкульозу бичачого виду на 10 - 17мг, людського - 8мг, пташиного - 32мг і При вирощуванні культур мікобактерій на атипових мікобактерій - на 15 - 16мг СР в середовищі до склад якого входило максимальне порівнянні з прототипом /середовище Сотона/ співвідношення компонентів (Приклад № 3) накопичення бактерійної маси становило у шт М Крім нього, запропоноване рідке синтетичне бовшус-8 - 228мг, епізоотичної культури М бовіс живильне середовище має високі елективні 230, шт Нзт RV - 238, шт М авіум - 233, шт М (ростові) властивості, в 15 разів дешевше відомого скрофуляцеум - 249, шт М фортуїтум - 318 мг СР і не потребує для його виготовлення закордонних компонентів При вирощуванні цих культур мікобактерій на живильному середовищі Сотона (прототип), ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20- 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71