Спосіб визначення рівня антикардіоліпінових антитіл експрес-методом

Спосіб визначення рівня антикардіоліпінових антитіл експрес-методом в плазмі крові, який відрізняється тим, що визначення проводять з використанням латексного діагностикуму, який перемішують з досліджуваними зразками та за розвитком аглютинації латексних частин роблять висновок про наявність у пробі аутоантитіл до кардіоліпіну. (19) (21) u201102086 (22) 22.02.2011 (24) 26.09.2011 (46) 26.09.2011, Бюл.№ 18, 2011 р. (72) ГОРБЕНКО НАТАЛІЯ ІВАНІВНА, КОЗАР ВАЛЕНТИНА ВІКТОРІВНА, ІВАНОВА ОЛЬГА ВОЛОДИМИРІВНА (73) ДЕРЖАВНА УСТАНОВА "ІНСТИТУТ ПРОБЛЕМ ЕНДОКРИННОЇ ПАТОЛОГІЇ ІМ. В.Я. ДАНИ 3 Поставлена задача вирішується тим, що визначення рівня антикардіоліпінових антитіл проводять з використанням латексного діагностикуму, який перемішують з досліджуваними зразками та за розвитком аглютинації латексних частин роблять висновок про наявність у пробі аутоантитіл до кардіоліпіну. Технічний результат - оптимізація діагностики тромботичних ускладнень за рахунок оперативного отримання інформації, що забезпечує своєчасність та ефективність лікувальних і профілактичних заходів. Для приготування латексного діагностикуму використовують полістирольний латекс із розміром частинок 0,77-0,83 мкм, на який наносять розчинений в етанолі кардіоліпін (підприємство «Біолек», м. Харків). Полімерну суспензію центрифугують, доводять дистильованою водою до 0,5%-0,8% по сухому залишку, змішують з кардіоліпіном в рівних об'ємах. Навантаження латексу здійснюють при 37°С 2 години при постійному помішуванні. Відмивання від надлишку кардіоліпіну проводять двічі гліциновим буфером шляхом центрифугування при 3000 об/хв протягом 15 хвилин. Відновлюють попередній об'єм реагенту, а саме концентрацію латексу по сухому залишку в суспензії у межах 0,5%-0,8%, гліциновим буфером. Гліциновий буфер готують шляхом доведення 0,1 М розчину гліцину до рН 8,2 1М розчином NaOH та додаванням 8,5 г натрію хлориду на 1 л. Готовий буферний розчин містить 0,1% БСА та 0,03% азиду натрію. Приготовлений діагностикум може зберігатися протягом 1 року при температурі 4°С. Процедура визначення рівня антикардіоліпінових антитіл у досліджуваних зразках плазми крові людей і тварин складається із наступних етапів. Діагностикум та досліджувані зразки плазми крові доводять до кімнатної температури. Поміщають на слайд або скло по 20 мкл реагенту та проб, перемішують скляною паличкою. В якості негативного контролю застосовують гліциновий буфер. Помішують пластини чи скло протягом 2-3 хвилин, після чого проводять облік реакції. Розвиток аглютинації свідчить про наявність у пробі антитіл до кардіоліпіну. Зразки плазми крові, які показали позитивний результат, розводять гліциновим буфером. Найбільше розведення плазми крові, яке дало позитивний результат, є титром плазми крові. Про рівень антитіл до кардіоліпіну судять по останньому розведенню, при якому була виявлена аглютинація. Цей тест дозволяє оперативно одержати інформацію - час проведення аналізу складає 2-3 хвилини. Приклад За допомогою діагностикуму були перевірені зразки плазми крові інтактних та оваріектомованих Комп’ютерна верстка Мацело В. 63008 4 щурів самиць (через 10 тижнів після операції). Встановлено, що у групі інтактних тварин титр антикардіоліпінових антитіл в середньому був 1:8 (min 1:8  max 1:8). У оваріектомованих щурів цей показник вірогідно відрізнявся у бік збільшення і в середньому титр був 1:24 (min 1:16  max 1:32) (р 40 МО/мл, а за результатами якісного ІФА антитільний індекс у здорових людей не перевищує 1,5-2,0 од., при рівні антитіл більше 2,0 од. вірогідність розвитку тромбозу значно зростає [7]. Таким чином, отриманий діагностикум є адекватним до поставленого завдання і здатен виявляти аутоантитіла до кардіоліпіну, що підтверджує його специфічність і достатню чутливість. Література: 1. Mehdi A. A., Uthman I., Khamashta M. Antiphospholipid syndrome: pathogenesis and a window of treatment opportunities in the future // Eur. J. Clin. Invest. - 2010 - Vol. 40, N. 5 - P. 451-464. 2. Pierangeli SS, Harris EN.Clinical laboratory testing for the antiphospholipid syndrome//Clin Chim Acta. 2005 Jul l;357(l):17-33. 3. Donadini M.P., Crowther M. Antiphospholipid syndrome: a challenging hypercoagulable state with systemic manifestations // Hematol. Oncol. Clin. North. Am. - 2010. - Vol. 24, N. 4. - P. 669-676. 4. Van Os G.M., Urbanus R.T., Agar C, Meijers J.C., de Groot P.G. Antiphospholipid syndrome. Current insights into laboratory diagnosis and pathophysiology // Hamostaseologie. - 2010. - Vol. 30, N. 3. - P. 139-43. 5. Gharavi A.E., Harris E.N., Asherson R.A., Hughes G.R. Anticardiolipin antibodies: isotype distribution and phospholipid specificity // Ann. Rheum. Dis. -1987.-Vol. 46, N. l.-P. 1-6. 6. Feng F., Nyland J., Banyai M., Tatum A., Silverstone A.E., Gavalchin J. The induction of the lupus phenotype by estrogen is via an estrogen receptor-alpha-dependent pathway // Clin. Immunol. 2010. - Vol. 134, N. 2. - P. 226-236. 7. Villalta D., Alessio M.G., Tampoia M., Da Re A., Stella S., Da Re M, Tozzoli R., Bizzaro N. Accuracy of the first fully automated method for anticardiolipin and anti-beta2 glycoprotein I antibody detection for the diagnosis of antiphospholipid syndrome //Ann. N. Y. Acad. Sci. - 2009. - N. 1173. P. 21-27. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601