Спосіб визначення зетациперметрину в біологічних об’єктах

Винахід, що передбачається, відноситься до області ветеринарної медицини, а саме до визначення зетациперметрину в біологічних об'єкта х. Визначення інсектицидів, а саме зетациперметрину в біологічних об'єктах необхідне при контролі залишків діючої речовини у продуктах сільськогосподарського виробництва і діагностики отруєнь тварин. Зетациперметрин - 1RS-цис, транс-3-(2,2-дихлорвініл)-2,2-диметил-циклопропанкарбонової кислоти (RS)фенокси- a -ціанобензиловий ефір - діюча речовина препарату „Ф'юрі" фірми ФМС, США. Реєстраційні номери Управління безпеки хімічних речовин: А №000626, А №00404 і Б №00090. Ф'юрі - рідина, жовто-коричневого або бежевого кольору, нерозчинна у воді і хорошо розчинна в органічних розчинниках. С22Н19СІ2NО 3. Молекулярна маса 416,28. У сільськомугосподарстві використовується як інсектицид широкого спектру дії на плодових, овочевих, зернових і зернобобових культура х. Існує спосіб визначення зетациперметрину в атмосферному повітрі (Методические указания по хроматографическому измерению концентраций бифентрина и зетациперметрина в атмосферном воздухе.государственная комиссия по вопросам испытаний и регистрации средств защиты растений и удобрений №67-97 от 15 июля 1997года). У цьому способі визначення зетациперметрину використовуютьгазорідинну хроматографію. Використання його можливе тільки для атмосферного повітря. Є спосіб визначення зетациперметрину в сільськогосподарських продуктах (Ме тодические указания по хроматографическому измерению концентраций зетациперметрина (фюри) в капусте, яблоках, огурца х, арбузах, дыне, зерне хлебных злаков, зернегороха, семенах и масле рапса, льнагазохроматографическим методом.государственная комиссия по вопросам испытаний и регистрации средств защиты растений и удобрений №57-97 от 8 июля 1997года). Спосіб за цим рішенням може бути прототипом. Він ґрунтується нагазо хроматографічному визначенні зетациперметрину з детектором по рекомбінації електронів, після вилучення зетациперметрину з проби сільськогосподарських рослин. Недоліком цього рішення є неможливість використання його для визначення інсектициду в біологічних об'єктах та для екстракції використовується 200мл ацетону, а в запропонованому способі 40мл; для реекстракції кількістьгексану - 110мл, в запропонованому способі 30мл - (2а). Порівняльний аналіз з прототипом дає змогу зробити висновок, що рішення яке заявляється відповідає критерію „новизна". В основу винаходу поставлено задачу розробити спосіб визначення зетациперметрину, що міститьгазохроматографічне визначення залишків діючої речовини після вилучення зетациперметрину з проби органічним розчинником, очищення екстракту та перерозподілу його шляхом осаджування коекстрактивних речовин з водно-ацетонового розчину на холоду засобом виморожування, щоб забезпечити спосіб визначення зетациперметрину в біологічних об'єкта х. Спосіб виконується таким чином: вилучають інсектицид із аналізуємої проби, осаджують коекстрактивні речовини з водно-ацетонового розчину на холоду, перерозподіляють препарат угексан і доочищають екстракт колонковою хроматографією на оксиді алюмінію, використовуючи елювання і ідентифікацію діючої речовини препарату засобомгазової хроматографії. Метрологічна характеристика способу не поступається відомим способам. Застосування способу спрощує проведення визначення зетациперметрину (табл.1). Таблиця 1 Статистичні показники Межа визначення, мг/кг К-сть паралельних проб Розмах варіювання, % M±m, % Стандартне відхилення, % Медіана, % м'ясо 0,02 5 58-73 66,4±2,66 5,94 68 Аналізуємі об'єкти внутрішні органи молоко 0,02 0,02 5 5 59-76 53-71 67,8±2,92 65,0±3,39 6,53 7,58 69 69 жир 0,10 5 50-69 59,2±3,65 8,16 58 яйця 0,05 5 54-72 62,0±3,42 7,65 59 Приклад 1 Для дослідження використовували скляну колонку довжиною 1м з комплекту хроматографа. Колонкуготували у відповідності за загальною інструкцією погазовій хроматографії. Заповнювали колонку хроматоном inerton-super /0,16-0,20/ з 5% SE-30. Нову колонку кондиціонували, не з'єднуючи з детектором, на протязі 12-16годин, при температурі вищій за робочу на 79-80°С. Основний стандартний зразок зетациперметрину з концентрацією 100мкг/млготували розчиняючи 10 мг препарату в 10мл ацетону і доводили до мітки ацетоном у мірній колбочці на 100мл. Робочі стандартні розчини нагексані з концентраціями: - 10 і 1мкг/млготували із основного стандартного зразка. Зберігали стандартні розчини в холодильнику, у щільно закупореному посуді, що виключає випарювання органічних компонентів протягом 1 місяця. Приклад 2 Виділення зетациперметрину із біологічних об'єктів. Із середньоїгомогенізованої проби відбирали наважку: м'язова тканина - 10-20г, внутрішні органи - 10г, жир - до 4г, жовток яйця - до 10г, білок яйця - до 20г. Відібрану наважку поміщали в конічну колбу з притертою пробкою і екстрагували 40мл ацетону 1годину на апараті для струшування (або залишали, періодично перемішуючи на 16-20годин). Екстракт декантували або відфільтровували через паперовий фільтр у чисту колбу. Залишок і фільтр промивали 5мл ацетону. До об'єднаного ацетонового екстракту додавали 8мл дистильованої води і розміщували колбу на 1-2години у випарювальну камеру холодильника (при 0-(-5°С). Після цього зетациперметрин реекстрагували в ділильній лійці із водно-ацетонового розчину гексаном двічі, використовуючи при цьому 20 і 10мл екстрагенту. Потім гексановий екстракт виливали у випарювальну чашку і концентрували до 0,5мл. Сконцентрований екстракт зливали в центрифужну пробірку, додавали 0,2-0,3г сульфата натрію безводного. Надосадкову рідину переносили в приготовлену хроматографічну колонку для додаткового очищення екстракту. Після всмоктування аналізує мого гексанового екстракту починали вимивання зетациперметрину. Приклад 3 Молоко. 10мл молока виливали в колбу і додавали 50мл ацетона. Суміш в колбі перемішували. Після цього суміш охолоджували у випарювальній камері холодильника. Потім фільтрували через паперовий фільтр або центрифугували, відділяючи надосадкову рідину, яку обробляли за описаним вище способом (приклад 2). Ідентифікація і кількісне визначення зетациперметрину. Очищений екстракт (гексан:бензол - 4:6) аналізували способом газової хроматографії і по необхідності розбавляли в 3-5 або більше разів гексаном. Для ідентифікації зетациперметрину використовували газовий хроматограф. Скляну колонку довжиною 1м заповнюли хроматоном inerton-super /0,16-0,20/ з нанесеною рідинною фазою SE-30 в кількості 5%. Температура випарювача - 250°С, термостата колонок - 240°С, термостата детектора - 260°С. Газ-носій - азот особої чистоти (або аргон вищої категорії очищення). Швидкість подачі газа на колонку - 30мл за хвилину, на продування детектора - 70-100мл за хвилину. Час удержування зетациперметрину - 8,0хв. Мінімально детектуємі кількості: зетациперметрину - 1,0нг. При роботі хроматографа на аргоні використовували шкалу з більш ви щою чутливістю (10 або 5х10-12 А). Якісну ідентифікацію зетациперметрину здійснювали за часом утримання. Кількісне визначення зетациперметрину в пробі проводили методом порівнювання висоти або площі піка стандартного і дослідного розчину. Математичні розрахунки проводили за формулою: У пр (мл) ´ Ст(нг ) ´ Нпр´ 100 C= Ур - н(мкл) ´ Нст ´ М(г ) ´ К Де: X - кількість зетациперметрину в пробі в мг на кг; Упр(мл) - об'єм екстракту в мл; Ст(нг) - кількість пестициду в нг введена у випарювач хроматографа зі стандартним розчином; Нпр - висота піка аналізуємої проби в см; Ур-н(мкл) - кількість екстракту введеного в хроматограф в мкл; Нст - висота піка стандарту в см; М(г) - маса проби взятої для екстракції (в г або мл); 100 - коефіцієнт для внесення поправки на втрати пестициду при К екстракції і підготовки проби для дослідження, де К - визначаємість препарату в % (зетациперметрин - 75%). Спосіб визначення зетациперметрину в біологічних об'єктах є е фективним. Його використання спрощує процедуру аналізу та підвищує точність визначення зетациперметрину, при меншій кількості екстрагенту (ацетону) та меншій кількості реактивів.