Спосіб визначення нурелу д в біологічних об’єктах

Спосіб визначення нурелу Д в біологічних об'єктах одночасним вилученням діючих компонентів, осаджуванням коекстрактивних речовин виморожуванням, перерозподілом компонентів в гексан, доочищенням екстракту на колонці з оксидом алюмінію, елююванням та ідентифікацією газовою хроматографією, який відрізняється тим, що використовують двоступінчасте елюювання діючих компонентів, осаджуванням коекстрактивних речовин, реекстракцією в гексан, доочищенням екстракту колонковою хроматографією, елююванням та ідентифікацією газовою хроматографією В основу винаходу, що передбачається, поставлено задачу розробити спосіб визначення нурелу Д в біологічних об'єктах одночасним вилученням діючих компонентів, осаджуванням коекстрактивних речовин з водно-ацетонового розчину на холоду засобом виморожування, перерозподілом компонентів в гексан, доочищенням екстракту на колонці з оксидом алюмінію, шляхом використання двоступінчастого елюювання та ідентифікацією діючих речовин препарату способом газової хроматографії, щоб забезпечити визначення діючих компонентів хлорпірифосу і циперметрину, що входять в склад нурелу Д Вказана задача вирішується технічним рішенням, що являє собою новий спосіб визначення залишків інсектоакарициду, а саме нурелу Д в біологічних об'єктах Новим в порівнянні з прототипом є спосіб визначення нурелу Д, в якому використовують двуступінчасте елюювання Нурел Д - являє собою 55% концентрат емульсію, яка вміщує в собі ДІЮЧІ компоненти хлорпірифос і циперметрин в кількостях ВІДПОВІДНО 500г/л та 50г/л Нурел Д - в'язка рідина, жовтуватого кольору, нерозчинна в воді і хорошо розчинна в органічних розчинниках В сільському господарстві використовується як інсектоакарицид широкого спектру дії ДІЮЧІ компоненти Хлорпірифос-О,О-диетил-О-(3,5,6трихлорпіріділ)-тюфосфат (C9H11NCI3SP) від но о> 1 ю 57249 ситься до фосфорорганічних сполук Циперметрин-£-ціано-3-феноксибензил-(2,2дихлорвініл)циклопро-панкарбоксілат, відноситься до піретроідів II типу і складається із суміші цис-1 транс-ізомерів ВІДПОВІДНО 60 40 При виконанні способу одночасно вилучають ДІЮЧІ компоненти із аналізуємої проби, осаджують коекстрактивні речовини з водноацетонового розчину на холоду засобом виморожування, перерозподіляють компоненти в гексан, доочищують екстракт на колонці з оксидом алюмінію, використовуючи двоступеневе елювання і ідентифікують діючу речовину препарату способом газової хроматографії Для визначення нурелу Д проводять підготовку хроматографічної колонки При цьому використовують скляну колонку довжиною їм з комплекту хроматографа Колонку готують у ВІДПОВІДНОСТІ за загальною інструкцією по газовій хроматографії Заповнюють колонку хроматоном merton-super /0,16-0,20/ з 5% SE-30 Нову колонку кондицюнують, не з'єднуючи з детектором, на протязі 12-16 годин, при температурі вищій за робочу на 79-80°С З Державних стандартних зразків готують робочі стандартні розчини на гексані з концентраціями хлорпірифос - 1,10мкг/мл і 100нг/мл , циперметрин-1 і 10мкг/мл Зберігають стандартні розчини в холодильнику, у щільно закупореному посуді, що виключає випарювання органічних компонентів протягом 1 місяця Колонку довжиною 15см з діаметром 8мм з кінцем, що звужується, послідовно заповнюють шарами вата, натрій сірчанокислий безводний (1см), оксид алюмінію (2,0см), натрій сірчанокислий безводний (0,5см) Проби для дослідження відбирають ВІДПОВІДНО до «Тимчасового порядку відбору зразків сировини, матеріалів, продукції », затверджених Державним департаментом ветеринарної медицини МінАПК України 18 березня 1999р Далі проводять виділення нурелу Д (сума обох діючих компонентів) із біологічних об'єктів Із середньої гомогенізованої проби відбирають наважку м'язова тканина - 10-20г, внутрішні органи - 10г, жир - до 4г, жовток яйця - до 10г, білок яйця - до 20г Відібрану наважку поміщають в конічну колбу з притертою пробкою і екстрагують ацетоном 1 годину на апараті для струшування (або залишають, періодично перемішуючи на 16-20 годин) Екстракт декантують або відфільтровують через паперовий фільтр в чисту колбу Залишок і фільтр промивають ацетоном До об'єднаного ацетонового екстракту добавляють дистильовану воду і поміщають колбу на 1-2 години у випарювальну камеру холодильника Потім проби виймають і залишок ВІДДІЛЯЮТЬ фільтрацією через 5 паперовий фільтр Після цього ДІЮЧІ компоненти нурела Д (хлорпірифос і циперметрин) реекстра 4 бірку, добавляють сульфат натрію безводного і поміщають в холодильник на 15-20 хвилин При необхідності неурівноважені частки осаджують на центрифузі Надосадкову рідину переносять в приготовлену хроматографічну колонку для додаткового очищення екстракту При цьому використовують скляну хроматографічну колонку з діаметром 7-8мм В нижню звужену частину колонки вводять тампон із білої вати, насипають шар безводного сірчанокислого натрію - 1см, оксида алюмінію - 2см і шар безводного сірчанокислого натрію - 0,5см Колонку перед внесенням екстракту промивають 5мл гексану чину гексаном ДВІЧІ, використовуючи при цьому 20 і Юмл екстрагенту Після всмоктування аналізуємого гексанового екстракту починають поетапне елювання діючих компонентів нурела Д Спочатку вимиваємо хлорпірифос Юмл суміші гексана з бензолом в об'ємному співвідношенні 141 Потім вимиваємо циперметрин Юмл суміші гексана з бензолом в об'ємному співвідношенні 7 З Приклад 1 Молоко Юмл молока виливають в колбу і добавляють 50мл ацетона Суміш в колбі перемішують і пробу ставлять на аппарат для струшування, на 1 годину Після ЦЬОГО суміш охолоджують в випарювальній камері холодильника 1 годину Потім фільтрують через паперовий фільтр або центрифугують, ВІДДІЛЯЮЧИ надосадкову рідину, яку обробляють дальше за описаним вище способом Приклад 2 Ідентифікація і кількісне визначення діючих компонентів нурелу Д Очищений екстракт (гексан бензол-14 1) розбавляють в 3-7 і більше разів по необхідності гексаном і аналізують способом газової хроматографії Наступний очищений екстракт (гексан бензол-7 3) осторожно концентрують до необхідного об'єму і аналізують способом газової хроматографії Приклад З Ідентифікація і кількісне визначення діючих компонентів нурелу Д Для ідентифікації діючих компонентів нурела Д використовують газовий хроматограф «Цвєт550» з детектором постійної швидкості рекомбінації (або інший аналогічний прилад з детектором по захвату електронів) Скляну колонку довжиною 1м заповнюють хроматоном merton-super/0,16-0,20/з нанесеною рідинною фазою SE-30 в КІЛЬКОСТІ 5% Температура випарювача - 250°С, термостата колонок 240°С, термостата детектора - 260°С Газ-носій азот особої чистоти (або аргон вищої категорії очищення) Швидкість подачі газа на колонку ЗОмл за хвилину, на продування детектора - 70ЮОмл за хвилину Робоча шкала електрометра від 5 до 20 х 10 12А В випарювач хроматографа вводять 1-5мкл стандартного або аналізуємого розчину Час удержування хлорпірифосу - 0,45хв і циперметрину - 8,0хв Мінімально детектуємі КІЛЬКОСТІ хлорпірифосу - 0,1 нг, циперметрину 1,0нг Потім гексановий екстракт виливають у випарювальну чашку і концентрують насухо Сконцентрований екстракт зливають в центрифужну про При роботі хроматографа на аргоні використовують шкалу з більш вищою чутливістю (10 або 5x10 12А) гують в ДІЛИЛЬНІЙ ЛІЙЦІ із водно-ацетонового роз 57249 Якісну ідентифікацію діючих компонентів нурела Д здійснюють за часом утримання Приклад 4 Кількісне визначення по сумі діючих компонентів в пробі проводять методом порівнювання висоти або площі піка стандартного і дослідного розчину окремо для хлортрифосу і циперметрину дослідної і стандартної проб Математичні розрахунки виконують окремо для хлортрифосу і циперметрину І їх сума складає КІЛЬКІСТЬ нурелу Д в досліджуваних зразках Розрахунки окремо для обох компонентів проводять за формулою Упр(мл)хСт(нг)хЮО v Х(1,2) Ур - р(мкл) х Нет х М(г) х К Де X - КІЛЬКІСТЬ діючого компонента нурела Д (окремо для хлортрифосу /Х-і/ і циперметрину /Хг/) в пробі в мг на кг, Упр - об'єм екстракту в мл, Ст - КІЛЬКІСТЬ пестициду в нг введена в випарювач хроматографа зі стандартним розчином, Нет - висота піка стандарту в см, Ур-н - КІЛЬКІСТЬ екстракту введеного в хроматограф в мкл, Нпр - висота піка аналізуємої проби в мл, Мпр - маса проби взятої для екстракції (в г або мл), 100 - коефіцієнт для внесення поправки на втрати пестициду при К екстракції і ПІДГОТОВЦІ проби для дослідження, де К - визначаємість препарату в % (хлорпірифос - 75%, циперметрин - 72%) Приклади дослідження наведені в таблиці Спосіб визначення нурелу Д є ефективним і дає змогу використовувати його для контролю за залишками нурелу Д (сума хлортрифосу та циперметрину) в біологічних об'єктах Таблиця Результати дослідження об'єктів, що аналізуються Аналізуємі об'єкти внутрішні органи молоко жир ЯЙЦЯІ Статистичні показники хлорхлор- циперципер- хлор- ципер- хлор- ципер- хлор- циперпірипірифос метрин метрин пірифос метрин пірифос метрин пірифос метрин фос Межа визначення, мг/кг 0,01 0,02 0,01 0,02 0,01 0,02 0,01 0,10 0,025 0,05 К-сть паралельних проб 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 Розмах варіювання, % 49-64 42-64 53-68 54-67 55-68 49-73 42-65 37-61 50-68 51-69 М±т,% 58,1±2,0 52,1±2,£ 61,4±2,2 58,3±2,1 62,0±1,£ 61,4±3,8 52,0±3,5 44,6±3,7 60,7±2,5 60,7±2,S Стандартневідхилення,% 4,91 7,18 5,32 5,06 4,87 9,41 8,52 8,99 5,99 7,27 Медіана, % 58,55 51,55 62,22 57,11 61,35 60,25 48,95 41,0 61,8 60,2 м'ясо Комп'ютерна верстка Н Лисенко Підписано до друку 05 07 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна