Спосіб підготовки біоптата для діагностики гастриту

Винахід відноситься до медицини, а саме до патологічної анатомії і може бути використаним для діагностики гастриту. Вивчення морфофункціональних властивостей органів і тканин - важлива складова діагностичного процесу. При цьому визначальне значення має якість і спосіб підготовки біоптата для його дослідження. Як правило, підготовка гістологічних препаратів включає наступні етапи: фіксація, проводка; фарбування гематоксилін-еозіном; фарбування по Ван-Гізону з еластикою; ШІК-реакція (виділення глюкопротеїдів); альціановий синій + ШІК; фарбування ДНК; фарбування РНК; фарбування колагенових волокон по Маллорі; фарбування по Романовському-Гімза без диференціровки оцтовою кислотою. Фарбування по РомановськомуГімза без диференціровки оцтовою кислотою дозволяє виявити Helicobacter pilory - мікроб, який ускладнює плин хронічного гастриту, тканина біоптата при цьому виглядає інтенсивно синьою, тобто всі епітеліальні клітини, включаючи парієстальні, "навантажені" синьою фарбою. Використання перерахованих фарбувань для приготування мікропрепаратів із біоптата слизової оболонки шлунка дозволяє визначити ступінь ушкодження, лейкоцитарної інфільтрації, продукції муцину, атрофії і обсіменіння слизової оболонки Helicobacter pilory. Морфо функціональна оцінка гіпер- або гіпоактивності парієтальних клітин, що продукують НСl складна, але ця інформація необхідна лікарю. Хем і Кормак вказують, що при фарбуванні за методому ШІК із гематоксиліном для парієтальних клітин характерна порівняно світла бліда цитоплазма (Хем А., Кормак Д. Гистология. - М.: Мир, 1983. - Т.4. - C.130). На препаратах, пофарбованих гематоксиліном і еозіном, цитоплазма цих клітин має рожевий колір, малоконтрасна, і необхідний досвід для їх диференціровки під мікроскопом. Ар уін і співавт. повідомляють про високу активність карбоангідрази в парієтальних клітинах, тобто при постановці гістохімічної ферментної реакції на карбоангідразу можна виявити ці клітини в слизовій оболонці шлунка. (Арунин Л.И., Кап уллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника. - М.: Триада-Х, 1998. - 483с.) Даний спосіб підготовки біоптата, що включає фарбування парієтальних клітин, є найбільш близьким за результатом, який може бути досягнутий, до того, що заявляється. Тому його вибрано в якості прототипу. Однак ця гістохімічна реакція дорога, вимагає нефіксованого, “свіжого” матеріалу і, крім того, карбоангідразу знаходять і в поверхневому епітелії, тобто фермент не специфічний для парієтальних клітин (Vega F.V., Olaisson H., Mardh S. Destribution of carbonic anhydrase in cells and membranes isolated from pig gastric mucosa. - Acta Ph ysiol. Scand. - 1985. - V. 124. - P.573-579.). У зв'язку з вищевикладеним в основу винаходу покладено задачу розширення арсеналу способів підготовки біоптата для діагностики гастриту. Задача, яку покладено в основу винаходу вирішується тим, що у відомому способі підготовки біоптата для діагностики гастриту, що включає фарбування гематоксилін-еозіном, пікрофуксином по Ван Гізону, постановку ШІК-реакції та фарбування по Романовському-Гімза, згідно з винаходом, біоптат додатково фарбують по Романовському-Гімза в гематологічному варіанті. При додатковому фарбуванні біоптата по Романовькому-Гімза (в гематологічному варіанті) (Г.А.Меркулов Курс патологогистологической техники. -М.: Медицина, 1969. - 236 с.), тобто з диференціровкою оцтовою кислотою і спиртом, парієтальні клітини, що продукують НС1, світліють, а інші епітеліальні клітини шлункових залоз сині. Спосіб виконують наступним чином: Після фіксації в спирті 96° препарат добре промивають у дистильованій воді. Готують барвний розчин у градуйованому циліндрі - із розрахунку 2 краплі фарби Романовського-Гімза на 1 мл дистильованої води, розмішують. Зрізи залишають у фарбі при кімнатній температурі на 18-24 години, а в термостаті при t37° на 1-2 години. Ґрунтовно промивають у водопровідній воді. Диференціюють у воді підкисленою оцтовою кислотою - 1 крапля крижаної оцтової кислоти на 100мл дистильованої води. Тримають 1 хвилину. Промивають грунтовно в дистильованій воді і доводять диференціювання чистим 96° спиртом (протягом 5 хвилин) до виділення чітко помітних клітинних структур. Проводять через 96° спирт, потім ксилол - 5 хв. і укладають у бальзам. Зрізи блідо-сині з бузковим відтінком. При постановці фарбування по Романовському-Гімза в гематологічному варіанті, тобто з диференціюванням оцтовою кислотою і спиртом парієтальні клітини (що продукують ПСІ) добре виділяються (світлі) серед інших епітеліальних клітин шлункових залоз (сині). Взагалі у хворих хронічним гастритом можна спостерігати гіперпроліферацію і активізацію параєтальних клітин, їх де фіцит і гіпофункціональний стан, нормальні кількість і морфофункціональну активність. Спосіб ілюструє наступний приклад. Хворий П., 25 років, знаходився в гастроентерологічному відділенні з діагнозом: виразкова хвороба середнього ступеня тяжкості. Сполучена виразка пілорічного відділу шлунка і цибулини дванадцятипалої кишки (вперше виявлена) із збереженою кислотопродукуючою функцією шлунка. Ерозивний гастродуоденіт. Гістологічно в антральному біоптаті виявлене зменшення і потончення шлункової слизової, зниження кількості нейтральних і кислих мукополісахаридів у ній. Helicobacter pilory локалізуються переважно в слизі на поверхні епітелію, а також у шлункових ямках і залозах слизова оболонка. Епітеліоцити з ознаками помірного дистрофічного процесу, продукція ШІК-позитивного муцина покривними і залозистими епітеліальними клітинами знижена. Строма насичена лейкоцитами, у тому числі макрофагами, лімфоцитами, плазмоцитами, нейтрофілами, еозінофілами. Судини мікроциркуляторного русла в поверхневих шарах повнокровні, місцями з діаперезними кровозмінами. D.S.: Загострення хронічного антрального гастриту. При додатковому використанні фарбування за Романовським-Гімза в гематологічному варіанті виявлено, що в області перешийка і шийки залоз відзначається наявність великої кількості крупних парієтальних клітин з великим ядром і інфікуванням Helicobacter pilory. Це дозволяє розширити гістологічний діагноз, додаючи наступне: з гіперпроліферацією і активізацією парієтальниї клітин.