Вакцинний штам escherichia coli “з-12/150″

Винахід відноситься до ветеринарної мікробіології і імунології, зокрема для виготовлення вакцин та антигенів. Метою винаходу є штам Escherichia coli, який володіє добре вираженими імуногенними властивостями, що проявляються в синтезі специфічних антитіл в організмі щеплених тварин. Вакцинний штам Escherichia coli "Запорізький 12", селекційований нами і депонований в колекції патогенних мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біоте хнології і штамів мікроорганізмів під №150. (надалі назва штаму Escherichia coli "3-12/150"). Штам виділений від поросяти з клінічними ознаками ешеріхіозу. Особливістю штаму є стабільна аглютенабельність, продукування гемолізину, серогрупова специфічність, висока потенція росту, яка сприяє отриманню великої кількості біомаси для виготовлення вакцини, що визначає рентабельне її виробництво. Штам Escherichia coli "З-12/150", який використовується для виробництва асоційованих інактивованих вакцин "Колісан" (проти колібактеріозів тварин та "Вельшіколісальм" (проти ешеріхіозу, сальмонельозу, анаеробної ентеротоксимії тварин), "Вельшікол" (проти ешеріхіозу, набрякової хвороби, анаеробної ентеротоксимії тварин), "Сердосан" ( проти ешеріхіозу, сальмонельозу, анаеробної ентеротоксимії та пастирельозу тварин та "Пневмомастисан"( проти маститів і пневмоентеритів тварин) , а також для виготовлення антигену для імунологічних реакцій. [3] Вакцинний штам Escherichia coli "З-12/150", характеризується наступними ознаками: Морфологічні ознаки: бактерії Escherichia coli штаму "3-12/150 ", в мікроскопічних препаратах із добової бульйонної культури , пофарбованих за Грамом - грамнегативні, короткі товстенькі палички злегка заокруглені на кінцях, в мазках розташовані поодиноко або попарно. [1, 2] Культуральні ознаки: На МПБ при 37°С рН6,8-7,2 спостерігається рівномірне помутніння середовища з утворенням пристінкового кільця, на МЛА утворює округлі гладенькі блискучі сіро-білі колонії ( S-форми ).На живильному середовищі Ендо утворює колонії темно-червоного кольору без металевого блиску. [2] Ферментативні властивості: штам ферментує лактозу, глюкозу, мальтозу маніт з утворенням кислоти й газу. Слабше - сахарозу і маніт. Не відновлює нітрати. Слабо утворює індол та сірководень. [1] Патогенні властивості: патогенний для білих мишей при підшкірному введенні суспензії добової агарової культури у фізрозчині, в об'ємі 0,5см 3 та концентрації 500 млн.мікробних клітин в 1см 3 ,що становить DL100. Загибель тварин відмічається протягом 2-5-ти діб. Серологічні властивості: стабільність остаточної вірулентності встановлено шляхом 6-тикратних пасажів через організм білих мишей. Імуногенні властивості: парентеральне щеплення білих мишей анакультурою даного штаму в об'ємі 0,5см 3 захищає від контрольного зараження вірулентною культурою Escherichia coli "3-12/150" в 90% випадків. Винахід ілюструється наступними прикладами. Метою винаходу є штам Escherichia coli "3-12/150", який володіє добре вираженими імуногенними властивостями, які. Приклад 1. Білих мишей масою 16-18г імунізували анакультурою штаму Escherichia coli "3-12/150" в кількості 10 голів підшкірно та 10 голів внутріншьом'язево в об'ємі 0,5см 3. Щеплення проводили двічі з інтервалом 7-10 діб. На 10-12-ту добу після другого щеплення проводили гостре зараження вірулентною культурою Escherichia coli штаму "3-12/150" в дозі 500млн. мікробних тіл. В якості контролю були неімунізовані білі миші, в кількості 10 голів. Було встановлено, що коефіцієнт імунологічної ефективності імунізованих тварин склав 90% при 100% загибелі контрольних ( таблиця 1). Приклад 2. 30 голів поросят у віці 3,5 місяці щепили підшкірно в ділянці шиї анакультурою штаму Escherichia coli "3-12/150" в об'ємі 3,0см 3 двічі з інтервалом 14 діб. Контроль - 10 голів неімунізованих поросят-аналогів. На 14-ту добу відбирали проби сироватки крові від поросят обох гр уп і досліджували титри антитіл в реакції аглютинації. Титри антитіл до штаму Escherichia coli "3-12/150" представлені в таблиці 1. Приклад 3. 20 свиноматок імунізували двічі анакультурою штаму Escherichia coli "3-12/150" в об'ємі 5,0см 3 та 10,0см 3 з інтервалом 14 діб підшкірно в ділянці шиї. Контроль - 10 голів нещеплених тварин. Перед щепленням , на 14-ту добу після І та Π щеплення відбирали проби крові від тварин обох груп і досліджували наявність антитіл в реакції аглютинації. Титри антитіл до штаму Escherichia coli "3-12/150" представлені в таблиці 2. Таблиця 1 Результати імунізації білих мишей анакультурою штаму Escherichia coli "3-12/150" № п/п 1. 2. 3. І гр упа II гр упа III група Метод введення анакультури підшкірно В/черевенно Об'єм Кількість голів 0,5см 3 0,5см 3 0,5см 3 10 10 10 Загинуло голів % 1 10 0 10 10 100 Залишилось живих голів % 9 100 10 90 0 0 Таблиця 2 Титри антитіл в сироватці крові щеплених анакультурою штаму Escherichia coli "3-12/150" поросят і свиноматок № п/п 1. Групи тварин Поросята віком 3,5міс.: Кількість голів Доза, см 3 до щеплення 50 3,0см 3 1:80 Титри антитіл Після щеплення І-го ІІ-го 1:80-1:160 1:320-1:640 2. імунізовані контроль Свиноматки: імунізовані контроль 10 3,0см 3 1:80 1:80 1:80 10 5 5,0-10,0см 3 5,0-10,0см 3 1:80 1:160 1:160-1:320 1:160 1:640-1:1280 1:160 Як видно із таблиці 2 після щеплення тварин анакультурою Escherichia coli штам "3-12/150" титр антитіл у свиноматок найвищий, і становили 1:640-1:1280. А у поросят групи 3,5міс титри відповідно були 1:320-1:640. Отже, отримані результати, що наведені в таблицях 1 і 2 свідчать про те, що імунізація тварин анакультурою штаму Escherichia coli "3-12/150" захищає білих мишей від інфікування вірулентною культурою даного штаму та сприяє синтезу специфічних антитіл і формуванню імунітету у поросят та свиноматок. Особливістю штаму Escherichia coli "3-12/150" є наявність гемолітичних властивостей (продукує гемолізин), володіє добре вираженими морфологічними, культуральними, біохімічними, патогенними властивостями, характерними для роду Escherichia. Проведені дослідження показали, що штам Escherichia coli "3-12/150" володіє добре вираженою імуногенною активністю, що дозволяє рекомендувати його для виготовлення вакцинних препаратів, призначених для профілактики ешерихіозів тварин. Список використаної літератури 1. Настанова з лабораторної діагностики ешерихіозу (колібактеріозу) тварин / А.М.Головко, В.О.Ушкалов, П.П.Фукс та інші // Київ, 1995-20с. 2. Определитель бактерий Берджи в 2-х томах. T.1 Пер.с англ. / Под ред.Дж.Хоулта, Н. Крига, П.Снита, Дж. Стейли, С.Уильямса.-М.:Мир, 1997. - 432с. 3. Риженко В.П., Риженко Г.Ф., Акименко Л.І., Риженко І.В., Дементьева С.А., Бєлік С.М., Риженко В.В., Галка І.В., Безименний М.В., Марченко О.М., Черніков О.О. Наукове обґрунтування розробки та ефективності застосування асоційованих вакцин // Науковий вісник НАУ, 2001. - №36. - С.43-49.