Спосіб отримання препаратів хромосом з лімфоцитів крові тварин

Спосіб отримання препаратів хромосом з лімфоцитів крові тварин, який включає відбір периферійної крові з наступним культивуванням лімфоцитів в середовищі 199 з додаванням антибіотиків протягом 48 годин при температурі 37°С, який відрізняється тим, що відбір периферійної крові здійснюють у період з першого по третій тиждень розвитку тварини. (19) (21) 2003088005 (22) 27.08.2003 (24) 15.11.2004 (46) 15.11.2004, Бюл. № 11, 2004 р. (72) Дзіцюк Валентина Валентинівна (73) ІНСТИТУТ РОЗВЕДЕННЯ І ГЕНЕТИКИ ТВАРИН УКРАЇНСЬКОЇ АКАДЕМІЇ АГРАРНИХ Н АУК 3 71123 4 В основу винаходу поставлено завдання ство- фарбування і мікроскопування препаратів. рити такий спосіб отримання препаратів хромосом Результати досліджень. Дослід проводили на з лімфоцитів крові тварин, у якому шляхом зміни телятах 3-тижневого піку (І група). Контролем були режиму відбору крові досягається можливість одетелята 3-місячного віку (II група). Периферійну ржання препарату без використання стимулятора кров телят обох груп відбирали згідно наведеної поділу клітин. Це в значний мірі спрощує і здешеввище методики. Культивування проводили теж лює спосіб. згідно наведеної вище методики з тою лише Для вирішення завдання запропонований спорізницею, що в флакони з кров'ю І гр упи сіб отримання препаратів хромосом з лімфоцитів (дослідної) не додавали мітоген. Після крові тварин, який включає відбір периферійної інкубування, фіксації і розкапування на скельця крові з наступним культивуванням лімфоцитів в зафіксованої суспензії лімфоцитів з крові телят середовищі 199 з додаванням антибіотиків протядослідної групи виявили метафази, придатні для гом 48 годин при температурі 37°С, за яким, згідно цитогенетичного аналізу. Аналіз таблиці показує, з винаходом, відбір периферійної крові здійснюють що без мітогену при культивуванні крові телят 3у період з першого по третій тиждень розвитку тижневого віку отримано в середньому на тварину тварини. 30 придатних для аналізу метафазних пластинок, Дане завдання вирішується шляхом викорисщо є доста тнім для встановлення достовірності тання біологічної особливості організму - переварезультатів досліду. жання асиміляційних процесів, тобто здатності в Таблиця перші тижні життя до швидкого росту і прискореного перебігу процесів клітинного поділу на основі Кількість отриманих мета фа зних пластин ок високого мітотичного індексу. Це стосується і кліКількість отриманих мета фа зних тин крові - лімфоцити в перші дні і тижні життя пластинок тварини теж мають здатність швидко оновлюваЧисло тв арин Вік телят 3додав анням Без додав ання тись. Використовуючи цю біологічну особливість мітогену мітогену організму до посиленого росту на початкових ета9 3 місяці 500 0 пах постембріогенального розвитку, можна отри16 3 тижні 850 480 мати достатню для аналізу кількість клітин на стадії мітозу метафаза II - анафаза І при Таким чином, результати досліду свідчать про культивуванні лімфоцитів в середовищі 199 з анте, що запропонований спосіб одержання препатибіотиками без стимулятора клітинного поділу ратів хромосом з крові тварин раннього віку (1-3 (ФГА чи конканаваліну). Умовою є те, що для культижні) без додавання в культур у ФГ А дає змогу тивування без мітогену придатною є кров молодотримати необхідну для повноцінного аналізу няку 1-3-тижневого віку, оскільки в дорослих твакількість метафазних пластинок. рин проліферація клітин в культурі може Економічна ефективність способу складається відбуватись лише після стимуляції мітогеном. з вартості мітогену, який не використовується при Основні етапи технологічною процесу наприготуванні препаратів хромосом. Так, наприкступні: лад, для отримання препаратів хромосом 100 тва- відбір периферійної крові телят (1-3 тижні): рин потрібно 200мг фітогемагглютинину. Така кров беруть з зовнішньої яремної вени в стерильні кількість даного мітогену за нинішніми цінами кошфлакони, заряджені 1% розчином гепарину (0,5тує до 3тис.грн. Очевидно, що ця сума може бути 1,0мл). зекономлена при використанні запропонованого - транспортування крові: на протязі трьох госпособу приготування хромосом тварин. дин кров перевозять при звичайних умовах, при Джерела інформації: більш тривалому транспортуванню проби крові 1. Bowling А.Т., Byrns G., Spier S. Evidense for a слід помістити в холодильник; single pedigree source of the hyperkalemic periodic - приготування стерильних флаконів і розфаparalysis susceptibility gene in Quarter Horses// сування поживного середовища 199, інактивована Anim.Genet. - 1996. v.27. p.279-281. сиворотка крові великої рогатої худоби і ан2. Dear P.H Genome mapping: A practical apтибіотики; proach. - Oxford, N.Y., Tokyo, 1997. -371p. - інкубування: лейкоцити з периферійної крові 3. Gustavsson I. Banding techniques in chromoкультивують в середовищі 199 з додаванням конsome analysis of domestic animals. Adv. in veter. sci. канаваліну та антибіотиків протягом 48 годин при and compar. med., 1980, 24, 245-289. температурі 37°С. 4. Яковлев А.Н., Никитин Н.С., Козикова Л.В., Стефанова В.Н., Киселева Т.Ю., Бавин В.Г., Про- обробка клітин, приготування препаратів шин С.Н. Оценка генотипа животных с помощью хромосом: суспензію центрифугують (1000об/хв, цитогенетики. - Зоотехния, 2000, 8, с.6-8. 15хв.), інкубують в гіпотонічному розчині КСl протягом 20хв, фіксують сумішшю спирту і льодяної 5. Zabek Т., Ryś A. Defekty genow wystepujace оцтової кислоти (3:1) і наносять на предметні скеu zwierzat gospodarskich. - Biuletyn Informacyjny IZ. - 1998. - R.XXXVI. - 4. - S. 5-13. льця. Комп’ютерна в ерстка Н. Лисенко Підписне Тираж 37 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601