Спосіб раннього виявлення туберкульозу легень

Корисна модель відноситься до галузі медицини, а саме лабораторної діагностики та стосується експресдіагностики туберкульозу. Враховуючи епідемічну ситуацію з туберкульозу, найважливішою проблемою є розробка експрес-методів ранньої діагностики туберкульозу, що відповідає державним пріоритетним напрямкам в галузі розвитку біотехнології в Україні і є важливою складовою частиною Національної програми боротьби із захворюванням на туберкульоз. Існуючі методи діагностики і виділення збудника туберкульозу не завжди повною мірою відповідають вимогам сьогоднішнього дня. Часто традиційні методики не забезпечують потрібної швидкості досліджень, недостатньо чутливі та специфічні. В цих умовах особливого значення набуває розробка експрес-методів раннього виявлення туберкульозу на основі власних технологій та вітчизняної сировини. Прототипом корисної моделі є еритроцитарний діагностикум - танізовані еритроцити з приєднаними до них антигенами. Цей діагностикум використовується для реакції пасивної гемаглютинації з метою визначення титру відповідних антитіл в сироватці крові людини. Але даний метод має ряд недоліків, в першу чергу це розбіжність результатів при дослідженні сироваток крові у порівнянні з класичними біологічними тестами через наявність в досліджуваній сироватці неспецифічних аглютинінів проти власних поверхневих антигенів, та високою вартістю природного носія антигенів. Питання про заміну в діагностичних тест-системах природних носіїв (еритроцитів) синтетичними, з метою збільшення їх стабільності, стандартності і використання в діагностиці феномену латекс-аглютинації, обговорюється з кінця 60-х років. Проте, наявність значної кількості від'ємних результатів, масове впровадження ІФА призвело до припинення робіт з розробки цього методу. В даний час, методи з використанням синтетичних носіїв знову привернули до себе увагу. Перш за все це пов'язано з появою нових латексів, при використанні яких реєструється значно менше неспецифічних реакцій. Перевагами латексних діагностикумів, перед тими в яких в якості основи використовується біологічний матеріал (еритроцити), є відносна стабільність суспензії латекса, однорідний склад, постійний розмір частинок, відсутність рецепторів різної специфічності. Так на основі карбоксильованих латексів (виробник НДІ синтетичного каучуку ім. Лебедева, м, СанктПетербург) були виготовлені тест-системи для серологічної діагностики туберкульозу. Синтез латексів в Україні дав можливість розробити вітчизняні діагностичні препарати. Враховуючи це, нами для експрес-діагностики туберкульозу була використана реакція аглютинації латексу з діагностичними препаратами на основі нових вперше синтезованих в Україні монодисперсних полістирольних латексів, модифікованих за рахунок приєднання груп глутарового альдегіду, акрилату. В якості носіїв використовували специфічні антигени: фосфатидний - з екстрактів клітин штамів Dt/St і Vallee, полісахаридний - із сухих мікробних клітин штамів Dt/St і Vallee, два протеїнові туберкуліни - з концентрованих фільтратів штамів Dt/St і Vallee (туберкулін В) і з фільтратів штаму БЦЖ (туберкулін БЦЖ). Сенсибілізацію латексу антигенами здійснювали наступним чином: до 3% суспензії латексу, виготовленої на основному робочому гліциновому буфері рН 8,2, у співвідношенні 1:1 додавали розчин антигену (попередньо віддіалізований проти цього ж буферу). Антиген в концентрації 500мкг/мл (протеїнові і полісахаридні антигени), 250мкг/мл (фосфатидний антиген) повністю фіксується на частинках латексу. Реакцію аглютинації латексу здійснювали крапельним методом на склі, результати відчитували візуально на темному фоні. Суть реакції полягає в тому, що при змішуванні сироватки крові хворого і латекс-діагностикума з відповідним антигеном присутні там антитіла реагують, збільшуються в об'ємі, склеюються, аглютинують з утворенням специфічних частинок. Інтенсивність реакції оцінювали за системою 4-ох плюсів (візуально спостерігали різної інтенсивності однакові по величині та густині згустки). Позитивною вважали реакцію, оцінену в 2 плюси та більше, яка утримувалася протягом 3-х хвилин. Всього на постановку та облік результатів реакції витрачалось 20-30хв. Контрольні реакції: 1. Суспензія несенсибілізованого латексу і сироватка крові хворого на активний туберкульоз легень (негативна реакція - перевірка нейтральності несенсибілізованого латексу). 2. Суспензія сенсибілізованого латексу і сироватка крові хворого на активний туберкульоз легень розчинена 1:128. Позитивна реакція - перевірка активності сенсибілізованого латексу. 3. Суспензія сенсибілізованого латексу і сироватка крові практично здорової особи. Перевірка специфічності діагностикуму. Для визначення діагностичної цінності розроблених препаратів аналізували в реакції аглютинації латексу сироватки хворих з різними формами туберкульозу так і неспецифічними захворюваннями органів дихання. Всього обстежено 323 хворих, 50 донорів. Виявлено, що у 85% хворих на активний туберкульоз легень визначені високі титри відповідних антитіл при використанні латексного діагностикуму з туберкуліном В (від 1:64 до 1:1024), в середньому 1:141. У хворих на неспецифічні захворювання органів дихання лише 8% сироваток, а у донорів 5% дали позитивну реакцію аглютинації з тим самим діагностичним препаратом, причому титри відповідних сироваток були значно нижчими. При використанні латексних препаратів з туберкуліном БЦЖ, полісахаридним і фосфатидним антигенами були отримані значно нижчі результати: у хворих на активний туберкульоз лише у 50% визначено позитивну реакцію, причому титри відповідних сироваток були значно нижчими ніж при використанні латексних препаратів з туберкуліном В. При паралельній постановці РПГА з тими ж сироватками встановлено, що цей метод менш інформативний ніж реакція аглютинації латексу: серед хворих на активний туберкульоз лише 70% сироваток дали позитивну реакцію з еритроцитарними діагностикумами з туберкуліном В, а з антигенами - туберкуліном БЦЖ, полісахаридним, фосфатидним - 40%, 30%, 35% відповідно. Титри сироваток були низькими і не перевищували 1:32. Серед обстежених хворих на неспецифічні захворювання органів дихання, в РПГА 43% сироваток дали хибно позитивну реакцію (антиген - туберкулін В), з іншими вищевказаними антигенами - 34%, 32%, 22% відповідно. Таким чином, результати клінічної апробації реакції аглютинації латексу, з використанням сконструйованих на основі вітчизняних латексів діагностичних препаратів, свідчать про можливість її використання для раннього виявлення туберкульозу в скринінгових програмах, що дасть можливість своєчасно ізолювати джерело інфекції, попередити її розповсюдження та сприяти більш високій ефективності лікування, дозволить досягти значного економічного ефекту на всіх етапах обстеження населення.