Спосіб доставки полінуклеотиду, що не транскрибується, у рослину, спосіб підсилення активності гербіциду, гербіцидна композиція (варіанти), спосіб селективної боротьби із рослинами-мішенями та рослина, яка міст

Реферат: Винахід стосується способу доставки полінуклеотиду у рослину, способу підсилення активності гербіциду, гербіцидних композицій (варіанти), способу селективної боротьби з самосійними стійкими до гербіцидів рослинами-мішенями, способу дослідження "зворотної" генетики, рослини, яка містить екзогенну длРНК, що не транскрибується, та способу прямої доставки полінуклеотиду, що не транскрибується. UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [0001] Дана заявка витребовує пріоритет попередніх заявок США №№ 61/311762, поданої 8 березня 2010 р., 61/349807, поданої 28 травня 2010 р. і 61/381556, поданої 10 вересня 2010 р., зміст яких повністю включений в даний опис за допомогою посилань. Роздрук послідовності, що міститься у файлі "38-21_56855_D.txt" розміром 133 кілобайта (при вимірюванні в операційній системі MS-Windows), створеному 7 березня 2011 р., подана з даною заявкою і включена в даний документ за допомогою посилання. ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ [0002] Тут описані молекули полінуклеотидів для регуляції генів у рослин і способи виготовлення і використання таких молекул. РІВЕНЬ ТЕХНІКИ [0003] Нездатність гербіцидів контролювати ріст стійких бур'янистих рослин становить проблему, особливо у випадку, коли такі бур'янисті рослини ростуть на полі культури, стійкої до гербіцидів, яка може мати меншу стійкість до гербіциду, ніж бур'яниста рослина. Ідентифіковані бур'янисті рослини, що володіють різними механізмами стійкості до гербіцидів. Автори роботи Gaines et al. (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 107(3):1029-1034 повідомляли про стійкість щириці, обумовлену селекцією численних копій генів, що продукують білки-мішені гербіцидів. У роботах Baerson et al. (2002) Plant Physiol., 129(3):1265-1275; Preston et al. (2006) Pesticide Biochem. Physiol., 84(3):227-235; і Wakelin et al. (2006) Weed Res. (Oxford), 46(5):432-440 повідомлялося про стійкість елевсіни індійської, латуку компасного і пажитниці, обумовлену мутаціями генів, що продукують білки-мішені гербіцидів. Одним зі спостережуваних механізмів стійкості злинки канадської до гліфосату було вакуолярне руйнування гліфосату; див. Ge et al. (2010) Pest Management Sci., 66:576-576. Автори роботи Hidayat et al. (1997) Pesticide Biochem. Physiol., 57(2):137-146 повідомляли про стійкість пальчатки кров’яної, обумовлену експресією ферментів, що метаболізують гербіциди до неактивних хімічних сполук. В роботі Reddy et al. (2008) J. Agric. Food Chem., 56(6):2125-2130 повідомлялось про накопичення амінометилфосфонової кислоти у видах рослин, оброблених гліфосатом. КОРОТКИЙ ОПИС ВИНАХОДУ [0004] У даному винаході описані способи і молекули полінуклеотидів для регуляції генів у рослин, наприклад, шляхом використання РНК для системної регуляції генів. Різні аспекти даного винаходу представляють способи і молекули полінуклеотидів для регуляції ендогенних генів і трансгенів у рослинній клітині й молекулах полінуклеотидів. Полінуклеотиди, композиції і способи, описані тут, придатні для регуляції ендогенних генів у шкідників або патогенів рослин. В одному з аспектів даного винаходу молекули полінуклеотидів представлені в складі композицій, здатних проникати або поглинатися тканиною живої рослини й ініціювати системний сайленсинг ендогенних генів або трансгенів або їх РНК-транскриптів. У деяких аспектах даного винаходу молекули полінуклеотидів в остаточному підсумку забезпечують рослину або дають можливість продукції в клітинах рослини РНК, здатної при фізіологічних умовах рослинної клітини гібридизуватися із РНК-транскриптом ендогенного гена-мішені або трансгена-мішені в клітині рослини, тим самим впливаючи на регуляцію гена-мішені, наприклад, шляхом сайленсингу або супресії гена-мішені. В інших аспектах даного винаходу молекули полінуклеотидів також можна використовувати для того, щоб в остаточному підсумку забезпечити рослину, або для продукції в клітинах рослини, РНК, здатної при фізіологічних умовах гібридизуватися із РНК-транскриптом гена-мішені клітини безхребетного-шкідника або вірусу-патогена рослини, тим самим впливаючи на регуляцію гена-мішені, наприклад, шляхом сайленсингу або супресії гена-мішені. У деяких аспектах сайленсинг або супресія гена-мішені приводить до підвищення експресії іншого гена, який знаходиться під впливом або управлінням експресії гена-мішені. [0005] Вважається, що композиції і способи згідно з винаходом діють одним або декількома природними метаболічними шляхами, залученими у РНК-опосередковану супресію генів, згідно із загальним описом в оглядах Brodersen and Voinnet (2006), Trends Genetics, 22:268-280; Tomari and Zamore (2005) Genes & Dev., 19:517-529; Vaucheret (2006) Genes Dev., 20:759-771; Meins et al. (2005) Annu. Rev. Cell Dev. Biol., 21:297-318; і Jones-Rhoades et al. (2006) Annu. Rev. Plant Biol., 57:19-53. У РНК-опосередкованій супресії генів звичайно бере участь інтермедіат дволанцюгова РНК (длРНК), що утворюється в ході внутрішньомолекулярних взаємодій у межах однієї молекули РНК або міжмолекулярних взаємодій двох молекул РНК. Цей довгий длРНКінтермедіат зазнає процесінгу за участю рибонуклеази сімейства РНКази III (дайсер або дайсерподібної рибонуклеази) з утворенням однієї або декількох більш коротких дволанцюгових РНК, один ланцюг яких вбудований в комплекс РНК-індукованого сайленсингу (“RISC”). Наприклад, шлях міРНК включає розщеплення довгого дволанцюгового РНК-інтермедіату на малі інтерферуючі РНК ("міРНК"). Вважається, що розмір міРНК знаходиться в діапазоні від 1 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 приблизно 19 до приблизно 25 пар основ, однак найпоширеніші класи міРНК рослин включають міРНК, що містять 21 пару основ або 24 пари основ. Див. Hamilton et al. (2002) EMBO J., 21:4671-4679. Як використовується тут, "олігонуклеотид" означає молекулу полінуклеотиду довжиною 18-25 нуклеотидів, за розміром аналогічну процесованим молекулам малих РНК, що беруть участь в механізмах сайленсингу генів. Різні варіанти втілення даного винаходу включають композиції, які включають олігонуклеотиди або полінуклеотиди або суміші олігонуклеотидів і полінуклеотидів. [0006] Аспекти винаходу включають способи і композиції для: забезпечення одноланцюгових молекул РНК у рослинній клітині для системної регуляції генів; обробку композиціями гербіцидів, які включають поверхнево-активні речовини і летальні для рослин агенти, що представляють одноланцюгові РНК для супресії ендогенних генів рослинної клітини; нанесення на поверхню рослини зовнішнього покриття, що включає поверхнево-активну речовину (наприклад, кремнійорганічну поверхнево-активну речовину) і молекулу олігонуклеотиду або полінуклеотиду для супресії ендогенного гена рослинної клітини; композиції контактної дії для індукції сайленсингу гена-мішені рослини, що включають (a) агент, що обумовлює проникність тканин рослини для полінуклеотидів і (б) молекули полінуклеотиду; і обробку композиціями гербіцидів, що включають (a) агент, що обумовлює проникність тканин рослини для молекул полінуклеотиду і (б) молекули полінуклеотиду. У необов'язковому випадку ці композиції можуть включати ненуклеотидний гербіцид. [0007] В інших аспектах винаходу представлені способи для: боротьби із самосійними рослинами, стійкими до гербіцидів; дослідження "зворотної генетики" шляхом регуляції ендогенного гена рослини за рахунок обробки тканини рослини що росте, композицією для впровадження одноланцюгових молекул РНК в рослинну клітину для системної регуляції генів; індукції системного сайленсингу гена-мішені, що включає зовнішнє нанесення полінуклеотидів на рослину; індукції системного сайленсингу гена-мішені в рослині шляхом (a) обробки рослини, що обумовлює проникність тканин рослини для молекул полінуклеотиду і (б) зовнішнього нанесення полінуклеотидів на рослину; дослідження "зворотної генетики" шляхом регуляції ендогенного гена рослини за рахунок зовнішнього нанесення на рослину що росте композиції, яка включає молекули полінуклеотиду і агента, що обумовлює проникність тканин рослини для молекул такого полінуклеотиду. [0008] В інших аспектах винахід представляє рослину, яка включає екзогенну ДНК або РНК для супресії ендогенного гена, причому зазначена екзогенна ДНК не інтегрована в хромосому рослини, екзогенна РНК не є транскриптом ДНК, інтегрованої в хромосому рослини, а ендогенний ген пригнічують шляхом зовнішнього нанесення полінуклеотиду на рослину. Ці й інші аспекти даного винаходу більш докладно описані в наступних розділах. КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ [0009] Фігура 1 являє собою SEQ ID NO:1 - нуклеотидну послідовність, що кодує EPSPS щириці Пальмера. 10) Фігура 2 являє собою SEQ ID NO:3, що є нуклеотидною послідовністю синтезованого гена Pol III. 11) На Фігурі 3 показаний відсоток смертності рослин щириці Пальмера, оброблених длРНК. На Фігурі 3A зображені рослини через 7 діб після обробки гліфосатом. На Фігурі 3B зображені рослини, оброблені поверхнево-активною речовиною і розчином довгих длРНК, а потім, через 72 години - гліфосатом. На Фігурі 3С зображені рослини, оброблені поверхнево-активною речовиною і розчином коротких длРНК, а потім, через 72 години - гліфосатом. 12) На Фігурі 4 показане знебарвлення рослин Nicotiana benthamiana, оброблених композицією длРНК. 13) Фігура 5 являє собою SEQ ID NO:2, що є нуклеотидною послідовністю фітоіндесатурази Nicotiana benthamiana. 14) На Фігурі 6 зображені антизмістовні олДНК-олігонуклеотиди (SEQ ID NO:15), мічені по 5’кінцю Alexa Fluor 488, що проникають у листи щириці Пальмера, стійкої до гліфосату, як описано в Прикладі 9. 15) На Фігурі 7 зображені результати аналізу мРНК EPSPS, виміряні в листях щириці Пальмера, стійкої до гліфосату, оброблених EPSPS-антизмістовними олДНКолігонуклеотидами, як описано в Прикладі 9. Стовпчики подають повторні експерименти по обробці #1 - #4 (позначені числами, замкненими в кола, що належать до Таблиці 2) і контрольні експерименти (листи, оброблені олДНК-олігонуклеотидами, антизмістовними стосовно білка насіння ячменю SEQ ID NO:14, оброблені або не оброблені гліфосатом). 16) На Фігурі 8 зображені результати аналізу білка EPSPS, виміряні в листях щириці Пальмера, стійкої до гліфосату, оброблених нанесенням EPSPS-антизмістовних олДНК 2 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 олігонуклеотидів, як описано в Прикладі 9; варіанти обробки позначені числами, замкненими в кола, і належать до Таблиці 2. 17) На Фігурі 9 зображені результати накопичення шикімату, виміряні в листях щириці Пальмера, стійкої до гліфосату, оброблених EPSPS-антизмістовними олДНК-олігонуклеотидами в ході двох експериментів, як описано в Прикладі 9; варіанти обробки позначені числами, замкненими в кола, і належать до Таблиці 2. 18) На Фігурі 10 зображена нуклеотидна послідовність фітоіндесатурази Nicotiana benthamiana (SEQ ID NO:2). 19) На Фігурі 11 схематично зображене положення проаналізованих олігонуклеотидів і полінуклеотидів (див. Таблицю 3) по відношенню до послідовності фітоінсинтази (SEQ ID NO:16), як описано в Прикладі 10. 20) На Фігурі 12A зображене знебарвлення верхівкового листя рослин Nicotiana benthamiana, оброблених нанесенням буфера (“Контроль”), 200-членного длРНКполінуклеотиду, послідовність якого відповідала сегменту, що складається з нуклеотидів 914– 1113 SEQ ID NO:2 ("200-п.о. длРНК"), і комбінації одноланцюгових ДНК-олігонуклеотидів і полінуклеотидів (SEQ ID Nos:16, 17, 20, 21, 24, 25 і 26) ("оліго олДНК"), як описано в Прикладі 10. На Фігурі 12B зображені результати нозерн-блотингу РНК, виділеної з рослин Nicotiana benthamiana, оброблених буфером (контроль), 200-членним длРНК-полінуклеотидом і олДНКолігонуклеотидами. Крім того, показана РНК, виділена з рослин, підданих стресу шляхом зберігання при 4 градусах Цельсія в темряві протягом ночі перед обробкою 200-членними длРНК-полінуклеотидами. 21) На Фігурі 13 зображене знебарвлення верхівкового листя рослин Nicotiana benthamiana, оброблених нанесенням різних комбінацій полінуклеотидів або олігонуклеотидів у двох повторностях (числа, що відносяться до варіантів обробки перераховані в Таблиці 4), як описано в Прикладі 10. Контрольні рослини (варіант обробки 13 у Таблиці 4) не показані. 22) На Фігурі 14 зображене знебарвлення верхівкового листя рослин Nicotiana benthamiana, оброблених нанесенням полінуклеотидів, перерахованих у Таблиці 5, як описано в Прикладі 10. 23) На Фігурі 15 зображене знебарвлення верхівкового листя, спостережуване у рослин Nicotiana benthamiana після зовнішнього нанесення 21-членної PDS-антизмістовної олДНК (SEQ ID NO:34, "21-п.о. антизмістовна PDS") або раніше проаналізованих 22-членних PDSантизмістовних олігонуклеотидів без промотора T7 (SEQ ID Nos:22 і 23) ("антизмістовна PDS"). Після зовнішнього нанесення чистого буфера або 21-членної PDS-змістовної олДНК (SEQ ID NO:36, "21-п.о. змістовна PDS"), як описано в Прикладі 10, спостерігали незначне знебарвлення або відсутність знебарвлення верхівкового листя. 24) На Фігурі 16 зображене вирівнювання ДНК-послідовностей щириці PDS Пальмера і Nicotiana benthamiana, що демонструє приблизно 71% ідентичності (1252/1762), як описано в Прикладі 11. 25) На Фігурі 17 зображене знебарвлення верхівкового листя, спостережуване у рослин щириці Пальмера, оброблених нанесенням 678-п.о. або 198-п.о. длДНК PDS щириці Пальмера, але не у рослин щириці Пальмера, оброблених нанесенням 260-п.о. длДНК гена листоїда Diabrotica, як описано в Прикладі 11. 26) На Фігурі 18А зображене знебарвлення верхівкового листя, стебел і квіток рослин Nicotiana benthamiana, спочатку оброблених розчином поверхнево-активної речовини, а потім олігонуклеотидом олДНК PDS для індукції системного сайленсингу фітоіндесатурази, як описано в Прикладі 12. На Фігурі 18B зображене знебарвлення верхівкового листя, стебел і квіток рослин Nicotiana benthamiana, оброблених нанесенням олігонуклеотиду олДНК PDS для індукції системного сайленсингу фітоіндесатурази, з кондиціюванням або без кондиціювання розчином поверхнево-активної речовини, як описано в Прикладі 12. 27) На Фігурі 19 зображені результати аналізу різних ліній щириці Пальмера, стійких до гліфосату (три рослини на повторність), оброблених при умовах, перерахованих у Таблиці 6, як описано в Прикладі 13. Фотографії зняті на 7 добу після обробки гліфосатом (експерименти 1-6) або на 9 добу після обробки гліфосатом (експерименти 7-9). 28) На Фігурі 20 зображене положення двох невеликих РНК, ідентифікованих, як такі, що часто зустрічаються в рослинах щириці Пальмера, оброблених длДНК EPSPS, і показаних у вигляді нуклеотидів, виділених підкресленим курсивом у положеннях 564-588 і 743 –767 повнорозмірного EPSPS (SEQ ID NO:40), як описано в Прикладі 14. В послідовності EPSPS також показане положення чотирьох "коротких"молекул длДНК EPSPS олігонуклеотидного розміру (підкреслений некурсивний текст) і трьох "довгих" дволанцюгових РНК-полінуклеотидів (напівжирний текст, як описано в Прикладі 1. 3 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 29) На Фігурі 21А зображені результати обробки рослин щириці Пальмера поверхневоактивною речовиною, а потім длРНК в одній із трьох наношуваних кількостей, з наступною обробкою гербіцидом, як описано в Прикладі 17. На Фігурі 21B зображені результати аналізу 1, виконаного з використанням щириці Пальмера, стійкої до гліфосату і вирощеної з насіння, зібраного в польових умовах, як описано в Прикладі 17; показані рослини через 8 діб і через 30 діб після обробки гербіцидом. 30) На Фігурі 22 зображені результати обробки рослин щириці Пальмера поверхневоактивною речовиною - аміном твердих жирів і сульфатом амонію або реагентами для трансфекції, як описано в Прикладі 18. 31) На Фігурі 23 зображені результати обробки рослин щириці Пальмера, стійких до гліфосату, длРНК EPSPS або гібридами ДНК/РНК EPSPS, як описано в Прикладі 19. 32) На Фігурі 24 зображені результати обробки рослин щириці Пальмера, стійких до гліфосату, полінуклеотидами длРНК EPSPS або олДНК EPSPS, як описано в Прикладі 20. Верхня фотографія була знята через 8 діб після обприскування гербіцидом, а на нижньому графіку (гістограмі) представлені результати у вигляді пошкоджень від гліфосату (ГФ), визначених через 8 діб після обприскування гербіцидом. 33) На Фігурі 25A зображено дванадцять длРНК-полінуклеотидів, відповідних до сегментів ДНК довжиною приблизно по 250 п.о., що мозаїчно перекривають всю кодуючу послідовність і частину 5’- і 3’-нетрансльованих регіонів гена EPSPS щириці Пальмера, як описано в Прикладі 21; чотири “короткі” молекули длРНК EPSPS олігонуклеотидного розміру, що відповідають опису в Прикладі 1 і на Фігурі 1, розташовані в сегментах мозаїки 2, 3, 4 і 8, відповідно, і показані у вигляді ясно-сірих стовпчиків у межах цих сегментів. На Фігурі 25B і Фігурі 25C зображені результати обробки рослин щириці Пальмера, стійких до гліфосату, длРНК, сконструйованими із зазначених чотирьох “коротких” молекул длРНК, або буфером. 34) На Фігурі 26 зображені результати обробки стійких до гліфосату рослин щириці Пальмера гліфосатом з наступним обприскуванням 1% Silwet L-77 і нанесенням длРНК EPSPS у буфері, що містив 2% сульфат амонію, як описано в Прикладі 22. Необроблені (“НО”) контрольні рослини обробляли тільки обприскуванням 1% Silwet L-77, але не гербіцидом і не длРНК. Рослини фотографували і оцінювали на 16 добу після обробки. 35) На Фігурі 27 зображені результати обробки польової популяції висококопійної стійкої до гліфосату щириці Пальмера композицією, що містила 20X або 100X кількість полінуклеотидів длРНК EPSPS, поверхнево-активну речовину, сульфат амонію і гербіцид, або композицією, що містила поверхнево-активну речовину, сульфат амонію і гербіцид, як описано в Прикладі 23. При кожній обробці обробляли ділянки розміром 1 фут на 5 футів у двох повторностях. 36) На Фігурі 28 зображений розвиток знебарвлення і загибель рослин салату, оброблених 1 наномоль олДНК на рослину, на (зверху вниз) 37, 46 і 60 добу після обробки, як описано в Прикладі 24. 37) На Фігурі 29А зображений системний сайленсинг у рослинах салату, підтверджуваний знебарвленням, яке спостерігалось на 4 або 12 добу після обробки нанесенням полінуклеотидів, як описано в Прикладі 24. На Фігурі 29B показаний системний сайленсинг, підтверджуваний знебарвленням, яке спостерігалось на 4 добу після обробки нанесенням чотирьох окремих антизмістовних олДНК ("HL287", SEQ ID NO:43; "HL288", SEQ ID NO:44; "HL289", SEQ ID NO:45; і "HL290", SEQ ID NO:46) або сумішшю всіх чотирьох цих олДНК. 38) На Фігурі 30 зображене знебарвлення листя (праворуч зверху) і квіток (праворуч посередині) рослин томату, оброблених полінуклеотидами фітоіндесатурази томату, як описано в Прикладі 25. На Фігурі 30 також показане сповільнення росту рослин томату, оброблених полінуклеотидами PDS (знизу). 39) На Фігурі 31 показане підсилення гліфосатної гербіцидної активності полінуклеотидів EPSPS по відношенню до низькокопійної щириці Пальмера полінуклеотидами TIF і те, що полінуклеотиди TIF володіли гербіцидною активністю самі по собі, як описано в Прикладі 26. Полінуклеотиди EPSPS "1, 3, 4" належать до "коротких" длРНК, що містять антизмістовний ланцюг, здатний гібридизуватися із мРНК, що є транскриптом гена EPSPS щириці Пальмера (SEQ ID NO:1) в положеннях 14-38 (коротка длРНК-1), 345-369 (коротка длРНК-3) і 1105-1129 (коротка длРНК-4), відповідно, позначених підкресленими нуклеотидами на Фігурі 1 (див. Приклад 1). EPSPS “5” відноситься до IDT [5] (SEQ ID NOS:91-92, як описано в Таблиці 11). 40) На Фігурі 32 показане підсилення гліфосатної гербіцидної активності полінуклеотидів EPSPS по відношенню до висококопійної щириці Пальмера полінуклеотидами TIF і те, що полінуклеотиди TIF володіли гербіцидною активністю самі по собі, як описано в Прикладі 26. Полінуклеотиди EPSPS "1, 3, 4" належать до "коротких" длРНК, що містять антизмістовний ланцюг, здатний гібридизуватися із мРНК, що є транскриптом гена EPSPS щириці Пальмера 4 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (SEQ ID NO:1) у положеннях 14-38 (коротка длРНК-1), 345-369 (коротка длРНК-3) і 1105-1129 (коротка длРНК-4), відповідно, позначених підкресленими нуклеотидами на Фігурі 1 (див. Приклад 1). EPSPS "5" відноситься до IDT [5] (SEQ ID NOS:91-92, як описано в Таблиці 11). 41) На Фігурі 33 показаний вплив гербіцидів на щирицю Пальмера після обробки зазначеними комбінаціями неполінуклеотидних гербіцидів і полінуклеотидів, як описано в Прикладі 28. 42) На Фігурі 34 зображене вирівнювання промотора локусу 1 PDS Nicotiana benthamiana (SEQ ID NO:319) і промотора локусу 2 PDS (SEQ ID NO:320), як описано в Прикладі 30. 43) На Фігурі 35 схематично зображені промотори локусу 1 і локусу 2 PDS Nicotiana benthamiana і регіони, що є мішенями суміші полінуклеотидів, як описано в Прикладі 30. 44) На Фігурі 36 показане змінення висоти у рослин Nicotiana benthamiana, оброблених PDSантизмістовним полінуклеотидом (Фігура 36A), EPSPS-антизмістовними полінуклеотидами (Фігура 36B) або RuBisCo-антизмістовним полінуклеотидом (Фігура 36C), як описано в Прикладі 33. 45) На Фігурі 37 показаний вплив зовнішнього нанесення длРНК-полінуклеотидів ("оліго ДНК EPSPS"), мішенню яких є ендогенний ген EPSPS, або чистого буфера в якості контролю на однодольні рослини Zea mays (Gaspe), як описано в Прикладі 34. 46) На Фігурі 38 показаний вплив різних протиіонів гліфосату на гербіцидну активність по відношенню до рослин щириці Пальмера, стійких до гліфосату, як описано в Прикладі 35. 47) На Фігурі 39 показаний вплив поліамінів сперміну ("СПМ") і спермідину ("СПМД") або сульфату амонію ("СА") на стійкі до гліфосату рослини щириці Пальмера, що містять 33, 36 або 57 копій EPSPS, як описано в Прикладі 35. “ fb 4X WM” означає “з наступною обробкою гліфосатом (3360 г кислотного еквівалента гербіциду марки Roundup® WeatherMAX® на гектар)”. ДОКЛАДНИЙ ОПИС ВИНАХОДУ 48) Якщо не зазначене інше, нуклеотидні послідовності в тексті даного патентного опису наведені, при читанні зліва направо, у напрямку від 5’ до 3’. Нуклеотидні послідовності можуть бути представлені у вигляді ДНК або РНК, як зазначено; опис одного із цих варіантів в обов'язковому порядку означає й інший варіант, як це відомо фахівцю в даній галузі техніки. Якщо термін поданий в однині, автори винаходу також мали на увазі й аспекти винаходу, описувані цим терміном у множині. Під полінуклеотидами, що “не нетранскрибуються” розуміють, що ці полінуклеотиди не містять транскриптону повної полімерази II. Як використовується тут, "розчин" відноситься до гомогенних сумішей і негомогенних сумішей, наприклад, суспензій, колоїдів, міцел і емульсій. Полінуклеотиди 49) Як використовується тут, “полінуклеотид” відноситься до молекули нуклеїнової кислоти, що містить численні нуклеотиди, і звичайно відноситься як до “олігонуклеотидів” (молекула полінуклеотиду довжиною 18-25 нуклеотидів), так і до полінуклеотидів з 26 або більшою кількістю нуклеотидів. Варіанти втілення даного винаходу включають композиції, що включають олігонуклеотиди довжиною 18-25 нуклеотидів (наприклад, 18-членні, 19-членні, 20-членні, 21членні, 22-членні, 23-членні, 24-членні або 25-членні), або полінуклеотиди середньої довжини, що містять 26 або більше нуклеотидів (наприклад, полінуклеотиди з 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, приблизно 65, приблизно 70, приблизно 75, приблизно 80, приблизно 85, приблизно 90, приблизно 95, приблизно 100, приблизно 110, приблизно 120, приблизно 130, приблизно 140, приблизно 150, приблизно 160, приблизно 170, приблизно 180, приблизно 190, приблизно 200, приблизно 210, приблизно 220, приблизно 230, приблизно 240, приблизно 250, приблизно 260, приблизно 270, приблизно 280, приблизно 290 або приблизно 300 нуклеотидів), або довгі полінуклеотиди довжиною більше ніж приблизно 300 нуклеотидів (наприклад, полінуклеотиди від приблизно 300 до приблизно 400 нуклеотидів, від приблизно 400 до приблизно 500 нуклеотидів, від приблизно 500 до приблизно 600 нуклеотидів, від приблизно 600 до приблизно 700 нуклеотидів, від приблизно 700 до приблизно 800 нуклеотидів, від приблизно 800 до приблизно 900 нуклеотидів, від приблизно 900 до приблизно 1000 нуклеотидів, від приблизно 300 до приблизно 500 нуклеотидів, від приблизно 300 до приблизно 600 нуклеотидів, від приблизно 300 до приблизно 700 нуклеотидів, від приблизно 300 до приблизно 800 нуклеотидів, від приблизно 300 до приблизно 900 нуклеотидів або приблизно 1000 нуклеотидів довжиною, або більше приблизно 1000 нуклеотидів довжиною, наприклад, до повного розміру гена-мішені, включаючи, кодуючі або некодуючі, або як кодуючі, так і некодуючі фрагменти гена-мішені). Якщо полінуклеотид є дволанцюговим, його довжину можна описати аналогічним способом у парах основ. 5 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 50) Композиції полінуклеотидів, використані в різних варіантах втілення даного винаходу, включають олігонуклеотиди або полінуклеотиди або їх суміші, включаючи РНК або ДНК або гібриди РНК / ДНК або хімічно модифіковані олігонуклеотиди або полінуклеотиди або їх суміші. У деяких варіантах здійснення полінуклеотид може являти собою комбінацію рибонуклеотидів і дезоксирибонуклеотидів, наприклад, синтетичні полінуклеотиди, що складаються головним чином з рибонуклеотидів, але містять один або більше кінцевих дезоксирибонуклеотидів, або синтетичні полінуклеотиди, що складаються головним чином з дезоксирибонуклеотидів, але містять один або більше кінцевих дидезоксирибонуклеотидів. У деяких варіантах втілення полінуклеотид включає неканонічні нуклеотиди, наприклад, інозин, тіоуридин або псевдоуридин. У деяких варіантах втілення полінуклеотид включає хімічно модифіковані нуклеотиди. Приклади хімічно модифікованих олігонуклеотидів або полінуклеотидів широко відомі в даній галузі техніки; див., наприклад, роботу Verma and Eckstein (1998) Annu. Rev. Biochem., 67:99–134. Наприклад, природний фосфодіефірний каркас олігонуклеотиду або полінуклеотиду може бути частково або повністю модифікований фосфортіоатними, фосфордитіоатними або метилфосфонатними міжнуклеотидними зв'язками, при синтезі олігонуклеотиду або полінуклеотиду можна використовувати модифіковані нуклеїнові основи або модифіковані вуглеводи, і олігонуклеотиди або полінуклеотиди можна мітити флуоресцентною молекулою (наприклад, флуоресцеїном або родаміном) або іншою міткою (наприклад, біотином). 51) Полінуклеотиди можуть являти собою одно- або дволанцюгову РНК або одно- або дволанцюгову ДНК, або дволанцюгові гібриди ДНК/РНК або їх модифіковані аналоги, і можуть мати довжину олігонуклеотиду або більшу. У більш конкретних варіантах втілення даного винаходу полінуклеотиди, що забезпечують надходження одноланцюгової РНК у рослинну, вибирають із групи, яка складається з (a) одноланцюгової молекули РНК, (б) одноланцюгової молекули РНК, що самогібридизується з утворенням дволанцюгової молекули РНК, (в) дволанцюгової молекули РНК, (г) одноланцюгової молекули ДНК, (д) одноланцюгової молекули ДНК, що самогібридизується з утворенням дволанцюгової молекули ДНК, і (е) одноланцюгової молекули ДНК, що включає модифікований ген Pol III, який транскрибується в молекулу РНК, (ж) дволанцюгової молекули ДНК, (з) дволанцюгової молекули ДНК, що включає модифікований ген Pol III, який транскрибується в молекулу РНК, (i) дволанцюгової молекули РНК / ДНК, що гібридизується, або їх комбінацій. У деяких варіантах втілення ці полінуклеотиди включають хімічно модифіковані нуклеотиди або неканонічні нуклеотиди. У варіантах втілення способу полінуклеотиди включають дволанцюгову ДНК, утворену за рахунок внутрішньомолекулярної гібридизації, дволанцюгову ДНК, утворену за рахунок міжмолекулярної гібридизації, дволанцюгову РНК, утворену за рахунок внутрішньомолекулярної гібридизації або дволанцюгову РНК, утворену за рахунок міжмолекулярної гібридизації. В одному варіанті втілення полінуклеотиди включають одноланцюгову ДНК або одноланцюгову РНК, що самогібридизуються з утворенням шпилькової структури, що має щонайменше частково дволанцюгову структуру, яка включає щонайменше один сегмент, здатний гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітині із РНК, транскрибованою з гена, що є мішенню супресії. Без прив'язки до будь-якого механізму вважається, що такі полінуклеотиди продукують або будуть продукувати одноланцюгову РНК, що включає щонайменше один сегмент, здатний гібридизуватися при фізіологічних умовах уклітині з РНК, транскрибованою з гена, що є мішенню супресії. У деяких інших варіантах втілення полінуклеотиди також включають промотор, звичайно промотор, що функціонує в рослинній клітині, наприклад, промотор pol II, промотор pol III, промотор pol IV або промотор pol V. 52) У деяких варіантах втілення композиції полінуклеотидів містять протиіони або інші молекули, здатні приєднуватися до молекул нуклеїнових кислот, наприклад, іони тетраалкіламонію, іони триалкіламонію, іони сульфонію, іони літію і поліаміни, наприклад, спермін, спермідин або путресцин. У деяких варіантах втілення композиції полінуклеотидів містять неполінуклеотидні гербіциди (наприклад, хімічні гербіциди, описані тут у розділі з заголовком "Білки, що забезпечують стійкість до гербіцидів"), або транспортний агент або агент, що підсилює проникність (див. розділ з заголовком "Агенти і варіанти обробки, що підсилюють проникність"). 53) Полінуклеотиди призначені для індукції системної регуляції або супресії ендогенного гена рослини і сконструйовані таким чином, що містять послідовність, практично ідентичну або практично комплементарну послідовності (яка може являти собою кодуючу послідовність або некодуючу послідовність) ендогенного гена рослини або послідовності РНК, що являє собою транскрипт ендогенного гена рослини. Під фразою "практично ідентичний" або "практично комплементарний" розуміють, що полінуклеотид (або щонайменше один ланцюг дволанцюгового полінуклеотиду) призначений для гібридизації з ендогенним геном або із РНК 6 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 транскриптом ендогенного гена при фізіологічних умовах у клітинах рослини з метою регуляції або супресії ендогенного гена. 54) Варіанти втілення одноланцюгових полінуклеотидів, що діють в рамках даного винаходу, володіють комплементарністю послідовності, яка не обов'язково повинна дорівнювати 100%, але повинна бути щонайменше достатньою для можливості гібридизації із РНК-транскриптом гена-мішені з утворенням дволанцюгової структури при фізіологічних умовах у рослинній клітині, що дає можливість розщеплення згідно з механізмом сайленсингу генів. Так, у варіантах втілення сегмент конструюють таким чином, що він є практично ідентичним або практично комплементарним безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів генамішені або матричної РНК, яка є транскриптом гена-мішені. Під висловом “є практично ідентичним” розуміють 100% ідентичність послідовності або щонайменше приблизно 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 або 99% ідентичність послідовності в порівнянні з безперервною послідовністю з 18 або більшої кількості нуклеотидів гена-мішені або РНК, що є транскриптом гена-мішені; під висловом “є практично комплементарним” розуміють 100% комплементарність послідовності або щонайменше приблизно 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 або 99% комплементарність послідовності в порівнянні з безперервною послідовністю з 18 або більшої кількості нуклеотидів гена-мішені або РНК, що є транскриптом гена-мішені. У деяких варіантах втілення даного винаходу молекули полінуклеотиду конструюють таким чином, що вони володіють 100% ідентичністю або комплементарністю одному алелю даного гена-мішені (наприклад, кодуючій або некодуючій послідовності гена білка, що забезпечеє стійкість до гербіциду, білка, що інактивує гербіцид, гена стресової реакції або життєво необхідного гена); в інших варіантах втілення молекули полінуклеотиду конструюють таким чином, що вони володіють 100% ідентичністю або комплементарністю численним алелям даного гена-мішені. 55) В одному з аспектів даного винаходу полінуклеотиди являють собою модифіковані гени РНК-полімерази III, наприклад, гени, транскриптом яких є 7SL РНК сигнал частки, що розпізнає, або сплайсомна РНК U6 (гени Pol III) або полінуклеотиди, що містять функціональну послідовність промотора Pol III. В одному з варіантів втілення полінуклеотиди являють собою модифіковані гени Pol III, що містять змістовну і антизмістовну ДНК, які відповідають РНК генамішені для регуляції шляхом заміщення послідовності ДНК, яка початково транскрибується геном Pol III. 56) Полінуклеотиди, придатні для використання в рамках даного винаходу, звичайно впливають на регуляцію або модулювання (наприклад, супресію) експресії генів протягом періоду життя обробленої рослини, який дорівнює щонайменше 1 тижню або більше, і звичайно здійснювані системним способом. Наприклад, протягом декількох діб після обробки листя рослини композицією полінуклеотиду згідно з даним винаходом в листях, розташованих більш латерально і вище обробленого листя, і у верхівкових тканинах можна виявити первинні й проміжні міРНК. 57) Способи виготовлення полінуклеотидів загальновідомі в даній галузі. При виготовленні олігонуклеотидів у комерційних масштабах звичайно одержують 2 дезоксирибонуклеотиди на 3'кінці змістовного ланцюга. Довгі молекули полінуклеотидів можна синтезувати при використанні комерційно доступних наборів, наприклад, набори від компанії Ambion містять ДНК, ліговану на 5’-кінці, яка кодує промотор бактеріальної полімерази T7 ланцюга, що утворює ланцюги РНК, які можна об'єднати в длРНК. В якості альтернативи молекули длРНК можна продукувати при використанні експресійних касет в бактеріальних клітинах з регульованою або дефектною активністю ферменту РНКази III. Довгі молекули полінуклеотидів також можна зібрати із численних фрагментів РНК або ДНК. В деяких варіантах втілення при виборі полінуклеотидних послідовностей, ефективних при сайленсингу генів, використовують відомі в даній галузі техніки параметри, наприклад, шкалу Рейнольдса (Reynolds score) і правила Ташля (Tuschl rules). У деяких варіантах втілення при виборі полінуклеотидних послідовностей, ефективних при сайленсингу генів, використовують випадкові конструкції або емпіричний вибір послідовностей полінуклеотидів. У деяких варіантах втілення для зниження випадкового сайленсингу інших генів виконують скринінг послідовності полінуклеотиду по відношенню до геномної ДНК цільової рослини. 58) Композиції полінуклеотидів згідно з даним винаходом можна використовувати у вигляді композицій, наприклад, розчинів молекул полінуклеотиду в низьких концентраціях, окремо або в комбінації з іншими компонентами (наприклад, поверхнево-активними речовинами, солями і неполінуклеотидними гербіцидами), об'єднаними в тому самому розчині або в окремо застосовуваних розчинах. Хоча верхньої межі концентрацій і дозувань молекул полінуклеотидів, який можна було б використовувати в способах згідно з винаходом, не існує, з точки зору 7 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ефективності звичайно слід визначати найменші ефективні концентрації і дозування. Концентрації необхідно коректувати з урахуванням об’єму аерозолю, наношуваного на листя рослин. В одному з варіантів втілення при обробці трав'янистих рослин молекулами 25членного олігонуклеотиду було доцільно використовувати приблизно 1 наномоль молекул олігонуклеотиду на рослину, наприклад, від приблизно 0,05 до 1 наномоль на рослину. Інші варіанти втілення для трав'янистих рослин включають придатні для використання діапазони від приблизно 0,05 до приблизно 100 наномоль або приблизно від 0,1 до приблизно 20 наномоль, або приблизно від 1 наномоль до приблизно 10 наномоль полінуклеотидів на рослину. Для обробки дуже великих рослин, дерев або ліан можуть потребуватись кількості полінуклеотидів збільшені відповідним способом. При використанні довгих молекул длРНК, які можуть бути процесовані на численні олігонуклеотиди, можна використовувати більш низькі концентрації. У прикладах для подальшого ілюстрування варіантів втілення даного винаходу по відношенню до молекул олігонуклеотидів довільно використовують множник 1Х для позначення нанесення 0,8 наномоль молекул полінуклеотиду на рослину; 10Х - 8 наномоль молекул полінуклеотиду на рослину; а 100Х - 80 наномоль молекул полінуклеотиду на рослину; наприклад, у прикладі 23 рослини обробляли водяним розчином, що включає 100Х наношувану кількість длРНК EPSPS (264 мікрограма або 80 наномоль) на рослину. Молекули одноланцюгової РНК 59) Даний винахід представляє молекули полінуклеотидів, що забезпечують одноланцюгову РНК для системної регуляції генів у рослинній клітині. Конкретніше, даний винахід також представляє способи композиції і способи для індукції системної регуляції (наприклад, системної супресії або сайленсингу) гена-мішені рослини шляхом зовнішнього нанесення на рослину молекули полінуклеотиду, що містить сегмент нуклеотидної послідовності, практично ідентичний або практично комплементарний безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів гена-мішені або РНК-транскрипту гена-мішені, причому композиція проникає у внутрішні тканини рослини і індукує системну регуляцію гена-мішені за рахунок дії одноланцюгової РНК, що гібридизується із РНК-транскриптом, наприклад, матричної РНК. Молекула полінуклеотиду може являти собою одну або декілька молекул полінуклеотиду, що містить один такий сегмент, багато копій такого сегмента, багато таких сегментів, що відрізняються один від одного, або їх комбінацію. Транспортні агенти, агенти і варіанти обробки, що підсилюють проникність 60) Композиції і способи згідно з винаходом можуть включати транспортні агенти або агенти і варіанти обробки, що підвищують проникність, для модифікації поверхні тканин рослини, наприклад, листя, стебел, коріння, квіток або плодів для проникнення молекул полінуклеотидів у клітини рослини. Транспорт полінуклеотидів у клітини рослини можна полегшити за рахунок більш раннього або одночасного нанесення агента, що транспортує нуклеотиди, на поверхню рослини. У деяких варіантах втілення транспортний агент наносили безпосередньо після нанесення композиції полінуклеотиду. Агент, що транспортує полінуклеотиди, дає можливість проходу полінуклеотидів через бар'єри кутикулярного воску, продиху і/або бар'єри клітинної стінки і мембрани в клітину рослини. Придатні агенти для полегшення транспорту композиції в клітину рослини включають агенти, що підсилюють проникність зовнішніх тканин рослини або підсилюють проникність рослинних клітин для олігонуклеотидів і полінуклеотидів. Такі агенти для полегшення транспорту композиції в рослинну клітину включають хімічний агент або фізичний агент або їх комбінації. Хімічні агенти для модифікації включають (a) поверхневоактивні речовини, (б) органічні розчинники або водяні розчини або водяні суміші органічних розчинників, (в) окиснювачі, (г) кислоти, (д) основи, (е) масла, (ж) ферменти або їх комбінації. Варіанти втілення способу можуть необов'язково включати етап інкубації, етап нейтралізації (наприклад, для нейтралізації кислоти, основи або окиснювача або інактивації ферменту), етап промивання або їх комбінації. Варіанти втілення агентів або варіантів обробки для підсилення проникності тканин рослини для полінуклеотидів включають емульсії, зворотні емульсії, ліпосоми й інші міцелоподібні композиції. Варіанти втілення агентів або варіантів обробки для підсилення проникності тканин рослини для полінуклеотидів включають протиіони або інші молекули, здатні приєднуватись до молекул нуклеїнових кислот, наприклад, неорганічні іони амонію, іони алкіламонію, іони літію, поліаміни, наприклад, спермін, спермідин або путресцин і інші катіони. Органічні розчинники, придатні для підсилення проникності тканин рослини для полінуклеотидів, включають ДМСО, ДМФ, піридин, N-піролідин, гексаметилфосфорамід, ацетонітрил, діоксан, поліпропіленгліколь, інші розчинники, що змішуються з водою або здатні розчиняти фосфонуклеотиди в неводних системах (наприклад, розчинники, використовувані в реакціях синтезу). Можна використовувати природні або синтетичні масла з поверхневоактивними речовинами або емульгаторами або без них, наприклад, рослинні олії, масла, що 8 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 знижують пораження рослин гербіцидами (наприклад, масла, перераховані в 9-му Короткому посібнику з ад’ювантів гербіцидів (9th Compendium of Herbicide Adjuvants), загальнодоступному он-лайн на сайті www.herbicide.adjuvants.com), наприклад, парафінові масла, ефіри жирних кислот і поліолів або масла, що містять коротколанцюгові молекули, модифіковані амідами або поліамінами, наприклад, поліетиленіміном або N-піролідином. 61) Такі агенти для підсилення проникності тканин рослини для полінуклеотидів наносять на рослину будь-яким стандартним способом, наприклад, шляхом обприскування або нанесення порошку, емульсії, суспензії або розчину; аналогічно, молекули полінуклеотиду наносять на рослину будь-яким стандартним способом, наприклад, шляхом обприскування або нанесення розчину, емульсії або суспензії. 62) Приклади придатних для використання поверхнево-активних речовин включають солі натрію або літію і жирних кислот (наприклад, тверді жири або аміни твердих жирів або фосфоліпіди) і кремнійорганічні поверхнево-активні речовини. Інші придатні для використання поверхнево-активні речовини включають кремнійорганічні поверхнево-активні речовини, включаючи неіоногенні кремнійорганічні поверхнево-активні речовини, наприклад, поверхневоактивні речовини на основі трисилоксанетоксилату або кремнійорганічні поліефірні сополімери, наприклад, сополімер гептаметилтрисилоксану, модифікованого поліалкіленоксидом, і метилового ефіру алілоксиполіпропіленгликолю (комерційно доступного як поверхнево-активна речовина Silwet® L-77, що має CAS-номер 27306-78-1 і EPA-Номер CAL.REG.NO. 5905-50073AA, на даний час доступний у компанії Momentive Performance Materials, Олбані, штат НьюЙорк, США). Якщо поверхнево-активну речовину SilwetL-77 використовують для попереднього обприскування листя рослин або інших поверхонь, ефективними для підготовки листя або інших поверхонь рослини для транспорту полінуклеотидів у клітини рослини при зовнішньому нанесенні на поверхню є концентрації в діапазоні від приблизно 0,015 до приблизно 2 масових відсотків (мас. %) (наприклад, приблизно 0,01, 0,015, 0,02, 0,025, 0,03, 0,035, 0,04, 0,045, 0,05, 0,055, 0,06, 0,065, 0,07, 0,075, 0,08, 0,085, 0,09, 0,095, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,5 мас. %). 63) Придатні для використання фізичні агенти можуть включати (а) абразиви, наприклад, карборунд, корунд, пісок, кальцит, пемзу, гранат і т.п., (б) наночастки, наприклад, вуглецеві нанотрубки, або (с) фізичну силу. Вуглецеві нанотрубки описані в роботах Kam et al. (2004) J. Am. Chem. Soc., 126 (22):6850–6851, Liu et al. (2009) Nano Lett., 9(3):1007–1010 і Khodakovskaya et al. (2009) ACS Nano, 3(10):3221–3227. Агенти на основі фізичних сил можуть включати нагрівання, охолодження, вплив позитивним тиском або обробку ультразвуком. Варіанти втілення способу можуть необов'язково включати етап інкубації, етап нейтралізації (наприклад, для нейтралізації кислоти, основи або окиснювача або інактивації ферменту), етап промивання або їх комбінації. Способи згідно з винаходом також можуть включати використання інших агентів, які виявляють підсилюючу дію внаслідок сайленсингу деяких генів. Наприклад, якщо полінуклеотид призначений для регуляції генів, що забезпечують стійкість до гербіцидів, наступне застосування гербіциду може сильно впливати на ефективність гербіциду. 64) Агенти для лабораторного підсилення проникності тканин рослини для полінуклеотидів включають, наприклад, нанесення хімічного агента, ферментативну обробку, нагрівання або охолодження, вплив позитивним або негативним тиском або обробку ультразвуком. Агенти для підсилення проникності тканин рослини в польових умовах включають хімічні агенти, наприклад, поверхнево-активні речовини і солі. Гени-мішені й гени, необхідні для життєдіяльності 65) Композиції і способи згідно з винаходом можна використовувати для модулювання експресії ендогенного або трансгенного гена-мішені в рослинній клітині. У різних варіантах втілення ген-мішень включає кодуючу (кодуючу білок або трансльовану) послідовність, некодуючу (нетрансльовану) послідовность або як кодуючу, так і некодуючу послідовності. Композиції згідно з винаходом можуть включати полінуклеотиди і олігонуклеотиди, призначені для адресного впливу на численні гени або численні сегменти одного або більше генів. Генмішень може включати численні послідовні сегменти гена-мішені, численні непослідовні сегменти гена-мішені, численні алелі гена-мішені або численні гени-мішені одного або більшої кількості видів. Приклади генів-мішеней включають ендогенні гени рослин і трансгени, що експресуються в рослинних клітинах. Інші приклади генів-мішеней включають ендогенні гени вірусів-патогенів рослин або ендогенні гени безхребетних-шкідників рослин. 66) Гени-мішені можуть включати гени, що кодують білок, які забезпечують стійкість до гербіцидів, некодуючі послідовності, включаючи регуляторні РНК, і гени, необхідні для життєдіяльності, які являють собою гени, необхідні для підтримання клітини в живому стані або для підтримання функцій розмноження організму. Варіанти втілення генів, необхідних для 9 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 життєдіяльності, включають гени, залучені в реплікацію ДНК або РНК, транскрипцію генів, РНКопосередковану регуляцію генів, синтез білка, одержання енергії і ділення клітини. Один із прикладів короткого довідника по генах, необхідних для життєдіяльності, описаний у роботі Zhang et al. (2004) Nucleic Acids Res., 32:D271-D272 і доступний на tubic.tju.edu.cn/deg/; версія DEG 5,4 списки 777; гени, необхідні для життєдіяльності Arabidopsis thaliana. Приклади генів, необхідних для життєдіяльності, включають фактор ініціації трансляції (TIF) і рибулозо-1,5бісфосфаткарбоксилазу/оксигеназу (RuBisCo). Гени-мішені можуть включати гени, що кодують фактори транскрипції, і гени, що кодують ферменти, залучені в біосинтез або катаболізм молекул у рослин, наприклад, не обмежуючись ними, амінокислот, жирних кислот і інших ліпідів, цукрів і інших вуглеводів, біологічних полімерів і вторинних метаболітів, включаючи алкалоїди, терпеноїди, полікетиди, нерибосомні пептиди і вторинні метаболіти змішаного біосинтетичного походження. Композиції і способи 67) Одноланцюгові молекули РНК згідно з винаходом можна впроваджувати в клітину рослини прямо у вигляді РНК або непрямим способом, наприклад, коли молекули полінуклеотиду в композиції для обробки викликають у клітині рослини продукцію одноланцюгової РНК, здатної гібридизуватися із транскриптом гена-мішені. У багатьох варіантах втілення композиції молекул полінуклеотидів, крім того, включають один або декілька агентів, що підсилюють проникність, для полегшення транспорту молекул полінуклеотидів у рослинну клітину, наприклад, агенти для підсилення проникності тканин рослини для полінуклеотидів. В аспектах даного винаходу способи включають одне або більше нанесень композиції полінуклеотиду і одне або більше нанесень агента, що підсилює проникність, для підсилення проникності тканин рослини для полінуклеотидів. Якщо агент для підсилення проникності являє собою кремнійорганічну поверхнево-активну речовину, варіанти втілення молекул полінуклеотидів являють собою дволанцюгові РНК-олігонуклеотиди, одноланцюгові РНК-олігонуклеотиди, дволанцюгові РНК-полінуклеотиди, одноланцюгові РНК-полінуклеотиди, дволанцюгові ДНК-олігонуклеотиди, одноланцюгові ДНК-олігонуклеотиди, дволанцюгові ДНКполінуклеотиди, одноланцюгові ДНК-полінуклеотиди, хімічно модифіковані РНК- або ДНКолігонуклеотиди або полінуклеотиди або їх суміші. 68) Один з аспектів даного винаходу представляє спосіб для індукції системного сайленсингу гена-мішені в рослині, що включає (а) підсилення проникності тканин рослини для полінуклеотидів і (б) зовнішнє нанесення молекул полінуклеотиду на рослину, причому молекули полінуклеотиду включають щонайменше один безперервний сегмент із 18 або більшої кількості нуклеотидів, клонований або одержаний іншим способом з гена-мішені в антизмістовній або змістовній орієнтації, за рахунок чого молекули полінуклеотиду проникають у внутрішні тканини рослини й індукують системний сайленсинг гена-мішені. Підсилення проникності й нанесення полінуклеотидів можна виконувати окремо або одним етапом. Якщо підсилення проникності й нанесення полінуклеотиду виконують у ході окремих етапів, підсилення проникності може передувати або іти слідом за нанесенням полінуклеотиду протягом хвилин, годин або діб. У деяких варіантах втілення на одній тій самій рослині можна виконувати більше одного етапу підсилення проникності або більше одного етапу нанесення молекул полінуклеотиду. У варіантах втілення спосібу, зазначений сегмент можна клонувати або одержати з (a), кодуючого (тобто такого, що кодує білок), (б) некодуючого або (в) як кодуючого, так і некодуючого фрагментів гена-мішені. Некодуючі фрагменти включають ДНК (або РНК, що кодується ДНК), яка кодує регуляторні РНК-послідовності (наприклад, промотори, інтрони, 5'- або 3'-нетрансльовані регіони, мікро-РНК, транс-активні міРНК, природні антизмістовні міРНК і інші малі РНК, що володіють регуляторною функцією) або кодуючу РНК, які володіють структурною або ферментативною функцією (наприклад, рибозими, рибосомні РНК, тРНК, аптамери і рибоперемикачі). 69) У різних варіантах втілення способу індукції системного сайленсингу гена-мішені в рослині, ген-мішень являє собою (а) ендогенний ген рослини, (б) ендогенний ген вірусупатогена рослини, (с) ендогенний ген безхребетного-шкідника рослини, (г) ендогенний ген симбіонта безхребетного-шкідника рослини або (е) штучний ген, впроваджений у трансгенну рослину. У варіантах втілення, де ген-мішень є ендогенним геном рослини, ген-мішень (а) являє собою ендогенний ген рослини, необхідний для підтримки росту або життєдіяльності рослини, (б) кодує білок, що забезпечує стійкість рослини до гербіцидів або (с) транскрибується в молекулу регуляторної РНК. У варіантах втілення способу для індукції системного сайленсингу гена-мішені в рослині, підсилення проникності включає нанесення хімічного агента, обробку абразивом, нанесення пошкоджень, ферментативну обробку, нагрівання або охолодження, вплив позитивним або негативним тиском, обробку ультразвуком або їх комбінації. У деяких 10 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 варіантах втілення підсилення проникності включає нанесення поверхнево-активної речовини, наприклад, кремнійорганічних поверхнево-активних речовин, наприклад, кремнійорганічного поліефірного сополімеру, наприклад, сополімеру гептаметилтрисилоксану, модифікованого поліалкіленоксидом, і метилового ефіру алілоксиполіпропіленгліколю (комерційно доступного як поверхнево-активна речовина Silwet® L-77). У варіантах втілення способу, підсилення проникності включає нанесення (a) поверхнево-активної речовини, (б) органічного розчинника або водяного розчину або водяної суміші органічного розчинника, (в) поліпропіленгліколю або водяного розчину або водяної суміші поліпропіленгліколю, (г) наночасток, (д) окиснювача, (е) кислоти або основи або (ж) масла або їх комбінації. Варіанти втілення способу можуть необов'язково включати етап інкубації, етап нейтралізації (наприклад, для нейтралізації кислоти, основи або окиснювача або інактивації ферменту), етап промивання або їх комбінації. 70) Даний винахід представляє композиції для зовнішнього нанесення для індукції системного сайленсингу гена-мішені в рослині, що включає (а) агент для підсилення проникності тканин рослини для полінуклеотидів і (б) молекули полінуклеотиду, що включають щонайменше один безперервний сегмент із 18 або більшої кількості нуклеотидів, практично ідентичний або комплементарний нуклеотидній послідовності гена-мішені в антизмістовній або змістовній орієнтації. Такі композиції можна використовувати в різних способах, описаних тут, включаючи способи дослідження "зворотної" генетики шляхом модулювання ендогенного гена рослини, а також в якості гербіцидних композицій для описаних способів боротьби з бур'янистими рослинами і самосійними рослинами. Інший аспект винаходу представляє рослину, що включає екзогенну ДНК або РНК для супресії ендогенного гена, причому зазначена екзогенна ДНК не інтегрована в хромосому рослини, а екзогенна РНК не є транскриптом ДНК, інтегрованої в хромосому рослини, і причому ендогенний ген пригнічують шляхом зовнішнього нанесення полінуклеотиду на рослину. В якості альтернативи екзогенна ДНК або РНК може бути призначена для супресії ендогенного гена рослини, залученого в реакцію на шкідника або патоген, для боротьби зі шкідниками або захворюваннями рослин. Таку рослину можна виростити з насіння або одержати в процесі обрізки, клонування або живцювання (тобто рослина, не вирощена з насіння). Така рослина може бути просапною культурою, фруктовою рослиною, овочевою рослиною, деревом або декоративною рослиною. Наприклад, у варіантах втілення згідно з винаходом, описаних тут, рослина являє собою просапну культуру (наприклад, кукурудзу, сою, бавовник, ріпак, цукровий буряк, люцерну, цукрову тростину, рис і пшеницю), або овочеву рослину (наприклад, томат, солодкий перець, гострий перець, диню, кавун, огірок, баклажан, цвітну капусту, броколі, салат, шпинат, цибулю, горох, моркву, цукрову кукурудзу, китайську капусту, цибулю-порей, фенхель, гарбуз, кабачки або гарбуз-горлянку, редис, брюссельську капусту, фізаліс, боби, квасолю або бамію), або зелень (наприклад, базилік, петрушку, кавове дерево або чайний кущ), або фруктову рослину (наприклад, яблуню, грушу, вишню, персик, сливу, абрикос, банан, овочевий банан, столові сорти винограду, винні сорти винограду, цитрусові, авокадо, манго або ягідні культури), або дерево, вирощуване в декоративних або в комерційних цілях (наприклад, фруктове або горіхоплідне дерево), або декоративну рослину (наприклад, квіткову декоративну рослину або кущ або газонну траву). Варіанти втілення рослини, одержаної в процесі обрізки, клонування або живцювання (тобто рослини, не вирощеної з насіння), включають фруктові дерева і рослини, включаючи цитрусові, яблуні, авокадо, томати, баклажан, огірок, дині, кавуни і виноград, а також різні декоративні рослини. Способи дослідження "зворотної" генетики 71) У ще одному аспекті даний винахід представляє спосіб дослідження "зворотної" генетики шляхом регуляції або модулювання ендогенного гена-мішені рослини; такий спосіб включає нанесення на тканини рослини що росте, композиції для впровадження (прямим або непрямим способом) одноланцюгової РНК згідно з винаходом для системної регуляції генів у рослинну клітину. У варіантах втілення такого способу матрична РНК, що кодує білок, або ген регуляторної РНК піддається адресному впливу полінуклеотиду згідно з винаходом, що викликає модулювання гена протягом періоду життя рослини, який дорівнює щонайменше 1 тижню, наприклад, з метою ідентифікації властивостей, які може надавати рослині зовнішнє нанесення полінуклеотидів. Зазначений спосіб, крім того, може включати додаткові етапи, наприклад, вплив великої кількості сполук на рослину з метою ідентифікації взаємодії гербіцидів або вплив на рослину факторів абіотичного стресу (наприклад, нестачі води, нестачі живильних речовин, теплового стресу, холодового стресу, сольового стресу) або біологічну обробку (наприклад, перевірку стійкості до шкідників-комах або нематод або вірусного, грибкового або бактеріального патогена, або впливу хімічної сполуки або біологічного фактора) з метою ідентифікації реакцій рослини на стрес або обробку. У ще одному аспекті даного винаходу 11 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 виконують скринінг бібліотек рослин з різними генами, підданими тимчасовому сайленсингу в порівнянні з бібліотеками сполук (наприклад, гербіцидів, фітогормонів, ендогенних або екзогенних індукторів захисних речовин, наприклад, саліцилової кислоти або гарпинів, нестачі речовин, що являють собою біогенні елементи для рослин, наприклад, азоту, фосфору, калію, сірки, кальцію, магнію, заліза і цинку) з метою ідентифікації взаємодій між такими сполуками. Приклади рослин, придатних для проведення такого скринінгу, включають Amaranthus palmeri і Nicotiana benthamiana. Способи сайленсингу трансгенів 72) У ще одному аспекті даного винаходу цей спосіб можна використовувати для сайленсингу трансгена, що експресується в рослині, у такий спосіб забезпечуючи негативний контроль, що дає можливість незалежного від події вимірювання участі трансгена в продуктивності рослини або його дії на будь-яку властивість. Для одержання негативного контролю може бути необхідна багаторазова послідовна обробка молекулами полінуклеотиду згідно з винаходом під час життєвого циклу рослини. Специфічне застосування 73) У спорідненому аспекті композиції й способи згідно з винаходом також можна використовувати для тимчасового сайленсингу одного або більшої кількості генів у клітині рослини що росте, або в цілій рослині для одержання бажаного фенотипу у відповідь на умови культивування, стресу під впливом навколишнього середовища, абіотичних або біологічних факторів або зміни потреб ринку під час вегетаційного періоду або після збору врожаю. Наприклад, композиції і способи згідно з винаходом можна використовувати для тимчасової супресії генів біосинтезу або катаболізму з метою одержання рослини або рослинного продукту з бажаним фенотипом, наприклад, бажаною композицією живильних речовин у продуктах зернових культур, наприклад, супресії гена FAD2 для одержання бажаного профілю жирних кислот у сої або ріпаковій олії або інших олійних культурах, або супресії генів біосинтезу лігніну, наприклад, COMT і CCOMT з метою одержання більш легкозасвоюваних кормових рослин. Аналогічним способом, композиції і способи згідно з винаходом можна використовувати для тимчасової супресії молекул регуляторних РНК, наприклад, мікро-РНК або хибної мішені ендогенної мікро-РНК, наприклад, ендогенної мікро-РНК, попередника мікро-РНК або хибної мішені мікро-РНК, як описано в публікації патентної заявки США 2009/0070898, включеній в даний документ за допомогою посилання. Варіанти втілення даного винаходу можна використовувати для супресії ендогенного гена рослини, залученого в реакцію на шкідника або патоген, для боротьби зі шкідниками або захворюваннями рослин. Полінуклеотиди, композиції і способи доставки, описані тут, крім того можна використовувати для супресії ендогенного генамішені безхребетного-шкідника рослин, наприклад, лускокрилих або твердокрилих шкідників, які можуть проковтувати РНК із рослин, у такий спосіб забезпечуючи боротьбу зі шкідниками рослин або захворюваннями, що спричиняють шкідники, наприклад, шляхом зовнішнього обприскування зернових, овочевих культур або фруктових дерев молекулами ДНК або РНК, мішенню яких є ген, необхідний для життєдіяльності безхребетного або симбіонта безхребетного-шкідника. Полінуклеотиди, композиції і способи доставки, описані тут, також можна використовувати для забезпечення боротьби з вірусним патогеном, наприклад, за рахунок зовнішнього противірусного обприскування зернових, овочевих культур або фруктових дерев молекулами ДНК або РНК, мішенню яких є ген вірусу. Гербіцидні композиції і способи 74) Один з аспектів даного винаходу представляє рідку гербіцидну композицію, що включає молекули полінуклеотиду в якості агентів, які викликають загибель рослини, що забезпечує впровадження щонайменше одного різновиду одноланцюгової РНК, здатної гібридизуватися при фізіологічних умовах у рослинній клітині із РНК-транскриптом ендогенного(их) гена(ів) рослинної клітини. У деяких варіантах втілення ген-мішень кодує білок, що забезпечує стійкість до гербіцидів, або кодує ген, необхідний для підтримки росту або життєдіяльності рослини. Рідка гербіцидна композиція, крім того, може включати агенти, що підсилюють проникність, ненуклеотидні гербіциди або їх комбінації, і може бути використана при багатостадійній обробці ненуклеотидними гербіцидами і/або агентами, що підсилюють проникність, наношуваними окремо. Один з варіантів втілення рідкої гербіцидної композиції являє собою рідину, що включає кремнійорганічну поверхнево-активну речовину в якості агента, що підсилює проникність, і олігонуклеотиди або полінуклеотиди в якості агентів, що викликають загибель рослини, що забезпечує впровадження в клітини рослини щонайменше одного різновиду одноланцюгової РНК, здатної гібридизуватися при фізіологічних умовах у рослинній клітині із РНК-транскриптом гена-мішені рослинної клітини, викликаючи сайленсинг гена-мішені. В одному з варіантів втілення рідка гербіцидна композиція, ефективна проти рослин, стійких до гліфосату, включає 12 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 кремнійорганічну поверхнево-активну речовину, наприклад, поверхнево-активну речовину Silwet® L-77, і молекули полінуклеотиду для впровадження одноланцюгової РНК, здатної гібридизуватися із РНК-транскриптом ендогенного або трансгенного гена EPSPS, що кодує білок EPSPS, стійкий до гліфосату, при фізіологічних умовах у рослинній клітині. Якщо молекула полінуклеотиду призначена для гібридизації при фізіологічних умовах в рослинній клітині з мРНК, що кодує ендогенний білок або з РНК, що не кодує білок, необхідними для підтримки росту або життєдіяльності, і для сайленсингу генів і зниження кількості необхідного для життєдіяльності білка, то молекула полінуклеотиду може діяти в якості агента, що викликає загибель рослини, тобто нуклеотидного гербіциду. Ці гербіцидні композиції, що включають молекули полінуклеотиду, можна пристосувати для зовнішнього нанесення на листя рослини що росте, або для нанесення на коріння або обрізані стебла, наприклад, на рослини, вирощені в горщиках або в гідропонній системі. 75) Один з аспектів даного винаходу представляє композицію, пристосовану для зовнішнього нанесення на листя або інші поверхні живої рослини, що включає агент, який підсилює проникність, наприклад, поверхнево-активну речовину, наприклад, кремнійорганічну поверхнево-активну речовину, і олігонуклеотиди або полінуклеотиди, що забезпечують впровадження (прямим або непрямим способом) одноланцюгової РНК, здатної гібридизуватися при фізіологічних умовах у рослинній клітині із РНК-транскриптом ендогенного гена рослинної клітини. В одному з варіантів втілення ендогенний ген рослини являє собою ендогенний ген рослини, що кодує білок, який забезпечує стійкість до гербіцидів, наприклад, гліфосату, дикамбі або сульфонілсечовині. Приклади таких білків, що забезпечують стійкість до гербіцидів, описані нижче в розділі "Білки, що забезпечують стійкість до гербіцидів". 76) Ще один аспект винаходу являє собою спосіб боротьби із самосійними стійкими до гербіцидів рослинами, що ростуть на полі з культурами, стійкими до гербіцидів, який включає нанесення на листя або інші поверхні самосійних рослин композиції, що забезпечує впровадження або дає можливість продукції у клітинах самосійної рослини молекули одноланцюгової РНК, здатної гібридизуватись при фізіологічних умовах у клітині самосійної рослини із РНК-транскриптом ендогенного гена клітини, причому зазначений ендогенний ген (i) являє собою ген, необхідний для підтримки росту або життєдіяльністі самосійної рослини, (ii) кодує білок, що забезпечує стійкість самосійної рослини до гербіцидів або (iii) транскрибується у регуляторний РНК-агент (наприклад, промотори, а також попередники мікро-РНК, мікро-РНК, транс-активні міРНК й інші некодуючі РНК, що володіють регуляторною функцією, наприклад, аптамери і рибоперемикачі). Композиція, що забезпечує впровадження або що дає можливість продукції в клітинах самосійної рослини молекули одноланцюгової РНК, здатної гібридизуватися при фізіологічних умовах в клітині самосійної рослини із РНК-транскриптом ендогенного гена клітини, включає щонайменше одну молекулу полінуклеотиду, вибрану із групи, яка складається з (a) одноланцюгової молекули РНК, (б) одноланцюгової молекули РНК, що самогібридизується з утворенням дволанцюгової молекули РНК, (в) дволанцюгової молекули РНК, (г) одноланцюгової молекули ДНК, (д) одноланцюгової молекули ДНК, що самогібридизується з утворенням дволанцюгової молекули ДНК, і (е) одноланцюгової молекули ДНК, що включає модифікований ген Pol III, що транскрибується в молекулу РНК, (ж) дволанцюгової молекули ДНК, (з) дволанцюгової молекули ДНК, що включає модифікований ген Pol III, що транскрибується в молекулу РНК, (i) дволанцюгової молекули РНК / ДНК, що гібридизується; У варіантах втілення сайленсингу або супресії ендогенного гена самосійної рослини, що кодує білок, який забезпечує стійкість самосійної рослини до гербіцидів, зазначений спосіб може включати нанесення певної кількості гербіциду, до якого зазначений білок забезпечує стійкість, на самосійну рослину. Композиції і способи згідно з винаходом можна використовувати для боротьби з бур'янистими рослинами, малочутливими (стійкими) до гербіцидів, або самосійними трансгенними рослинами, малочутливими (стійкими) до гербіцидів, які можуть рости на полях культур, наприклад, на полі стійкої до гербіцидів культури, наприклад, кукурудзи, сої, бавовнику, ріпаку, цукрового буряку, люцерни, цукрової тростини, рису, пшениці, а також фруктових і овочевих культур. У деяких з таких варіантів втілення бур'яниста або самосійна рослина являє собою щирицю (наприклад, щирицю Пальмера) і інші види щириці, злинку канадську, щирицю брудну / щирицю горбкувату, амброзію трироздільну, амброзію полинолисту, сорго алепськое, елевсіну індійську, пажитницю, пальчатку кров’яну, латук компасний, абутілон Теофраста, люцерну, кукурудзу, сою, ріпак, бавовник, цукровий буряк, цукрову тростину, рис або пшеницю. У деяких з таких варіантів втілення ендогенний ген кодує білок, що забезпечує стійкість до гербіцидів; приклади таких білків описані тут у розділі "Білки, що забезпечують стійкість до гербіцидів". В інших таких варіантах втілення одноланцюгова РНК селективно пригнічує ген у рослині конкретного виду, але не в інших рослинах, що дає можливість селективної боротьби із 13 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 цим видом рослин. В інших таких варіантах втілення неселективна молекула одноланцюгової РНК пригнічує розповсюджений ген у рослинах багатьох видів, що дає можливість боротьби з розширеною групою або таксоном рослин. У більш конкретних варіантах втілення зазначений спосіб також включає нанесення на бур'янисту або самосійну рослину певної кількості ненуклеотидного гербіциду (наприклад, гліфосату, дікамби, глюфосинату або сульфонілсечовини), до якого білок, що є мішенню молекули РНК, забезпечує стійкість, що дає можливість використання подвійного механізму дії за рахунок зниження продукції білка-мішені під дією молекули РНК і інгібування функції білка що продукується, під дією ненуклеотидного гербіциду; гербіцид можна застосовувати на окремому (більш ранньому або пізньому) етапі або разом з композицією нуклеотиду. Застосування композиції полінуклеотиду одночасно або після застосування традиційного ненуклеотидного гербіциду в деяких випадках забезпечує синергічний ефект боротьби з бур'янистими або самосійними рослинами (тобто коли спільний ефект перевищує суму ефектів роздільної обробки). Білки, що забезпечують стійкість до гербіцидів 77) Природні (нетрансгенні) і трансгенні рослини, що володіють малою чутливістю (стійкістю) до гербіцидів часто містять ген, який кодує білок, відповідальний за стійкість до гербіцидів, тобто трансген, що забезпечує стійкість, мутований ендогенний ген, що забезпечує стійкість або численні копії ендогенного гена, що є звичайною мішенню гербіциду. Стратегія боротьби з такими рослинами полягає в застосуванні агента, який пригнічує або щонайменше знижує експресію гена, що кодує білок, який надає стійкість до гербіцидів. Приклади білків, що забезпечують стійкість до гербіциду, включають, наприклад, 5-енолпірувілшикімат-3фосфатсинтазу (EPSPS), гліфосатоксидоредуктазу (GOX), гліфосатдекарбоксилазу, гліфосат-Nацетилтрансферазу (GAT), дикамбамонооксигеназу, фосфінотрицинацетилтрансферазу, дегалогеназу 2,2-дихлорпропіонової кислоти, синтазу ацетогідроксикарбонової кислоти, ацетолактатсинтазу, галоарилнітрилазу, ацетил-кофермент А-карбоксилазу, дигідроптероатсинтазу, фітоіндесатуразу, оксигеназу протопорфірину IX, гідроксифенілпіруватдіоксигеназу, параамінобензоатсинтазу, глутамінсинтазу, целюлозосинтазу, бета-тубулін і серингідроксиметилтрансферазу. 78) Приклади нуклеїнових кислот, що кодують білки, які надають стійкість до гербіцидів, включають 5-енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтази (EPSPS; див., наприклад, патенти США №№ 5627061, 5633435 RE39247, 6040497 і 5094945 і публікації міжнародних заявок PCT WO04074443 і WO04009761), гліфосатоксидоредуктазу (GOX; патент США № 5463175), гліфосатдекарбоксилазу (публікація міжнародної заявки PCT WO05003362, патент США № 7405347 і публікація патентної заявки США 2004/0177399), гліфосат-N-ацетилтрансферазу (GAT; патент США № 7714188), що надає стійкість до гліфосату; дикамбамонооксигеназу, що надає стійкість до ауксин-подібних гербіцидів, наприклад, до дикамби (патент США № 7105724); фосфінотрицинацетилтрансферазу (pat або bar), що надає стійкість, до фосфінотрицину або глюфосинату (патент США № 5646024); дегалогеназу 2,2-дихлорпропіонової кислоти, що надає стійкість, до 2,2-дихлорпропіонової кислоти (далапону) (публікація міжнародної заявки PCT WO9927116); синтазу ацетогідроксикарбонової кислоти або ацетолактатсинтазу, що надає стійкість до інгібіторів ацетолактатсинтази, наприклад, сульфонілсечовини, імідазолінону, триазолпіримідину, піримідилоксибензоатам і фталіду (патент США № 6225105); галоарилнітрилазу (Bxn), що надає стійкість до бромоксинілу (патент США № 4810648); модифіковану ацетил-коферментА-карбоксилазу, що надає стійкість до циклогександіону (сетоксидиму) і арилоксифеноксипропіонату (галоксифопу) (патент США № 6414222); дигідроптероатсинтазу (sul I), що надає стійкість до сульфонамідних гербіцидів (патент США № 5719046); 32 кДа-поліпептид фотосистеми II (psbA), що надає стійкість до триазинових гербіцидів (Hirschberg et al., 1983, Science, 222:1346-1349); антранілатсинтазу, що надає стійкість до 5-метилтриптофану (патент США № 4581847); синтазу дигідродипіколінової кислоти (dap A), що надає стійкість до аміноетилцистеїну (публікація міжнародної заявки PCT WO8911789); фітоіндесатуразу (crt I), що надає стійкість до піридазинонових гербіцидів, наприклад, норфлуразону (патент Японії JP06343473); гідроксифенілпіруватдіоксигеназу, оксидазу 4-гідроксифенілоцтової кислоти і 1-гідролазу 4-гідроксифенілоцтової кислоти (патент США 7304209), що надає стійкість до циклопропілізоксазолових гербіцидів, наприклад, ізоксафлютолу (патент США № 6268549); модифіковану протопорфіриногеноксидазу I (protox), що надає стійкість до інгібіторів протопорфіриногеноксидази (патент США № 5939602); арилоксіалканоатдіоксигеназу (AAD-1), що надає стійкість до гербіцидів, що містять арилоксіалканоатну групу (WO05107437); серингідроксиметилтрансферазу (публікація патентної заявки США 2008/0155716), стійку до глюфосинату глутамінсинтазу (публікація патентної заявки США 2009/0018016). Приклади таких гербіцидів включають феноксіауксини 14 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (наприклад, 2,4-D і дихлорпроп), піридилоксіауксини (наприклад, флуроксипір і трициклопір), арилоксифеноксипропіонати (AOPP) інгібітори ацетил-кофермент А-карбоксилази (ACCase) (наприклад, галоксифоп, квізалофоп і диклофоп) і інгібітори оксидази 5-заміщеного феноксіацетатпротопорфіриногену IX (наприклад, пірафлуфен і флуміклорак). Нуклеотидні послідовності нуклеїнових кислот, що кодують білки, які забезпечують стійкість до гербіцидів, і послідовності білків, що забезпечують стійкість до гербіцидів, відповідні до опису в патенті США і публікаціях патентних заявок, цитованих у цьому абзаці, включені в даний документ в якості посилань. 79) Аспекти даного винаходу представляють полінуклеотиди і способи для прямого або непрямого впровадження в рослинну клітину РНК, які гібридизуються із РНК, що кодує такі білки, які забезпечують стійкість до гербіцидів, на рівні, смертельному для рослини, або щонайменше на рівні, що знижує стійкість до гербіцидів. Внаслідок виродження послідовності ДНК, що кодує білки, які забезпечують стійкість до гербіцидів, можна сконструювати полінуклеотид для використання згідно з винаходом, який буде особливо ефективним у відношенні конкретної рослини. Внаслідок консервативності доменів ДНК серед великої кількості рослин можна сконструювати полінуклеотид для використання згідно з винаходом, що є ефективним у відношенні різних рослин. 80) У варіанті втілення полінуклеотид змішували з відповідним гербіцидом для підсилення активності гербіциду шляхом забезпечення посиленої гербіцидної активності. У варіанті втілення полінуклеотид використовували окремо від гербіциду, але в комбінації із застосуванням гербіциду в якості попередньої обробки або післяобробки. У варіантах втілення кремнійорганічну поверхнево-активну речовину успішно змішували з гербіцидом і полінуклеотидом або з гербіцидом або полінуклеотидом, якщо ці композиції застосовували послідовно. Рослини в умовах вегетаційного будиночка можна обробити за допомогою самохідного гусеничного обприскувача або лабораторного обприскувача з насадкою 11001XR для доставки зразка розчину з певною швидкістю (наприклад, 140 л/га) при тиску 0,25 МПа. У полі розчин для обробки можна наносити за допомогою ранцевого обприскувача зі стисненим CO2, каліброваного на певну швидкість подачі композиції, із пласколопатевою насадкою 11015 з виготовленою на замовлення єдиною форсункою (для зниження забруднень до мінімуму) при тиску розпилу 0,25 мПа; розпилювач із єдиною форсункою забезпечує смугу ефективного розпилення на 60 см вище листового покрову рослин що ростуть висотою від 3 до 12 дюймів. 81) Вищенаведений опис і приклади, представлені в даний заявці, описують предмет даного винаходу, що включає аспекти і варіанти втілення, описані в наступних пунктах, пронумерованих римськими цифрами, але не обмежуваних ними: (I) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть, або органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається із щонайменше одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного генамішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені. (II) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного генамішені в клітинах рослини, які відрізняються від клітинин, які піддавали такій зовнішній обробці. (III) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид системно регулює експресію ендогенного гена-мішені щонайменше в одному органі рослини. (IV) Спосіб регуляції 15 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, що включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного генамішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначена полінуклеотидна композиція індукує супресію ендогенного гена-мішені. (V) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного генамішені, причому зазначена полінуклеотидна композиція викликає бажаний фенотип рослини що росте або органа рослини. (VI) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначена полінуклеотидна композиція пригнічує експресію ферменту, структурного білка або регуляторного білка в рослині що росте або в органі рослини. (VII) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається із щонайменше одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначена полінуклеотидна композиція являє собою агент, що викликає загибель рослини. (VIII) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного генамішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений ендогенний ген-мішень кодує білок, який взаємодіє з гербіцидом. (IX) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, що включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного генамішені, причому зазначений ендогенний ген-мішень вибирають із групи, яка складається з 5енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтази (EPSPS), синтази ацетогідроксикарбонової кислоти або ацетолактатсинтази (ALS), ацетил-кофермент А-карбоксилази (ACCase), дигідроптероатсинтази, фітоіндесатурази (PDS), оксигенази протопорфірину IX (PPO), гідроксифенілпіруватдіоксигенази (HPPD), параамінобензоатсинтази, глутамінсинтази (GS), 16 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 глутамінсинтази, стійкої до глюфосинату, 1-дезокси-D-ксилулозо-5-фосфатсинтази (DOXPсинтази), дигідроптероатсинтази (DHP-синтази), фенілаланінамонякліази (PAL), глутатіон-Sтрансферази (GST), білка D1 фотосистеми II, монооксигенази, цитохрому P450, целюлозосинтази, бета-тубуліну і серингідроксиметилтрансферази. (X) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного генамішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений ендогенний ген-мішень кодує білок, необхідний для підтримки росту рослини що росте. (XI) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений ендогенний ген-мішень вибирають із групи, яка складається з RuBisCo, фактора ініціації трансляції й фітоіндесатурази. (XII) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного генамішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений ендогенний ген-мішень кодує білок, що забезпечує стійкість до гербіциду. (XIII) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений ендогенний ген-мішень кодує мутантний фермент ацетолактатсинтазу, що надає стійкість до сульфонілсечовини й імідазоліноновим гербіцидам, або мутантну ацетил-CoA-карбоксилазу, що надає стійкість до арилоксифеноксипропіонатних гербіцидів. (XIV) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначена полінуклеотидна композиція, крім того, включає другий полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів другого ендогенного генамішені або матричної РНК, яка є транскриптом другого ендогенного гена-мішені. (XV) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом 17 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного генамішені, причому зазначена полінуклеотидна композиція, крім того, включає другий полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів другого ендогенного генамішені або матричної РНК, яка є транскриптом другого ендогенного гена-мішені, причому зазначений щонайменше один полінуклеотид практично ідентичний або практично комплементарний безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена EPSPS рослин що ростуть, або органів рослин, а зазначений другий полінуклеотид практично ідентичний або практично комплементарний безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена фактора ініціації трансляції рослин що ростуть або органів рослин. (XVI) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений ендогенний ген-мішень є некодуючою послідовністю, кодуючою послідовністю, або комбінацією некодуючої послідовності і кодуючої послідовності. (XVII) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного генамішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначену полінуклеотидну композицію наносять на орган рослин що ростуть. (XVIII) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного генамішені, причому зазначену полінуклеотидну композицію наносять на листя, стебло, насіння, плід або квітку рослин що ростуть. (XIX) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначена полінуклеотидна композиція, крім того, включає другий полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів іншого сегмента ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, який відрізняється від сегмента, що є мішенню зазначеного щонайменше одного полінуклеотиду. (XX) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості 18 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому рослини що ростуть, знаходяться на відкритому полі або у вегетаційному будиночку. (XXI) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного генамішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначені полінуклеотиди не інтегровані в хромосому рослин що ростуть. (XXII) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного генамішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з поверхнево-активної речовини і солі. (XXIII) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з кремнійорганічної поверхнево-активної речовини і солі. (XXIV) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з кремнійорганічної поверхнево-активної речовини - кремнійорганічного поліефірного сополімеру і солі. (XXV) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з кремнійорганічної поверхнево-активної речовини кремнійорганічного поліефірного сополімеру і солі, причому зазначений кремнійорганічний поліефірний сополімер є сополімером гептаметилтрисилоксану, модифікованого поліалкіленоксидом, і метилового ефіру алілоксиполіпропіленгліколю. (XXVI) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена 19 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з поверхнево-активної речовини і солі, причому зазначена сіль являє собою органічну або неорганічну сіль. (XXVII) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з поверхнево-активної речовини, органічної солі амонію і неорганічної солі амонію. (XXVIII) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з поверхнево-активної речовини і сульфату амонію. (XXIX) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть, або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного генамішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникненнящонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з поверхнево-активної речовини і солі, і, крім того, транспортний агент включає зволожувач або хелатуючий агент. (XXX) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначену полінуклеотидну композицію наносять на рослини що ростуть або на органи рослин за допомогою розпилювача. (XXXI) Спосіб регуляції експресії ендогенного гена-мішені в рослинах що ростуть або в органах рослин, який включає зовнішнє нанесення на рослини що ростуть, або на органи рослин полінуклеотидної композиції, яка складається щонайменше з одного полінуклеотиду, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного генамішені, і ефективної кількості транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид регулює експресію ендогенного гена-мішені, причому зазначений полінуклеотид вибирають із групи, яка складається з олДНК, длДНК, олРНК, длРНК і гібридів РНК / ДНК. (XXXII) Спосіб підсилення активності гербіциду в рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з 20 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення полінуклеотидів у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть. (XXXIII) Спосіб підсилення активності гербіциду в рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення полінуклеотидів у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть, причому зазначений ендогенний ген експресує білок і є геном-мішенню гербіциду або геном інактивації гербіциду. (XXXIV) Спосіб підсилення активності гербіциду в рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількостінуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення щонайменше одного полінуклеотиду у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть, причому зазначений ендогенний ген експресує білок і є геном-мішенню гербіциду або геном інактивації гербіциду, вибраним із групи, яка складається з 5-енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтази (EPSPS), синтази ацетогідроксикарбонової кислоти або ацетолактатсинтази (ALS), ацетил-кофермент Акарбоксилази (ACCase), дигідроптероатсинтази, фітоіндесатурази (PDS), оксигенази протопорфірину IX (PPO), гідроксифенілпіруватдіоксигенази (HPPD), параамінобензоатсинтази, глутамінсинтази (GS), глутамінсинтази, стійкої до глюфосинату, 1-дезокси-D-ксилулозо-5фосфатсинтази (DOXP-синтази), дигідроптероатсинтази (DHP-синтази), фенілаланінамоніакліази (PAL), глутатіон-S-трансферази (GST), білка D1 фотосистеми II, монооксигенази, цитохрому P450, целюлозосинтази, бета-тубуліну і серингідроксиметилтрансферази. (XXXV) Спосіб підсилення активності гербіциду в рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення полінуклеотидів у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть, причому зазначену полінуклеотидну композицію і гербіцид застосовують окремо або в тому ж самому розчині. (XXXVI) Спосіб підсилення активності гербіциду в рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення полінуклеотидів у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть, причому зазначений полінуклеотид вибирають із групи, яка складається з олДНК, длДНК, олРНК, длРНК і гібридів РНК / ДНК. (XXXVII) Спосіб підсилення активності гербіциду в 21 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення полінуклеотидів у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть, причому зазначена полінуклеотидна композиція, крім того, включає другий полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів іншого сегмента ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, який відрізняється від сегмента, що є мішенню зазначеного щонайменше одного полінуклеотиду. (XXXVIII) Спосіб підсилення активності гербіциду в рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення полінуклеотидів у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть, причому зазначена полінуклеотидна композиція, крім того, включає велику кількість полінуклеотидів, послідовність кожного з яких практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів іншого сегмента ендогенного гена-мішені або матричної РНК, яка є транскриптом ендогенного гена-мішені, який відрізняється від сегмента, що є мішенню зазначеного щонайменше одного полінуклеотиду. (XXXIX) Спосіб підсилення активності гербіциду в рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення полінуклеотидів у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з поверхневоактивної речовини і солі. (XL) Спосіб підсилення активності гербіциду в рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення полінуклеотидів у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із кремнійорганічної поверхнево-активної речовини і солі. (XLI) Спосіб підсилення активності гербіциду в рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення 22 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 полінуклеотидів у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із кремнійорганічної поверхнево-активної речовини кремнійорганічного поліефірного сополімеру і солі. (XLII) Спосіб підсилення активності гербіциду в рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення полінуклеотидів у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із кремнійорганічної поверхнево-активної речовини кремнійорганічного поліефірного сополімеру і солі, причому зазначений кремнійорганічний поліефірний сополімер є сополімером гептаметилтрисилоксану, модифікованого поліалкіленоксидом, і метилового ефіру алілоксиполіпропіленгліколю. (XLIII) Спосіб підсилення активності гербіциду в рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення полінуклеотидів у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з поверхневоактивної речовини і солі, причому зазначена сіль являє собою органічну або неорганічну сіль. (XLIV) Спосіб підсилення активності гербіциду в рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення полінуклеотидів у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з поверхнево-активної речовини, органічної солі амонію і неорганічної солі амонію. (XLV) Спосіб підсилення активності гербіциду в рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення полінуклеотидів у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з поверхнево-активної речовини і сульфату амонію. (XLVI) Спосіб підсилення активності гербіциду в рослинах що ростуть, який включає (а) зовнішнє нанесення на поверхню рослин що ростуть полінуклеотидної композиції, яка включає щонайменше один полінуклеотид, послідовність якого практично ідентична або практично комплементарна безперервній послідовності із 18 або більше нуклеотидів, практично 23 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 комплементарній безперервній послідовності з 18 або більшої кількості нуклеотидів ендогенного гена рослини, причому зазначений ендогенний ген експресує білок, який взаємодіє з гербіцидом, і ефективну кількість транспортного агента, що забезпечує проникнення полінуклеотидів у внутрішні тканини рослин що ростуть, і (б) нанесення гербіциду на рослини що ростуть; за рахунок чого зазначений щонайменше один полінуклеотид проникає у внутрішні тканини рослин що ростуть, і індукує супресію ендогенного гена, тим самим підсилюючи активність гербіциду в рослинах що ростуть, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з поверхнево-активної речовини і солі, причому зазначений транспортний агент також включає зволожувач або хелатуючий агент. (XLVII) Удосконалення рідкої гербіцидної композиції, пристосованої для зовнішнього нанесення на рослини що ростуть, яка включає поверхнево-активну речовину і щонайменше один агент, який викликає загибель рослин, причому зазначений агент, який викликає загибель рослин, включає полінуклеотиди, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності гена рослини або послідовності РНК, що є транскриптом гена рослини, які викликають системну продукцію малих РНК, що гібридизуються із зондом до гена рослини. (XLVIII) Удосконалення рідкої гербіцидної композиції, яка включає неполінуклеотидний гербіцид, причому зазначена композиція, крім того, включає полінуклеотиди, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності гена рослини або послідовності РНК, що є транскриптом гена рослини. (XLIX) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових ДНКполінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові ДНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт дволанцюгових ДНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини. (L) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових ДНКполінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові ДНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт дволанцюгових ДНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з поверхнево-активної речовини і солі. (LI) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових ДНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові ДНКполінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт дволанцюгових ДНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із кремнійорганічної поверхнево-активної речовини і неорганічної солі. (LII) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових ДНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНКтранскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові ДНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНКтранскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт дволанцюгових ДНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із кремнійорганічної поверхнево-активної речовини - кремнійорганічного поліефірного сополімеру і неорганічної солі. (LIII) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових ДНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові ДНКполінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт дволанцюгових ДНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із кремнійорганічної поверхнево-активної речовини 24 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 кремнійорганічного поліефірного сополімеру і неорганічної солі, причому зазначений кремнійорганічний поліефірний сополімер є сополімером гептаметилтрисилоксану, модифікованого поліалкіленоксидом, і метилового ефіру алілоксиполіпропіленгліколю (доступним як поверхнево-активна речовина Silwet® L-77). (LIV) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових ДНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові ДНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт дволанцюгових ДНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, яка включає, крім того, неполінуклеотидну гербіцидну речовину. (LV) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових ДНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНКтранскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові ДНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНКтранскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт дволанцюгових ДНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений ген рослини кодує білок, що забезпечує стійкість до гербіцидів, який являє собою 5-енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтазу (EPSPS), синтазу ацетогідроксикарбонової кислоти або ацетолактатсинтазу (ALS), ацетил-кофермент Акарбоксилазу (ACCase), дигідроптероатсинтазу, фітоіндесатуразу (PDS), оксигеназу протопорфірину IX (PPO), гідроксифенілпіруватдіоксигеназу (HPPD), параамінобензоатсинтазу, глутамінсинтазу (GS), глутамінсинтазу, стійку до глюфосинату, 1-дезокси-D-ксилулозо-5фосфатсинтазу (DOXP-синтазу), дигідроптероатсинтазу (DHP-синтазу), фенілаланінамоніакліазу (PAL), глутатіон-S-трансферазу (GST), білок D1 фотосистеми II, монооксигеназу, цитохром P450, целюлозосинтазу, бета-тубулін або серингідроксиметилтрансферазу. (LVI) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину одноланцюгових ДНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені одноланцюгові ДНКполінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт одноланцюгових ДНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини. (LVII) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину одноланцюгових ДНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені одноланцюгові ДНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт одноланцюгових ДНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з поверхнево-активної речовини і солі. (LVIII) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину одноланцюгових ДНКполінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені одноланцюгові ДНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт одноланцюгових ДНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із кремнійорганічної поверхнево-активної речовини і неорганічної солі. (LIX) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину одноланцюгових ДНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені одноланцюгові ДНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт одноланцюгових ДНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із кремнійорганічної поверхнево 25 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 активної речовини - кремнійорганічного поліефірного сополімеру і неорганічної солі. (LX) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину одноланцюгових ДНКполінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені одноланцюгові ДНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт одноланцюгових ДНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із кремнійорганічної поверхнево-активної речовини - кремнійорганічного поліефірного сополімеру і неорганічної солі, причому зазначений кремнійорганічний поліефірний сополімер є сополімером гептаметилтрисилоксану, модифікованого поліалкіленоксидом, і метилового ефіру алілоксиполіпропіленгліколю (доступним як поверхнево-активна речовина Silwet® L-77). (LXI) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину одноланцюгових ДНКполінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені одноланцюгові ДНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт одноланцюгових ДНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, яка включає, крім того, неполінуклеотидну гербіцидну речовину. (LXII) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину одноланцюгових ДНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені одноланцюгові ДНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт одноланцюгових ДНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений ген рослини кодує білок, який забезпечує стійкість до гербіцидів, і являє собою 5енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтазу (EPSPS), синтазу ацетогідроксикарбонової кислоти або ацетолактатсинтазу (ALS), ацетил-кофермент А-карбоксилазу (ACCase), дигідроптероатсинтазу, фітоіндесатуразу (PDS), оксигеназу протопорфірину IX (PPO), гідроксифенілпіруватдіоксигеназу (HPPD), параамінобензоатсинтазу, глутамінсинтазу (GS), глутамінсинтазу, стійку до глюфосинату, 1-дезокси-D-ксилулозо-5-фосфатсинтазу (DOXPсинтазу), дигідроптероатсинтазу (DHP-синтазу), фенілаланінамоніакліазу (PAL), глутатіон-Sтрансферазу (GST), білок D1 фотосистеми II, монооксигеназу, цитохром P450, целюлозосинтазу, бета-тубулін або серингідроксиметилтрансферазу. (LXIII) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових РНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові РНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт дволанцюгових РНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини. (LXIV) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових РНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові РНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт дволанцюгових РНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається з поверхнево-активної речовини і солі. (LXV) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових РНКполінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові РНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт дволанцюгових РНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із 26 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 кремнійорганічної поверхнево-активної речовини і неорганічної солі. (LXVI) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових РНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові РНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт дволанцюгових РНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із кремнійорганічної поверхневоактивної речовини - кремнійорганічного поліефірного сополімеру і неорганічної солі. (LXVII) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових РНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові РНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт дволанцюгових РНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із кремнійорганічної поверхнево-активної речовини - кремнійорганічного поліефірного сополімеру і неорганічної солі, причому зазначений кремнійорганічний поліефірний сополімер є сополімером гептаметилтрисилоксану, модифікованого поліалкіленоксидом, і метилового ефіру алілоксиполіпропіленгліколю (доступним як поверхнево-активна речовина Silwet® L-77). (LXVIII) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових РНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові РНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт дволанцюгових РНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, що включає, крім того, неполінуклеотидну гербіцидну речовину. (LXIX) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових РНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові РНКполінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт дволанцюгових РНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений ген рослини кодує білок, якй забезпечує стійкість до гербіцидів, і являє собою 5-енолпірувілшикімат-3фосфатсинтазу (EPSPS), синтазу ацетогідроксикарбонової кислоти або ацетолактатсинтазу (ALS), ацетил-кофермент А-карбоксилазу (ACCase), дигідроптероатсинтазу, фітоіндесатуразу (PDS), оксигеназу протопорфірину IX (PPO), гідроксифенілпіруватдіоксигеназу (HPPD), параамінобензоатсинтазу, глутамінсинтазу (GS), глутамінсинтазу, стійку до глюфосинату, 1дезокси-D-ксилулозо-5-фосфатсинтазу (DOXP-синтазу), дигідроптероатсинтазу (DHP-синтазу), фенілаланінамоніакліазу (PAL), глутатіон-S-трансферазу (GST), білок D1 фотосистеми II, монооксигеназу, цитохром P450, целюлозосинтазу, бета-тубулін або серингідроксиметилтрансферазу. (LXX) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину одноланцюгових РНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені одноланцюгові РНКполінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт одноланцюгових РНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини. (LXXI) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину одноланцюгових РНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені одноланцюгові РНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт одноланцюгових РНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений 27 UA 115023 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 транспортний агент вибирають із групи, яка складається з поверхнево-активної речовини і солі. (LXXII) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину одноланцюгових РНКполінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені одноланцюгові РНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт одноланцюгових РНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із кремнійорганічної поверхнево-активної речовини і неорганічної солі. (LXXIII) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину одноланцюгових РНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені одноланцюгові РНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт одноланцюгових РНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із кремнійорганічної поверхневоактивної речовини - кремнійорганічного поліефірного сополімеру і неорганічної солі. (LXXIV) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину одноланцюгових РНКполінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені одноланцюгові РНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт одноланцюгових РНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений транспортний агент вибирають із групи, яка складається із кремнійорганічної поверхнево-активної речовини - кремнійорганічного поліефірного сополімеру і неорганічної солі, причому зазначений кремнійорганічний поліефірний сополімер є сополімером гептаметилтрисилоксану, модифікованого поліалкіленоксидом, і метилового ефіру алілоксиполіпропіленгліколю (доступним як поверхнево-активна речовина Silwet® L-77). (LXXV) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину одноланцюгових РНКполінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені одноланцюгові РНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт одноланцюгових РНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, що включає, крім того, неполінуклеотидну гербіцидну речовину. (LXXVI) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину одноланцюгових РНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені одноланцюгові РНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом ендогенного гена, викликаючи сайленсинг ендогенного гена; і (б) транспортного агента, що ефективно полегшує транспорт одноланцюгових РНК-полінуклеотидів з поверхні рослини в її клітини, причому зазначений ген рослини кодує білок, який забезпечує стійкість до гербіцидів, що являє собою 5енолпірувілшикімат-3-фосфатсинтазу (EPSPS), синтазу ацетогідроксикарбонової кислоти або ацетолактатсинтазу (ALS), ацетил-кофермент А-карбоксилазу (ACCase), дигідроптероатсинтазу, фітоіндесатуразу (PDS), оксигеназу протопорфірину IX (PPO), гідроксифенілпіруватдіоксигеназу (HPPD), параамінобензоатсинтазу, глутамінсинтазу (GS), глутамінсинтазу, стійку до глюфосинату, 1-дезокси-D-ксилулозо-5-фосфатсинтазу (DOXPсинтазу), дигідроптероатсинтазу (DHP-синтазу), фенілаланінамоніакліазу (PAL), глутатіон-Sтрансферазу (GST), білок D1 фотосистеми II, монооксигеназу, цитохром P450, целюлозосинтазу, бета-тубулін або серингідроксиметилтрансферазу. (LXXVII) Композиція, яка складається головним чином з (a) розчину дволанцюгових гібридних ДНК/ РНК-полінуклеотидів, що не транскрибуються, послідовність яких практично ідентична або комплементарна послідовності ендогенного гена рослини або послідовності РНК-транскрипту ендогенного гена; причому зазначені дволанцюгові гібридні ДНК/ РНК-полінуклеотиди здатні гібридизуватися при фізіологічних умовах у клітинах рослини з ендогенним геном або РНК-транскриптом 28