Нові солі врс-пептидів з органопроективною активністю, спосіб їх отримання і їх використання в терапії

1 Сіль пептидної сполуки для захисту організму (ВРС), що містить 8 амінокислотних залишків, де аніон солі є негативно заряджений пептид, що має загальну формулу )або(2 [Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala] Де Xaa є нейтральний аліфатичний амінокислотний залишок, Yaa є основний амінокислотний залишок, і Zaa є кислий амінокислотний залишок, і де катіон солі є катіоном неорганічної або органічної нетоксичної основи 2 Сіль за П 1 , яка відрізняється тим, що катіон вибраний з групи, що складається з лужних металів, лужноземельних металів, Zn 2+ , NH 4+ , первинних, вторинних і третинних амінів 3 Сіль за п 2, яка відрізняється тим, що катіон лужного металу вибраний з групи, що складається 3 Na , К , Li І CS 4 Сіль за п 2, яка відрізняється тим, що катіон лужноземельного металу являє собою Са 2+ 5 Сіль за п 2, яка відрізняється тим, що первинний амін вибраний з групи, що складається з циклогесиламшу, 2-АМР+(2-амшо-1-пропанолу) і Тріс+(Тріс-(пдроксиметил)амінометану) 6 Сіль за п 2, яка відрізняється тим, що третинний амін являє собою триетаноламін+ 7 Сіль за п 1, яка відрізняється тим, що Хаа є Ala, ЬАІа, Leu, Уаа є Lys, Arg, Orn або Zaa є Glu, Asp, Aad або He, Gly, Has, Val, Nle або Nva, і Apn. 8 Сіль за будь-яким з пунктів 1-7, яка відрізняється тим, що вона додатково містить фармацевтично або діагностично прийнятний носій 9 Сіль за будь-яким з пунктів 1-8, яка відрізняється тим, що вона додатково містить трегалозу 10 Сіль за будь-яким з пунктів 1-9, яка відрізняється тим, що загальна формула є Уаа Zaa Pro Pro Pro Xaa Yad £>ro Ala Asp 2as Ala Kea Xaa Хая. 5 10 15 11 Сіль за будь-яким з пунктів1-10, яка відрізняється тим, що пептид вибраний з групи, що складається з Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lya Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val, E 10 X5 Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lya Pro Ala Asp Asp Rla Gly Leu Val, 10 15 О Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val, S 10 15 Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Val; S 10 14 Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lya Pro Ala Asp Ala Gly Leu Val; 5 10 14 Glu Pro Pro Fro Leu Lys Pro Ala; s о> a Asp Pro Pro Pro lie Arg Pro Ala Asp; 5 (О 9 Glu Pro Pro Fro Leu Lye Pro Ala йар; 5 9 Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Val, 5 10 14 Gly Glu Pro Pro Pro Gly Arg Pro Ala Asp; и 5 10 Glu Pro Pro Pro Leu Lya Pro Ala Asn S Ю Ю S 12 Сіль за будь-яким з пунктів 1-11, яка відрізняється тим, що пептид циклізований, зокрема, амідним зв'язком між першим і останнім амінокислотними залишками 13 Сіль за будь-яким з пунктів 1 -12, яка відрізняється тим, що сіль розчинена у водному або водно-спиртовому розчині, переважно, при рН 6,0-8,5 14 Сумісна стабільна при зберіганні фармацевтична композиція, що містить фармацевтично ефективну КІЛЬКІСТЬ солі пептиду ВРС за будьяким з пунктів 1-13 і необов'язково фізіологічно прийнятний носій 15 Фармацевтична композиція за п 14, яка відрізняється тим, що вона додатково містить трегалозу і використовується для перорального застосування 16 Фармацевтична композиція за п 14 або 15, яка відрізняється тим, що вона застосовується для лікування порушень, пов'язаних або з утворенням оксиду азоту (II) (N0), або з порушеними функціями NO-системи, зокрема, гіпертензії, стенокардії, імпотенції, циркуляторного і септичного шоку, інсульту, запалення, респіраторного дистрессиндрому, адгезії і агрегації тромбоцитів і лейкоцитів, дисфункції ендотелію, ушкоджень шлунковокишкового тракту, розладів перистальтики, цукрового діабету, панкреатиту, гіпотензії і хвороби Паркінсона, дисфункцій або пперфункцій соматосенсорних нервів, зокрема, сенсорної нейропатм, постгерпетичної невралгії, атопічного дерматиту, порушеного загоєння пошкодженої тканини, набутої холодової або теплової кропивниці, псоріазу, бульозного пемфигоіду, екземи, фотодерматозів, хронічного артриту, ушкоджень шлунковокишкового тракту, специфічної або неспецифічної пперреактивності верхнього і нижнього ВІДДІЛІВ дихальних шляхів, бронхіальної астми і риніту, ран, виразок, порушень, пов'язаних з гострим і/або хронічним запаленням, зокрема, хронічного артриту, порушень, пов'язаних з пперчутливістю уповільненого типу, і уражень шлунково-кишкового тракту, печінкових порушень, ушкоджень органів, викликаних вільними радикалами, особливо, викликаних опроміненням, порушень, пов'язаних з Даний винахід відноситься до нових форм для застосування синтетичних ВСР(сполучення для захисту організму) пептидів, що включають від 8 до 15 амінокислотних залишків з молекулярною масою від 900 до 1600 дальтон, які володіють органопротективною активністю, способам їх отримання і їх застосуванню в діагностиці і терапії ВІДОМІ білки і пептиди, які придатні для лікування різних захворювань людей і тварин Багато з цих агентів утвориться in vivo, і їх можна отримувати з тканин тварин або людей для приготування фармацевтичних композицій Прикладами фармацевтично застосовних білків і пептидів є інсулін, еритропоетин, BMP, інтерферони і т д Іншим прикладом є білок шлункового соку із захисною активністю по відношенню до слизової оболонки, який Нещодавно виділили і назвали ВСР WO 92/04368 відноситься до ВСР, яке володіє захисною для організму активністю і має молекулярну масу приблизно 40000 дальтонів, його отриманню і його застосуванню У WO 93/24521 і WO 94/11394 розкриваються ВСР-пептиди, які володіють органопротективною активністю аналогічного типу, яка відома для вихідного ВСР-білка 61955 розладами катехоламшерпчної системи, зокрема, шизофренії, ефектами вживання амфетамшів і зловживання наркотиками, станів, пов'язаних зі стресом, гострого панкреатиту, особливо, з супутньою патологією шлунку і дванадцятипалої кишки, серцевих порушень, депресивних порушень, хвороби Паркінсона і подібної до хвороби Паркінсона патологи, температурних порушень, ушкоджень кісток, викликаних гіпертензією ушкоджень різних органів, порушень коагуляції, больових порушень, судорожних порушень, травм спинного мозку, алкогольних ушкоджень, викликаних зловживанням алкоголем або підвищеним вживанням алкоголю, ішемічних порушень головного мозку, ушкоджень периферичних нервів, каталептичних порушень і нейролептичних порушень, порушень, пов'язаних з аномальними або мутантними лімфоцитами, порушень плоду, атрофії піхви і розвитку остеопорозу, викликаних видаленням яєчників, пухлин, вірусних захворювань, зокрема, СНІД, САК, ушкоджень шлунково-кишкового тракту, когнітивних порушень, синдрому скасування, ниркових порушень і порушень клітинної імунної ВІДПОВІДІ 17 Фармацевтична композиція за п 14 або 15, яка відрізняється тим, що вона застосовується для надання цитопротективної або органопротективної Д" 18 Діагностична стабільна при зберіганні композиція, що містить діагностично ефективну КІЛЬКІСТЬ солі пептиду ВРС за будь-яким з пп 1-13 19 Спосіб одержання солі пептиду ВРС, охарактеризованої в будь-якому з пп 1-13, що передбачає змішування, щонайменше, одного пептиду ВРС у водному або водно-спиртовому розчиннику з одним або декількома основами і одержання солі пептиду ВРС, де катіон солі являє собою катіон неорганічної або органічної нетоксичної основи Sikinc et al in Digestive Diseases and Sciences, 41(1996)7, 1518 - 1526, описують ВСРпентадекапептид 157, який при розчиненні у воді і фізіологічному розчині виявляє лікувальну і профілактичну дію при гострому панкреатиті і супутніх ураженнях шлунку і дванадцятипалої кишки у щурів Таким чином, ВСР-пептиди ВІДОМІ ДЛЯ широкої різноманітності фармацевтичних, застосувань Однак фізико-хімічна стабільність цих пептидів, наприклад, в фізіологічному розчині, є незадовільною Крім того, застосування ВСР-пептидів, особливо при ін'єкції у водному розчині або в фізіологічному розчині викликає біль та/або некроз У цій області добре ВІДОМІ СОЛІ білків пептидів Наприклад, Bertrand М et al в «Journal of Peptide Research», 49(1997)3, 269 - 272 повідомили, що дія конкретних солей дуже виборча відносно стабільності і структури пептидів Наприклад, додавання одновалентних катионів таких, як NH/ до кінцевого 0,1 М розчину nenTHfly(noni(Glu-Leu)) призводить до перетворення у водорозчинну бетаструктуру Навпаки, при використанні ІОНІВ І_І+, Na+ або Cs+ перетворення не спостерігається 61955 Вивчали роль поверхнево-доступних іонних або органічною сполукою, такою як ІЧЬЦ , триета+ + + пар для стабільності білка при визначенні впливу ноламш , циклогексиламш , 2-АМП (2-амшо-1+ доданих солей(КСІ, МдСЬ і І_аСІз) при нейтральнопропанол) або Трис (Трис-(пдроксиметил) аміному і кислому значенні рН застосовано до сконстметан), при умові, що ці катіони є фізіологічно руйованих novo дволанцюговими альфаприйнятними спіральними згорненими в спіраль клубками РеСолі ВСР-пептидів за даним винаходом незультати показують, що додані солі можуть чинити сподівано виявляють, щонайменше, таку ж фарскладну дію на стабільність білка, що включає мацевтичну активність, як і ВСР-пептиди, і додатстабілізацію і дестабілізацію, за допомогою чого ково значно підвищену фізіологічну стабільність в загальний ефект залежить від природи заряджепорівнянні з вільними ВСР-пептидами або ацетаних залишків і іонних взаємодій, присутньої в білці тами ВСР-пептидів Застосований за даним вина[Kohn et al в «Journal of Molecular Biology», ходом катіон не впливає на активність ВСР267(1997)4, 1039-1052] пептидів, але збільшує їх стабільність Солі ВСРпептидів за даним винаходом є, наприклад, більш У попередніх дослідженнях на модельних пепстабільними, ніж ВСР-пептиди або ацетати ВСРтидах також було показано, що сольові містки, пептидів в фізіологічному розчині або воді Крім розташовані і, і+4 уздовж пептидного ланцюга є того, солі за даним винаходмо добре придатні для більш стабілізуючими, ніж такі, розташовані і, і+З з перорального введення і не проявляють небажаперевагою для порядку кислота-основа в порівних побічних ефектів, таких як біль або некроз у нянні з таким ос нова-кислота від N- до С-кінця час або після введення, зокрема, шляхом ІН'ЄКЦІЙ Однак в цей час невідомо, чи надають поверхневі Отже, солі ВСР-пептидів за даним винаходом досольові містки сильну стабілізуючу дію на нативну зволяють поліпшити ентеральне або парентераструктуру білків [Berger et al , в «Journal of Bioльне введення Крім того, солі за даним винахоmolecular Structure and Dynamics», 14(1996) 3, 285 дом більш переважні, внаслідок відсутності яких-291] небудь ознак токсичності до доз 50мг/кг маси тіла Таким чином, властивості солей пептидів відносно їх стабільності, структури і функції в дуже Солі за даним винаходом можна отримати багато чому залежать від конкретних ІОНІВ, ЩО берозчиненням вільного ВСР-пептиду у водному або руть участь в утворенні конкретної солі, та інших водному/спиртовому розчиннику, або інших придавнутрішніх і ЗОВНІШНІХ чинників У цей час неможтних розчинниках з ВІДПОВІДНОЮ ОСНОВОЮ І ПОТІМ ливо передбачити, які конкретні властивості може виділенням отриманої солі за винаходом шляхом мати конкретна сіль конкретного пептиду випаровування розчинника, заморожування і люфілізацм або додавання іншого розчинника, наприТехнічною проблемою, що лежить в основі даклад, діетилового ефіру, до водного та/або спиртоного винаходу є забезпечення ВСР-пептидів в вого розчину солі ВСР-пептиду, спричиняючи більш стабільній формі і діагностична та/або фарвиділення нерозчинної сирої солі Для отримання мацевтична композиція, яка включає ВСРсолі звичайно використовують один або максимум пептиди, що проявляють поліпшену стабільність і, два моля основи, тобто катіону, і один моль вільщонайменше, таку ж фармацевтичну активність, ного ВСР-пептиду Для отримання основних солей як і самі ВСР-пептиди Крім того, технічною проВСР-пептиду, переважно використовують карбоблемою, що лежить в основі даного винаходу, є нати або бікарбонати лужних металів Отримані забезпечення фармацевтичної композиції, в якій солі пептидів добре розчинні у воді Таким чином, подолані вищезгадані недоліки, зокрема, ті, що даний винахід також відноситься до способу отридозволяють робити безболісними ін'єкції ВСРмання солей ВСР-пептидів пептидів Даний винахід дозволяє вирішити вказані проблеми шляхом забезпечення солей ВСР-пептидів і фармацевтичної або діагностичної композиції, що включає фармацевтично або діагностично ефективну КІЛЬКІСТЬ солей ВСР-пептидів, де аніон солі є негативно зарядженим пептидом, що включає від 8 до 15 амінокислот, що має молекулярну масу від 900 до 1600 дальтонів та що має загальну формулу(І) [Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala]C |a6o(+l (I) де Хаа є залишком нейтральної аліфатичної амінокислоти, зокрема, Ala, bAla, Leu, he, Gly, Val, Nie або Nva, Yaa є залишком основної амінокислоти, зокрема, Lys, Arg, Orn або His та Zaa є залишком кислої амінокислоти, зокрема, Glu, Asp, Aad або Apm і де катіон солі є катіоном неорганічної або органічної нетоксичної та фармацевтично прийнятної основи Зокрема, катіон солі є лужним металом або лужноземельним металом, наприклад, Na+, K+, І_Ґ, Cs+, Са 2+ чи іншим металом, наприклад, Zn + або первинним, вторинним або третинним аміном У контексті даного винаходу, основа розглядається, як речовина, що здатна утворювати катіон у розчині, особливо у водному і водному/спиртовому розчині У контексті даного винаходу, фармацевтична активність включає профілактичну і терапевтичну активність ВІДПОВІДНО, фармацевтична композиція відноситься до композицій, що володіють профілактичної та/або терапевтичною активністю Крім того, винахід відноситься до фармацевтичної або діагностичної композиції, що включає солі ВСР-пептидів за даним винаходом, необов'язково в поєднанні з одним або більш фармацевтично прийнятним носієм, а також засобом отримання цих композицій Ці КОМПОЗИЦІЇ придатні для місцевого і системного застосування, наприклад, в формі ІН'ЄКЦІЙНИХ розчинів, таблеток, кремів, капсул, мазей, лосьйонів, таблеток під язик і т д Переважна доза знаходиться в межах від 10 5 до 10 мг/кг маси тіла при системному введенні, або при місцевому - в більш високих концентраціях між 0,1% і 0,5% Встановлення оптимальних доз для конкретного виду лікування може бути проведене відпо 8 61955 відно до рівня техніки Даний винахід також відноситься до фармацевтичної або діагностичної композиції згідно вищепредставленому, яка крім однієї або більше солей ВСР-пептидів за даним винаходом, включає трегалозу, особливо для перорального введення, та/або фармацевтично, або діагностично прийнятні носи, розчинники та/або добавки Композиція, переважно, водорозчинна композиція, за винаходом в доповненні до солі ВСРпептиду додатково включає водорозчинний білок, що шє'ктується в рідині організму без вияву якоінебудь значної фармакологічної активності в концентрації, застосованій в одній суцільній лікарській формі за даним винаходом(в подальшому «водорозчинний білок») В якості подібного водорозчинного білка перевага віддається сироватковому альбуміну, глобуліну, колагену та/або желатину Цей білок можна додавати в КІЛЬКОСТІ, ЩО звичайно використовується в ІН'ЄКЦІЙНИХ фармацевтичних композиціях Так, наприклад, масове співвідношення між водорозчинним білком та сіллю ВСРпептиду дорівнює приблизно від 0,0001 1 до 100 1, переважно приблизно від 0,001 1 до приблизно 10 1 або більш переважно приблизно від 0,01 1 до приблизно 1 1 стерильної води або стерильного фізіологічного розчину до люфілізату або висушеному у вакуумі порошку, в якому разом присутні фармакологічно активна сіль ВСР-карбонати і, якщо необхідно, добавка Ця суцільна лікарська форма може містити одну або більше звичайних добавок таких, як регулювальники рН(наприклад, гліцин, соляна кислота, гідроксид натрію), місцеві анестетики(наприклад, ксилокаш пдрохлорид, хлорбутанол), ізотонізуючі агенти(наприклад, хлорид натрію, маніт, сорбіт), емульгатори, інгібітори адсорбцм(наприклад, Твін® 60 або 80), тальк, крохмаль, лактоза і трагакант, стеарат магнію, гліцерин, пропіленгліколь, консерванти, бензиловий спирт, метилпдроксибезоат та/або арахісове пдрогенізоваване масло Ця суцільна лікарська форма може додатково містити фармакологічно прийнятні наповнювачі такі,як поліетиленгліколь 400 або декстран Далі, винахід також відноситься до самих вищезазначених солей ВСР-пептиду і композицій, що містять їх, зокрема, в сухій та/або суцільній формі, або у водному або водному/спиртовому розчині Значення рН розчину, отриманого з водорозчинної композиції, або солі пептиду за даним винаходом, повинне бути таким, щоб згадане значення рН не впливало яким-небудь побічним чином на активність фармакологічно активного пептиду, і перебувало всередині прийнятних меж для ІН'ЄКЦІЙ загалом і також таким, щоб згадане значення рН не спричиняло значної зміни в'язкості розчину і не давало утворитися осаду і тому подібне Таким чином, розчин переважно буде мати рН приблизно від 6 до 9, переважно від 6/5 до 7,5 Водорозчинна композиція за даним винаходом переважно має форму препарату для парентерального введення В якості згаданого препарату для парентерального введення переважними є ІН'ЄКЦІЙНІ розчини, розчини для введення через слизову оболонку, розчини для введення в ніс та вуха Згадані ІН'ЄКЦІЙНІ розчини включають розчини для внутрішньовенного введення, підшкірного введення, внутрішньоартеріального введення, внутрішньом'язового введення і внутрішньоочного введення Ці тривало ДІЮЧІ препарати можна легко набрати з ампули або флаконів в шприци Якщо при наборі утворяться пухирці, то від них можна легко позбутися при простому стоянні протягом короткого періоду часу Композиції за даним винаходом можуть бути в формі розчиненій у воді, або в люфілізованій формі з кристалізуючою розчинною речовиною такою, як хланіт Додавання стерильної води або стерильного фармакологічного розчину до люфілізату призводить до утворення водного розчину Коли водорозчинну композицію за винаходом перетворюють у водний розчин для введення, концентрація фармакологічно активної солі пептиду в згаданому розчині повинна бути приблизно від 0,0000001 до 10%(маса/об'єм), більш переважно приблизно від 0,000001 до 5%(маса/об'єм) або найбільш переважно приблизно від 0,00001 до 1%(маса/об'єм) Композиція за даним винаходом переважно повинна мати разову дозовану форму, що містить фармакологічно активну сіль ВСР-пептиду за винаходом і, якщо необхідно, разом з додатковими добавками, такими як вищезазначений водорозчинний білок Таким чином, наприклад, два з трьох вищезазначених компонентів призначені для вміщення в ампулу або флакон при їх розчиненні або суспендуванні в стерильній воді або стерильному фізіологічному розчині У цьому випадку, спосіб отримання може включати змішання розчину фармакологічно активної солі ВСР-пептиду і додатково, якщо необхідно, розчину добавки, або додавання добавки в формі порошку до розчину фармакологічно активної солі ВСР-пептиду, або іншу комбінацію відповіднихфіг процедур Лікарську форму можна також приготувати додаванням композиції за даним винаходом повинна бути в межах переносимості при введенні і регулюватися, наприклад, ІЗОТОНІЧНИМИ агентами, такими як хлорид натрію і маніт ТОНІЧНІСТЬ переважно від наполовину до двох разів вище такої для фізіологічного розчину, більш переважно складає від трьох чвертей до півтори від такого фізіологічного розчину В'язкість ВОДНОГО розчину водорозчинної композиції повинна бути досить низькою для ІН'ЄКЦІЙНОГО введення В'язкість переважно складає нижче за 500сПз, більш переважно нижче за 400сПз Значення в'язкості відповідають таким заміряним при використанні віскозиметра типу Е(ТОКІМЕС, Японія) З воронкою LD при 25°С Коли композиція знаходиться в формі люфілізату, переважно, щоб в'язкість, ТОНІЧНІСТЬ І концентрації компонентів у водному розчині, отриманому з нього, знаходилися всередині ВІДПОВІДНИХ меж, згаданих вище Композицію за даним винаходом готують змішанням цих інгредієнтів звичайним способом Мета зміщення інгредієнтів за даним винаходом повинна бути такою, щоб зберігалася активність фармакологічно активної солі ВСР-пептиду і утво ТОНІЧНІСТЬ ВОДНОГО розчину водорозчинної рення пухирців під час способу зводилося до мінімуму Інгредієнти вміщують в судину(наприклад, бутель або барабан) в один і той же час, або в будь-якому порядку Атмосферою в судині може бути, наприклад, стерильне чисте повітря або стерильний чистий азот Розчин, що утворився, можна перенести в невеликі флакони або ампули, і його можна потім піддати люфілізацм Рідку форму або люфілізовану порошкову форму композиції за даним винаходом можна розчинити або диспергувати в розчині біодеградованого полімеру такого, як співполімер ПОЛІ(МОЛОЧНОІгліколевої) кислоти, полі(оксимасляна кислота), співполімер(полюксимасляноі-гліколевоі) кислоти або їх суміші, і потім можна ввести, наприклад, в плівки, мікрокапсули(сферичні мікрогранули) або нанокапсули(сферичні наногранули), особливо в формі м'яких або жорстких капсул Крім того, композицію за даним винаходом, включену в ліпосоми, що включають фосфоліпіди, холестерин або їх ПОХІДНІ, можна додатково диспергувати в фізіологічному розчині і розчині палуронової кислоти, розчиненій в фізіологічному розчині М'яку капсулу можна заповнити рідкою формою композиції за даним винаходом Тверді капсули можна заповнити люфілізованим порошком композиції за даним винаходом або люфілізований порошок за даним винаходом можна спресувати в таблетки ВІДПОВІДНО для ректального призначення або перорального введення Звичайно, композицію за даним винаходом можна постачати в заздалегідь наповненому шприці для самовведення Композицію за даним винаходом можна зберігати при звичайній температурі такій, як від +10°С до +30°С або в межах звичайного охолоджування, переважно приблизно від +2°С до +8°С Винахід також відноситься до нових областей застосування та засобів лікування із застосуванням вищезазначених солей та/або композицій, особливо відносно лікування порушень, пов'язаних або з утворенням оксиду азоту(ЫО), або з ослабленням функцій NO-системи, зокрема, гіпертензії, стенокардії, імпотенції, циркуляторного і септичного шоку, інсульту, запалення, респіраторного дистрес-синдрому, адгезії і агрегації тромбоцитів і лейкоцитів, дисфункції ендотелію, уражень шлунково-кишкового тракту, порушень перистальтики, цукрового діабету, панкреатиту, гіпотензії і хвороби Паркінсона, дисфункцій або пперфункцій соматосенсорних нервів, зокрема, сенсорної невропати, постгерпетичної невралгії, атопічного дерматиту, слабого загоєння травмованої тканини, набутої кропивниці на холод і тепло, псоріазу, бульозного пемфогоіду, екземи, фотодерматозів, хронічного артриту і специфічної і неспецифічної пперактивності верхнього і нижнього ВІДДІЛІВ дихальних шляхів(бронхіальноі астми, риніту), порушень функції ендотелію, ран, виразок, станів, пов'язаних з гострими/або хронічними запаленнями, зокрема, хронічного артриту і захворювань, пов'язаних з пперчутливістю уповільненого типу, і уражень шлунково-кишкового тракту, захворювань печінки, уражень органів, індукованих вільними радикалами, особливо, викликаних опроміненням, 61955 10 захворювань, повязаних з порушеннями катехоламшерпйної системи, зокрема, шизофренії, ефектів, викликаних амфетаміном, зловживання наркотиками, станів, пов'язаних зі стресом, гострого панкреатиту з додатковим стимулюючим впливом на супутню патологію шлунка і дванадцятипалої кишки, серцевих порушень, зокрема, антиаритмічного, антианпнального і кардюпротективного лікування, депресивних розладів, хвороби Паркінсона і патологія, подібна хвороба Паркінсона, температурних порушень, пошкоджень кісток, пошкоджень різних органів, індукованих гіпертензією, порушень коагуляції, больових порушень, судом, травми спинного мозку, алкогольних пошкоджень, індукованих зловживанням алкоголем або підвищеним споживанням алкоголю, ішемічних порушень мозку, пошкоджень периферичних нервів, каталептичних захворювань і нейролептичних розладів, захворювань, пов'язаних з аномальними або мутантними лімфоцитами, порушень у плодів, атрофії піхви і розвитку остеопорозу, викликаних видаленням яєчників, пухлин, вірусних захворювань, зокрема, СНІД або СНІД-асоційованого комплексу, порушень пізнавальної здатності, порушень ВІДМІНИ, порушень нирок і порушень клітинної імунної реакції у ВІДПОВІДЬ Крім того, даний винахід відноситься до солі ВСР-пептиду або фармацевтичної або діагностичної композиції згідно з вищепредставленим, де загальною формулою(ІІ) є Хаа Zaa Pro Pro Pro Xaa Yaa Pro Ala Asp Zaa Ala Xaa Xaa Xaa(N) Даний винахід відноситься, зокрема, до солі ВСР-пептиду або фармакологічної або діагностичної композиції, що включає сіль ВСР-пептиду вищезазначеної загальної формули(І), де пептид вибирається з групи, що складається з Leu Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala LeuGlyVal, Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Ala Gly Leu Val (а також зазначений ВРС157) Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Asp Ala Leu Gly Val, Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Val, Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Ala Gly Leu Val, Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala, Asp Pro Pro Pro he Arg Pro Ala Asp, Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp, Leu Glu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asp Ala Leu Gly Val, Gly Glu Pro Pro Pro Gly Arg Pro Ala Asp Та Giu Pro Pro Pro Leu Lys Pro Ala Asn Ці пептиди ВІДОМІ з WO 94/11394 і WO 93/24521, зміст яких включений в дане розкриття відносно приготування і використання ВСРпептидів Крім того, пептиди можна приєднати до інших функціональних та/або структурних часток таких, як вуглеводень, жири, білки або пептиди, антитіла, рецептори, гормони, цитотоксичні речовини, маркери, фарби, радіоактивні мітки, імуномодулятори, лікарські препарати, носи, мішеньові або сигнальні 12 11 61955 речовини і т п 0,55г не зовсім білої твердої речовини Крім того, винахід відноситься до вищезазнаЧистота отриманої солі 99,3%(ВЕРХ) чених солей ВСР-пептидів і композицій, де пептид Mac-cneKTp(FAB) 1419, більш високі іони при + + + + знаходиться в ЛІНІЙНІЙ або ЦИКЛІЧНІЙ формі, зокре1551(M Cs ), 1684(M Cs2 ) ма, циклізований амідним зв'язком між першим і Дані амінокислотного аналізу отриманої солі останнім амінокислотним залишком пептиду відповідають складу 3Gly, 4Pro, 2АІа, 2Asp, Glu, Leu, Val, Lys Винахід зараз буде пояснений більш детально за допомогою пояснювальних прикладів і супровоІК-спектр(КВг) фігура З джуючих фігур На Фігурах показано УФ-спектр(Н2О) Я,накс=190нм На Фігурі 1 показаний ІК-спектр NaBPC157 Т пл 268°С На Фігурі 2 показаний ІК-спектр Na2BPC157 Приклад 4 отримання Трис-солі ВРС157(ТрісНа Фігурі 3 показаний ІК-спектр дицезієвої солі ВРС157) 0,5г(0,35ммоль) ВРС157 розчиняли в BPC157(Cs2BPC157) Юмл метанолу, що містить 42,6мг(0,35ммоль) На Фігурі 4 показаний ІК-спектр Трис-солі трис-(пдроксиметил)- амшометану(Трис), стериліВРС157(Тріс-ВРС157) зували, пропустивши через 0,2и(фільтр і сушили при випаровуванні метанолу у вакуумі при 40°С На Фігурі 5 показаний ІК-спектр ді-Трис-солі для отримання 0,56г білої твердої речовини ВРС157((Тріс)2ВРС157) На Фігурі 6 показаний ІК-спектр 2Чистота отриманої солі 99,5%(ВЕРХ) амінопропанолової солі ВРС157(2-АМП-ВРС157) Mac-cneKTp(FAB) 1419(MH+) На Фігурі 7 показаний ІК-спектр триетаноламіДані амінокислотного аналізу отриманої солі нової солі ВРС157(ТЕАМ-ВРС157) пептиду відповідають складу 3Gly, 4Рго, 2АІа, Приклад 1 отримання мононатрієвої солі 2Asp, Glu, Leu, Val, Lys BPC157(NaBPC157) ІК-спектр(КВг) фігура 4 0,5г(0,35ммоль) пентадекапептиду з ПОСЛІДОВУФ-спектр(Н2О) Я,накс=190нм НІСТЮ Gly Glu Pro Pro Pro Gly Lys Pro Ala Asp Asp Т пл 250°С(розкладання) Ala Gly Leu Val(BPC157) розчиняли в 10мл води, Приклад 5 отримання ді-Трис-солі що містить 29,6мг бікарбонату натрію(0,35ммоль), ВРС157(Л~рис) 2ВРС157) Сполучення готували стерилізували, пропустивши через 0,2ц фільтр і способом, описаним в прикладі 1, за винятком тосушили сублімаційною сушкою для отримання го, що використали 85,2мг(0,70ммоль) Трис Чис0,48г не зовсім білої твердої речовини тота отриманої солі 99,5%(ВЕРХ) Чистота отриманої солі 99,4%(ВЕРХ) Mac-cneKTp(FAB) 1419(MH+) Дані амінокислоMac-cneKTp(FAB) 1419, більш високі іони при тного аналізу отриманої солі пептиду відповідають 1141(M+Na+) складу 3Gly, 4Pro, 2Ala, 2Asp, Glu, Leu, Val, Lys Амінокислотний аналіз отриманої солі пептиду ІК-спектр(КВг) фігура 5 після гідролізу 6Н НСІ протягом 72 годин в запаяУФ-спектр(Н2О) Я,накс=190нм ній пробірці при 110°С давав значення, ВІДПОВІДНІ Т пл 188-193°С складу 3Gly, 4Pro, 2Ala, 2Asp, Glu, Leu, Val, Lys Приклад 6 отримання 2-амшопропаноловоі ІК-спектр(КВг) фігура 1 солі ВРС157(2-АМП-ВРС157) УФ-спектр(Н2О) Ян к - 190нм, інших максиму- ас Сполучення готували способом, описаним в мів немає прикладі 1 За основу використали 2Т пл 288 - 290°С(розкладання) амшопропанол(2-АМП) Приклад 2 отримання динатрієвої солі Чистота отриманої солі 96,6%(ВЕРХ) BPCI57(Na2BPC157) 0,5г(0,35ммоль) ВРС157 розMac-cneKTp(FAB) 1419(MH+) чиняли в 10 мл етанолу Додавали 1,4мл 0,5 Дані амінокислотного аналізу отриманої солі моль/л метанольного розчину гідроксиду натрію пептиду відповідають складу 3Gly, 4Рго, 2АІа, при помірному перемішуванні Цей розчин стери2Asp, Glu, Leu, Val, Lys лізували, пропускаючи через 0,2ц фільтр, і повільІК-спектр(КВг) фігура 6 но додавали при перемішуванні до діетилового УФ-спектр(Н2О) Я,накс=190нм ефіру(50мл) Відділену білу тверду речовину фільТ пл 158°С(розкладання) трували і промивали діетиловим ефіром для Приклад 7 отримання триетаноламіновии солі отримання 0,52г дінатрієвої солі ВРС157(ТЕАМ-ВРС157) Чистота отриманої солі 99,4%(ВЕРХ) Сполучення отримували способом, описаним Mac-cneKTp(FAB) 1419, більш високі іони при в прикладі 1 За основу використали триетанола1141(M+Na+), 14 64(M+Na2+) мш(ТЕАМ) Дані амінокислотного аналізу отриманої солі Чистота отриманої солі 99,2%(ВЕРХ) пептиду відповідають 3Gly, 4Pro, 2Ala, 2Asp, Glu, Mac-cneKTp(FAB) 1419(MH+) Leu, Val, Lys Дані амінокислотного аналізу отриманої солі ІК-спектр(КВг) фігура 2 пептиду відповідають складу 3Gly, 4Pro, 2АІа, 2Asp, Glu, Leu, Val, Lys УФ-спектр(Н2О) Ян к = 190нм, інших максиму- ас мів немає ІК-спектр(КВг) фігура 7 Т пл 275-277°С УФ-спектр(Н2О) Я,накс=190нм Приклад 3 отримання дицезієвої солі Т пл 202-205°С BPC157(Cs2BPC157) 0,5г(0,35ммоль) ВРС157 розПриклад 8 отримання таблеток, що містять чиняли в 8мл води, що містить 114мг карбонату Тріс-ВРС157 цезію(0,70ммоль), стерилізували, пропускаючи Склад мг^аблетку через 0,2ц фільтр, і люфілізували для отримання ТРИС-ВРС157 0,5 13 14 61955 Трегалоза Лактоза Крохмаль Тальк Трагакант Магній стеарат 20,0 17,0 6,5 3,0 2,5 0,5 50,0мг Трис-ВРС157(0,5мг) і трегалозу(20мг) розчиняли в 1мл води і сушили при випаровуванні Після висушування сирий залишок змішували з іншими інгредієнтами для приготування таблеток Приклад 9 отримання капсул, що містять NaBPC157 Склад мг/капсулу NaBPC157 0,5 Трегалоза 60,0 Лактоза 39,0 Магній стеарат 0,5 100,0мг ЫаВРС157(0,5мг) і трегалозу розчиняли в 1мл води і сушили при випаровуванні розчинника Сирий залишок змішували з іншими інгредієнтами для отримання капсул Приклад 10 отримання розчину, що містить NaBPC157 Склад г/25мл NaBPC157 0,05 Гліцерин 15,00 Бензиловий спирт 0,01 буфер рН 7,0, доданий до 25мл Приклад 11 отримання крему, що містить Трис-ВРС157 Склад г/25г Трис-ВРС157 0,05 Емульгатор 2,80 Арахісове пдрогенізоваванє масло 7,08 Твш®60 12.08 Пропіленгліколь 3,00 0,07 метил гід роксибезоат 25,00г Приклад 12 тести по стабільності Стабільність солей ВСР-пептиду тестували при інкубації солей протягом 76 і 120 днів при 40°С Концентрація солей ВСР-пептиду у водному розчині дорівнювала 0,2%(маса/об'єм) Стабільність визначали, використовуючи ВЕРХ колонка з Kromasil 100,5|j 150x4,6мм, рухома фаза 0,1% трифторооцтова кислота у воді/ацетонітрілі(від 0 до 50 об'ємних %), градієнтне елюювання протягом 25хв, швидкість потоку 1мл/хв, детектування УФ при 214нм Для порівняння використали вільний ВСРпептид і його моноацетат Таблиця 1 Стабільність солей ВСР-пептиду при 40°С на 0, 76 і 120 дні, аналіз в %, площі(ВЕРХ) Сполучення вільний пептид ВРС157 пептид ВРС157 моноацетат натрієва сіль ВРС157 динатрієва сіль ВРС157 Трис-сільВРС157 диТрис-сіль ВРС157 2-АМП-сільВРС157 ТЕАМ-сільВРС157 Значення рН 0,2% у воді 4,46 4,53 6,51 7,64 6,31 8,24 8,20 7,61 Дані, що наведені в цій таблиці, чітко показують підвищену стабільність солей ВСР-пептиду за даним винаходом в протилежність вільному ВСРпептиду або його моноацетату Крім того, можливо, внаслідок високого значення рН розчину солей ВСР-пептиду, ін'єкційне введення цих розчинів не викликає якого-небудь болю або некрозу У іншому окремому ДОСЛІДІ додаткове поліпшення стабільності солей ВСР-пептиду за даним винаходом в сирій формі і в розчині спостерігали після додавання трегалози Отже, додавання трегалози в якості фармацевтично прийнятної добавки для приготування фармацевтичної композиції, зокрема, в формі таблеток або капсул, є іншим важливим аспектом даного винаходу Наступні приклади описують досліди, що показують фармацевтичну активність солей ВСРпептиду за даним винаходом Ці досліди провели, використовуючи різні звичайні моделі в умовах «in vitro» і «in vivo» Для ДОСЛІДІВ використали мононатрієву сіль ВСР-пептиду 157(скор NaBPC157), якщо не зазначено особливо У всіх дослідах ви 0 день 76 днів 120 днів 99,3 99,2 99,4 99,4 99,5 99,5 99,6 99,2 98,1 97,8 99,5 99,7 99,5 99,5 99,4 99,3 97,4 95,3 99,4 99,4 99,4 99,5 99,5 99,1 користали щурів-самців Вістар з масою тіла 250 280г, якщо не зазначено особливо Приклад 13 NO-система Введення Оксид натрію(І\ІО) діє як сигнальна молекула в ендотеліальних і нервових клітках і в якості молекул-вбивць, що активуються клітками імунної системи Нещодавно проведені дослідження показали, що її можна використати як лікарський препарат при інгаляції Виявилося, що в основному, або при надлишку, або при ослабленні, NO викликає або вносить свій внесок в розвиток різних порушень, зокрема, гіпертензії, стенокардії, імпотенції, циркуляторного шоку, септичного шоку, інсульту, запалення, респіраторного дистрессиндрому, легеневої гіпертензії, адгезії і агрегації тромбоцитів і лейкоцитів, цукрового діабету, гіпотензії і хвороби Паркінсона Матеріали і методи Деякі з ефектів №ВРС157(10мкг або 10нг/кг) такі, як цілющу активність при ураженнях шлунка і активність NaBPC157 відносно підтримки кров'яно 15 16 61955 під дією L-NAME) Засновуючись на близькій схожості NO-тестів для інших тканин(наприклад, легень, печінки, кровоносних судин і т д ) і відмінностей використаних моделей (ураження шлунка і підтримка кров'яного тиску), є очевидною відзначена позитивна дія NaBPC157 у відношенні як надмірного утворення N0, так і ослаблених функцій NO-системи Зокрема, солі ВСР-пептидів за даним винаходом корисні для лікування гіпертензії, стенокардії, імпотенції, циркуляторного шоку, септичного шоку, інсульту, запалення, респіраторного дистрес-синдрому, легеневої гіпертензії, панкреатиту, адгезії і агрегації тромбоцитів і лейкоцитів, дисфункція ендотелію і хвороб Паркінсона Результати Приклад 14 соматосенсорні нейрони На моделі з етанолом, введений один Вступ NaBPC157 володіє противиразковою дією, як і LСоматосенсорні нейтрони в основному беруть арпнін NaBPC157 запобігав в противному разі участь в регуляції гомеостазу, особливо в реакції сильним патологічним змінам шлунка, що спостена зміни гомеостазу Ці нейрони можуть сигналізурігаються у оброблених етанолом щурів L-NAME вати про потенційну небезпеку Нейрони, самі по го тиску, відтворювали на пацюках Патологічні зміни шлунка викликали обробкою етанолом протягом 1 години(96% в/ш(внутрішньошлунково)) Одночасно вводили NaBPCI 57(в/ч(внутрішньочеревно)) У ДОСЛІДІ ПО підтримці кров'яного тиску NaBPC157 вводили внутрішньовенно(в/в) Також оцінювали спільне введення метилового ефіру NG-HiTpo-L-apriHiHy(L-NAME)(5Mr/Kr в/в), конкурентного інгібітору утворення окислу азоту(ЫО) в ендотелії і попередника NO Lарпншу(200мг/кг в/в)(О-арпнш був не ефективний) У дослідах з ураженням шлунка NO-агенти вводили за 5 хвилин до впливу етанолу і лікування NaBPC157 не надавав ефекту L-NAME повністю знімав активність L-арпншу, але тільки ослаблював активність NaBPCI 57 Після застосування комбінації L-NAME + L-арпншу, активність NaBPC157 додатково ослаблювалася У дослідах по кров'яному тиску NaBPCI 57(без дм на основні нормальні значення) в порівнянні з L-арпніном надавав як подібну дію(зменшував підйом кров'яного тиску під дією L-NAME при профілактичному застосуванні і знижував вже високі значення під дією L-NAME при введенні на фоні максимального підйому тиску під дією LN A M E ( T O 6 T O через 10 хвилин після L-NAME)), так і профілактичну дію(помірне зниження кров'яного тиску під дією L-арпншу запобігалося NaBPC157 перед введенням першого) Коли NaBPC157 вводили через 10 хвилин після застосування комбінації L-NAME + І_-арпншу(що також приводить до підвищення кров'яного тиску) його чіткий ефект(відмічений на оброблених L-NAME пацюках) зник В умовах in vitro, в гомогенатах слизової шлунка щурів, NaBPC157, використаний в тій же дозі(ЮОмкМ), що і L-арпнін, індукував порівнянне утворення N 0 Але дія NaBPC157 не інгібувалася L-NAME навіть в десятиразовій(100 проти 10ООмкМ) дозі, яка необхідна для шпбірування ефекту L-арпншу З іншого боку, синтез N 0 знижувався при спільному введенні NaBPC157 та Lарпніну У результаті, NaBFC157 може особливим способом надавати дію на ефекти N 0 як відносно ЦІЛІСНОСТІ слизової шлунка, так і підтримки кров'яного тиску особливо в поєднанні з L-арпншом, маючи більш виражену та/або довершену відрізняючуюся дію на ефекти N 0 Володіючи більш вираженою дією на N 0 , ніж це робить L-арпнін, NaBPC157 може попереджувати надмірне утворення N 0 , пов'язане з побічними ефектами(порушена дія І_-арпніну(наприклад, гіпотензії)) Ці побічні ефекти в умовах in vivo мають зворотний розвиток до нормальних значень, і в умовах in vitro запобігається надмірне утворення N 0 Крім того, усуваються негативні наслідки шпбірування г\ІО-системи(наприклад, попередження індукованого L-NAME підвищення кров'яного тиску і зворотний розвиток гіпертензії, що вже виникла собі, здатні відразу ж ініціювати ВІДПОВІДНІ ДІЇ ДЛЯ пом'якшення небезпеки Таким чином, вазоактивні аферентні нейрони представляють систему захисту першої лінії від травми В основному цю захисну здатність спостерігали при експериментальному пошкодженні шкіри і слизистої шлунковокишкового тракту У розвитку найрізноманітніших захворювань беруть участь як дисфункції, так і гіперфункції, зокрема, природжена сенсорна невропатія, сенсорна невропатія, виникаюча при діабеті, оперізувальному лишаї, невралгії після оперізувального лишая, атопічного дерматиту, слабкому загоєнні травмованої тканини(наприклад, СТІЙКІ шкірні поранення, погіршення уражень шкіри, що виникли під дією кислоти і утворення кератитоподібних патологічних станів рогівки), набутої кропивниці на холод і тепло, псоріазі, бульозному пемфогоіді, екземі, фотодерматозах, порушеннях верхніх і нижніх ВІДДІЛІВ диха льних шляхів, специфічній і неспецифічній пперактивності, вазомоторному риніті, астмі, хронічному артриті та ураженнях шлунково-кишкового тракту Матеріали і методи Вивчали гастропротективну дію NaBPC157 на дільницях ураження шлунка(відтворені на пацюках обробкою 96% етанолом, стресом і обробкою шдометацином) Оцінювали можливу участь сенсорних нейронів в лікувальних ефектах NaBPCI 57(1 Омкг/кг, 10нг/кг, в/ч) з капсаїцином, який має абсолютно протилежну дію на сенсорні нейрони введення дорослим тваринам у високих дозах(125мг/кг, п/ш(підшкірно) у ВІЦІ 3 МІСЯЦІВ) І призначення(50мг/кг, п/ш) новонародженим(у ВІЦІ 7 днів) руйнує волокна сенсорних нервів, в той час, як низькі дози(500мкг/кг в/ч) активують вивільнення нейропередавача і володіють захисною дією для слизової Результати I) У відсутності капсаїцину NaBPCI 57 захищав слизову шлунка від етанолу, стресу і введення індометацину II) У присутності нейротоксичних доз капсаїцину негативний вплив капсаїцину на стрес ділянки ураження під дією етанолу або індометацину, що 18 17 61955 не подавляється, послідовно негативно вплинув Кожному щуру в поперековій області підшкірно на цілющу аісгивність NaBPCI 57 Захисна дія імплантували два стерильних тампони(1см х 1см х NaBPC157 була як і раніше очевидною на моде0,25CM(V = 0,25мл)) з однаковими кількостями лях, оброблених капсаіцином(як на оброблених NaBPCI 57(розчин 50мкг, Юмкг, 10нг/мл) або стадорослих пацюках, так і новонароджених) у всіх ндартних агентів, циметидину(10мг, ЮОмг, цих тестах Після обробки капсаїцином новонаро500мг/мл), ранітидину(2,5мг, 25мг, 250мг/мл), фаджених тварин було відмічене повне усунення замотидину(10мг, 50мг, 100мг/мл) і сукралфату(1мг, хисту шлунка під дією NaBPCI 57, якщо NaBPCI 57 5мг, 10мг/мл) Тампони видаляли через три і сім вводили одноразово в нг-дозах Захисна дія повніднів Потім їх фіксували в формаліні і обробляли стю відновлювалася, коли препарат вводили в тій для гістологічної і ГІСТОХІМІЧНОЇ оцінки і морфометже дозі щодня рії Використаний мікроскоп був Leitz, DIAPLAN, для морфометричного аналізу застосовували проIII) У поєднанні із збуджуючою дозою капсаїциграму «SORM» VAMS, Загреб, Croatia ну, корисна активність NaBPCI 57 додатково підвищувалася Результати При спільному розгляді ці дані показують Знов утворену грануляційну тканину навколо складну синергетичну взаємодію між корисною імплантованого тампона постійно використовували активністю NaBPCI 57 і активністю пептицергетичяк цінне кількісне визначення реакції хазяїна на них сенсорних аферентних нейронів Беручи до чужорідне тіло Досліди на щурах забитих через уваги близьку схожість дії капсаїцину у тварин і три дні після імплантації, показали наступне в людей і вищеописаний досвід, NaBPCI 57 можна групах тварин оброблених NaBPCI 57, було вияввикористати для лікування вищезазначених порулено значно більше грануляційної тканини в порівшень нянні з контрольними значеннями Аналогічні результати були виявлені у щурів, оброблених Приклад 15 захист ендотелію сукралфатом при всьому використаному дозуванВступ ні У протилежність цьому, не спостерігали ВІДМІНВідомо, ЩО пошкодження судинного ендотелію НОСТІ МІЖ контрольними значеннями і агентом, що передують розвитку і є істотними сприятливими аналізується в групах, оброблених всіма трьома чинниками для великих пошкоджень органів ЗаЬЬ-блокаторами Тварини, убиті через сім днів пісхист ендотелію може зменшити ушкоджуючий ля імплантації, при обробці сукралфатом у всіх вплив ішемії на ЦІЛІСНІСТЬ слизової В якості придатрьох дозах і при обробці NaBPC157 в найвищій тної моделі широко прийняте використання монодозі(50мкг) достовірно відрізнялися в порівнянні з стралу синього на щурах незадовго перед застоконтрольною групою Контрольні значення значно суванням некротизуючих агентів(наприклад, не відрізнялися по показниках між двома термінаетанол, що використовується ми забою внутрішньошлунково), відомих як такі, що приводять до великих пошкоджень У грануляційній тканині, що знову утворилася, Матеріали і методи підраховували КІЛЬКІСТЬ ендотеліальних просторів У порівнянні з контрольними значеннями(число Всім щурам вводили в/в монострал знову утворених ендотеліальних просторів в контCHHm(MB)(Sigma Company, США)(1,0мл/кг маси рольній групі через три дні після імплантації статіла) за 3 хвилини до введення етанолу Щурів новило 7,94+1,23 і через сім днів після імплантації умертвляли через 1 хвилину після застосування - 14,8±3,12), всі використані речовини приводили етанолу За 1 годину перед обробкою етанолу до достовірного підвищення показників на обидва вводили NaBPCI 57(10,Омкг/кг, в/ч) або фізіологічштервали(третій і сьомий день) ний розчин(5,0мл/кг, в/ч) Відразу ж після забою витягували шлунок, і незацікавлені спостерігачі У доповненні до доказу того, що різні противиоцінювали ділянки ураження Характерні ділянки разкові препарати володіють анпогенними властишлунка і дванадцятипалої кишки обробляли для востями, NaBPC157 також стимулював утворення подальшого ГІСТОЛОГІЧНОГО аналізу грануляційної тканини, як це робить сукралфат Отже, NaBPCI 57 можна використати для ініціації і Пошкодження судин оцінювали в ранньому підтримки процесів загоєння, зокрема, загоєння перюді(1 хвилина після обробки етанолом), викоран та/або виразок ристовуючи метод з монастралем синім(МВ) Ареальну ЩІЛЬНІСТЬ забарвленої слизової досліджуваПриклад 17 запалення ли ТЕМ Вступ Результати Протизапальні препарати, що використовуються в цей час, звичайно оцінюють на багатьох Сильне зниження забарвлення MB було посліпридатних моделях, що близько представляють довно відзначене в групах, оброблених NaBPCI 57 гострі та/або хронічні запальні порушення у люБлизька схожість використаних моделей із захводей Однак виявилося, що тяжкі ураження шлункорюваннями людини демонструє застосування во-кишкового тракту є основним побічним ефектом NaBPCI 57 для лікування захворювань, пов'язаних цих агентів з порушеннями ендотелію в медицині Приклад 16 анпогенез Для NaBPCI 57 була відмічена активність проти гострого запалення і болезаспокійлива активВступ ність(наприклад, при впливі турпентином, карапАнпогенез має вирішальне значення для утвоном, оцтовою кислотою або МдБО^залежне ВІД рення грануляційної тканини і загоєння ран та/або простагландинів, незалежне від простагландинів, виразок Використовуючи добре відомий метод, досліди зі стисканням хвоста) нарівні з жарозниоцінювали анпогенні властивості жуючим ефектом(зниження викликаної дріжджами Матеріали і методи 20 19 61955 лихоманки(4000мг/кг, п/ш)) Отже, одночасно на жості використаної моделі і ВІДПОВІДНИХ розладів у пацюках оцінювали його лікувальну дію на уралюдини, є очевидним, що NaBPCI 57 з його захисження шлунково-кишкового тракту, його дію на ними для слизової властивостями можна викорисхронічне запалення таке, як ад'ювантний артрит, тати для лікування захворювань, пов'язаних з госйого дію як нестероідного протизапального агента трим запаленням і хронічним артритом Крім того, при ураженнях шлунково-кишкового тракту, що NaBPCI 57 можна використати для лікування завиникли під дією НСПВС хворювань, пов'язаних з порушеннями пперчутливості уповільненого типу і уражень шлунковоМатеріали і методи кишечного тракту, що виникли в різних частинах У дослідах з ураженнями шлунково-кишкового шлунково-кишкового тракту, особливо індукованих тракту(шдометацин(30мг/кг, п/ш), аспірин(400мг/кг, агентами такими, як NSAIAs в/ш) і диклофенак(125мг/кг, в/ч)) NaBPC157(10MKr або Юнг/кг, в/ч) вводили ВІДПОВІДНО або одночасно Приклад 18 ефект видалення вільних радиката/або за одну годину до введення препаралів ту(шдометацин) У разі ад'ювантного артриту(на Матеріали і методи хвіст наносили по 0,2мл ад'юванту Фрейнда)(14 Гепатопротективну дію NaBPCI 57 в порівнянні днів, ЗО днів, один рік), NaBPCI 57(1 Омкг або зі стандартами такими, як бромкриптин, амантаЮнг/кг, в/ч) застосовували у вигляді однократного дин і сомастатин оцінювали на різних експерименвведення(за 1 годину до або після нанесення тальних моделях ушкодження печінки на щурах ад'юванту Фрейнда або один раз на день протягом 24 годинне накладення лігатури на жовчний протік періоду 0 - І 4-й день, 14 -30-й день і 14-й день і печінкову артерію, 48-годинний стрес, що подаводин рік) ляється, і введення ССЦ(агент, що індукує утворення вільних радикалів) NaBPC157 вводили або Результати внутрішньошлунково, або внутрішньочеревно При спільному введенні з НСПВС, що тестується, NaBPC157 послідовно зменшував в противРезультати ному разі виражені ДІЛЬНИЦІ ураження в шлунку NaBPCI 57 в значній мірі попереджував розвиконтрольних щурів, а також ДІЛЬНИЦІ ураження в ток некрозу печінки або жирових змін у щурів, підтонкому кишечнику в групах тварин, оброблених даних 24-годинному накладенню лігатури на жовчіндометацином У дослідах з ад'ювантним артриний протік або печінкову артерію, 48-годинному том, розвиток уражень був значно знижений після придушенню стресу і обробці ССЦ(1мл/кг в/ч, забій однократного введення NaBPCI 57 і ще більш через 48 годин) Інші стандартні препарати мали ослаблявся у щурів при щоденному застосуванні або невелику, або захисна дія на цих моделях зоNaBPCI 57 При лікуванні ад'ювантного артриту, всім була відсутня Лабораторні аналізи на білірущо вже виник, цілющий ефект NaBPCI 57 послідобін показали, що SGOTTa SGPT повністю корелювно з'явився тільки через два тижні введення, і він вали з макро/мікроскопічними даними Таким чітко був очевидний через один рік застосування чином, NaBPCI 57 можна використати для лікуЦі дані показують протизапальну і захисну дію вання захворювань печінки Крім того, мієлосупреNaBPCI 57 відносно ЦІЛІСНОСТІ слизової сія, що викликається опроміненням, є моделлю, що відтворюється, для вивчення динаміки відновВідомо, ЩО В розвитку ад'ювантного артриту лення гематопоетичних елементів NaBPCI 57 поберуть участь два різних механізми, запалення і казує позитивну дію на пошкодження кісткового гиперчутливість уповільненого типу NaBPCI 57 мозку, що індукуються опроміненням в сублетальпозитивно впливає на обидва У порівнянні зі станих дозах ндартами(тобто аспірин, індометацин) NaBPCI 57 був ефективний в значно більш низьких дозах(мкг Таким чином, NaBPCI 57 можна використати абонг/кг протимг/кг) Ця первинна ефективність в для лікування пошкоджень кісткового мозку, індупопередженні ад'ювантного артриту ще більш покованих опроміненням Беручи до уваги загалом силюється при щоденному введенні Більш високе взаємозв'язок, що визнається, ССЦ з утворенням дозування(10мкг/день) було ефективним як при вільних радикалів і розвитком патологічних станів, однократному, так і щоденному введенні, в той час виявилося, що позитивні ефекти NaBPCI 57 можна як більш низьке дозування(10нг/кг), раніше неефетакож використати відносно інших уражень оргактивне при одноразовому введенні, стає ефективнів, індукованих вільними радикалами, зокрема, ним при щоденній схемі застосування Виявлення при опроміненні цього факту нарівні з терапевтичною ефективнісПриклад 19 катехоламшерпчна система тю NaBPCI 57 на фоні артриту, що повністю виник, Вступ свідчить про його корисне застосування протягом ДІЮЧІ опосередковано, симптоматичні лікарські всього періоду протікання ад'ювантного артриту препарати такі, як амфетаміни, мають загальні Відмічену ефективність NaBPCI 57 при ад'ювантвластивості такі, як здатність спричиняти підвищеному артриті(профілактичний ефект, невиникне вивільнення катехоламшів і інгібування повторлий/виниклий ад'ювантний артрит) не відзначали ного захоплення катехоламшів(в основному додля терапевтичних засобів, що використовуються фаміну) в нервових закінченнях в центральній в цей час Глюкокортикоіди є ефективними в понервовій системі(ЦНС) Виявилося, що стереотиппередженні ад'ювантного артриту при щоденному на поведінка є результатом активації дофамшервведенні, але не при короткочасному курсі лікугетичної системи в смугастому ТІЛІ В основному вання Імуносупресори(у високих дозах) і нестеропередбачається, що посилене «лазання» під дією ІДНІ анальгетики є ефективними ВІДПОВІДНО ДО І амфетамшу є результатом збудження полоскових ПІСЛЯ обробки дофамінових рецепторів після введення антагоніста дофамшу галоперідолу Це потім викликає розТаким чином, засновуючись на близькій схо 22 21 61955 виток суперчутливості до амфетамшу ЗастосуСтрес визначається, як неспецифічне явище, вання NaBPC157 не впливає на загальну поведінщо приводить до порушень в різних органах ку і не індукує появу стереотипів Стресова реакція у ВІДПОВІДЬ визначається, як реакція у ВІДПОВІДЬ, спрямована проти різних шкідлиМатеріали і методи вих явищ Однією З моделей стресу, що найчастіВивчали вплив NaBPC157 на стереотипи, що ше застосовується на тваринах, є модель викликаються антагоністом дофамшу амфетаміподавляемого стресу, що приводить до тяжких ном(10мг/кг, в/ч) і на збудливість NaBPC157 ввостресових уражень шлунка у щурів Можуть врадили у вигляді профілактичної спільної обробки жатися також ІНШІ органи або за терапевтичною цілющою схемою(1 Омкг або Юнг/кг, в/ч) У щурів була індукована стереотипна Матеріали, методи і результати поведінка і збудливість Введений в дозі Юмкг або 10нг/кг маси тіла, Результати в/ч або в/ш за годину до індукції стресу, NaBPC157 в сильній мірі запобігав в противному разі неминуПостійно відмічали помітне ослаблення і звочому розвитку тяжких уражень шлунка Якщо час ротний розвиток(лікування в максимумі порушень, між застосуванням знижуючих стрес агентів і індуіндукованих амфетаміном) як стереотипної повекцією стресу(в подальшому тексті означається як дінки, так і підвищеної збудливості (тобто більш «період») подовжується, стандартні противиразкосильні і люті судоми, панічне стрибання і метушві агенти стають практично неефективними, в синя) льній мірі контрастуючи з виразною ефективністю Потім увага була зосереджена на вплив тестованого NaBPC157 NaBPC157 зберігав свою NaBPC157 на «лазания» у мишей Мишей заздацілющу активність навіть після дуже тривалого легідь обробили антагоністом дофаміну галопериперіоду в 48 годин Захисна дія, що виявляється долом(5,0мг/кг, в/ч) і потім обробили амфетаміNaBPC157, включає ослаблення розвитку уражень ном(20мг/кг в/ч на 1, 2, 4 і 10 день після в противному разі постійно з'являючихся в інших попередньої обробки галоперідолом), який звиорганах(наприклад, печінці, надниркових залозах, чайно використовується для вивчення поведшконирках, сім'яниках, серці, підшлунковій залозі, севоі суперчутливості у ВІДПОВІДЬ на стимулюючу дію лезінці) Таким чином, оскільки ІНШІ звичайно ВІамфетамшу Таким чином, якщо з'явився би антаДОМІ стресові параметри, очевидно, в меншій мірі гонізм стереотипів під дією амфетаміну, як резульзазнають порушення(тобто тимуслімфатична ІНВОтат антагоністичної у відношенні дофаміну активЛЮЦІЯ І гіпертрофія коркового шара надниркових ності(прямий або опосередкованої) NaBPC157, що залоз), є очевидним, що NaBPC157 можна викоритестується, то можна було чекати посилення збістати при різних стресових захворюваннях льшуючої дії галоперідолу на «лазання» під вплиNaBPC157 має позитивний цілющий вплив на різні вом амфетаміну У протилежність цьому, при суміДІЛЬНИЦІ ураження в інших органах, постійно пов'ясному введенні NaBPC157 з галоперідолом була заних з неспецифічною стресовою патологією відмічена майже повна нейтралізація дм При спіБеручи до уваги такий же ланцюг подій у людей, як льному розгляді, ці дані надають доказ наявності і на використаних моделях, цьому надається ще взаємодії NaBPC157 з дофаміновою системою більше значення, оскільки NaBPC157 має цілющу Крім того, взаємодія NaBPC157 з центральною дію навіть, якщо використовується, коли стресова дофаміновою системою(наприклад, захист від патологія вже розвивалася(наприклад, через 24 стресових виразок) була показана на інших експегодини після індукції стресу) риментальних моделях Для багатьох відомих пептидів(нейротензин, ССК і т д) вже була відмічеПриклад 21 демонстрація цитопротективної на взаємодія з дофаміновою системою Крім того Д" використання NaBPC157 також дає зворотний Вступ розвиток поведшковим порушенням, індукованим Цитопротективна дія спочатку визначалася, як LSD(Hanpnmafl, 0,Змг/кг, в/ч) NaBPC157 має мовластивість захищати клітки від різних шкідливих дулюючий ефект на дофамшову систему В умоагентів, дія, показана в слизовій оболонці шлунка, вах підвищеного вивільнення синтезу і дофаміну, як незалежний від шлункової кислоти ефект Пізіндукованих амфетаміном, NaBPC157 може як ніше, це визначення було розширене з включензапобігати, так і направляти в зворотну сторону ням в значній мірі схожих захисних ефектів поза розвиток подальших порушень(тобто стереотипна шлунково-кишковим трактом, включаючи патологіповедінка) Подібним образом, NaBPC157 може чні стани різних органів(цитопротективна дія / орпомітно ослабляти наслідки блокування дофаміганопротективна дія) Вивчали можливі цитопротенових рецепторів галоперідолом На основі цього ктивні ефекти при використанні NaBPC157, можна припустити, що модулююча дія NaBPC157 засновуючись на його дії на першопочатковій мозалучає також заміщення у іншому разі помітної делі Робертса для скрінінгу цитопротективних агенеповної дофамшової системи Це дозволяє уникнтів при ураженнях шлунка, індукованих етанолом нути подальшої суперчутливості дофамінових рецепторів і порушень, виникаючих під дією амфеМатеріал, методи і результати таміну порушень NaBPCI 57(1 Омкг або 10нг/кг, в/ч) мав профілактичний ефект(застосованоі або за 1 годину до, або одночасно з 96% етанолом(1мл/щур, в/ш)) і Таким чином, NaBPC157 є корисним агентом цілющу дію(застосований через 1 годину після для лікування шизофренії, індукованих амфетаміетанолу в максимумі розвитку ураження) ном ефектів(шизофренічна форма психозу) і зловживання наркотиками З метою створення вільного від кислоти навколишнього середовища для вивчення цитопроПриклад 20 стрес тективної дії за 24 години до процедури, що сприВступ 24 23 61955 чиняє виразку, була проведена гастроектомія У вляли через 1 хвилину після обробки етанолом За відсутності шлунка і шлункової кислоти потім оці1 годину до етанолу вводили нювали ушкоджуючу дію цистеамшу(400мг/кг п/ш, NaBPCI 57(10,Омкг/кг, в/ч) або фізіологічний роззабій через 24 години після введення), який, як чин(5,0мл/кг, в/ч) Відразу ж після забою витягувавважають, є препаратом, що викликає виразки ли шлунок, і незацікавлені спостерігачі оцінювали дванадцятипалої кишки, дія якого пов'язана з кисДІЛЬНИЦІ ураження шлунка, як описано раніше лотою, і цитопротективну дію NaBPC157(10MKr або Характерні ділянки шлунка і дванадцятипалої кишЮнг/кг, в/ч) в порівнянні зі стандартними речовики обробляли для подальшого ГІСТОЛОГІЧНОГО ананами(циметидин(50), ранітидин(Ю), омепралізу Ушкодження судин оцінювали в ранньому зол(10), бромкриптин(Ю) і атропш(10)(значення перюді(через 1 хвилину після обробки етанолом), дані в мг/кг, в/ч, за 1 годину перед введенням цисвикористовуючи метод з моностралем синім Аретеамін)), відомими, як також ВОЛОДІЮЧІ цитопротекальну ЩІЛЬНІСТЬ забарвленої слизової оцінювали тивним ефектом У простих щурів з інтактним ТЕМ шлунком всі застосовані речовини виявляли сильРезультати ну позитивну дію У тварин з видаленим шлунком У групах щурів, оброблених NaBPCI 57, послізастосування препаратів, що вивчаються(тобто довно відмічали сильне зниження МВNaBPC157 або стандартних агентів перед введензабарвлення Крім того, при використанні ням цистеамшу), в значній мірі попереджувало NaBPCI 57 не було відмічено негативних ефектів розвиток у іншому разі тяжких уражень дванадцяНе спостерігали впливу на різні основні параметри типалої кишки, відмічених у контрольних щурів з і токсичності, за винятком високих доз(наприклад, видаленим шлунком і обробленими цистеаміном г/кг маси тіла, в/ч) У групах тварин, не оброблених цистеаміном, не Беручи до уваги широке поширення ендотелібуло відмічено уражень(лапаротомія і гастроектоальної судинної тканини в організмі і вирішальну мія тільки через 24 години або 48 годин після опероль захисту ендотелію для органопротективної рації), не спостерігали посилення патологічного дії, NaBPCI 57 можна використовувати як органостану у оброблених цистеаміном, підданих лапапротективний агент при ураженнях різних органів ротомії мишей Виявлення цих фактів(однаковий Приклад 23 гострий панкреатит ушкоджуючий ефект цистеамшу, однакова захисна Матеріали і методи дія NaBPC157 і стандартів у щурів з видаленим NaBPCI 57 тестували на щурах в якості захисінтактним шлунком і без шлунка, ушкоджуючий або ного або лікувального агента при гострому панзахисний ефект не пов'язаний з секрецією шлункреатиті(шдукованому накладенням лігатури на кової кислоти) вказує на протективну дію Можна жовчний протік) Одночасно вивчали вплив чітко припустити про наявність аналогм(ураження NaBPCI 57 на супутні розвинені ураження шлунка і не пов'язані зі шлунковою кислотою) між травмодванадцятипалої кишки ваним шлунком(наприклад, етанолом) і дванадцяNaBPCI 57(10мкг або 10нг/кг маси тіла, в/ч, типалою кишкою під дією цистеамшу Очевидна в/ш) вводили в профілактичних цілях за 1 годину висока «цитопротективна здатність», ймовірно, до накладення лігатури, в той час для лікування незалежна від кислоти, спільна для всіх сполупрепарат застосовували щодня, починаючи через чень, що тестуються, але більш виражена для 1 день після накладення лігатури(останнє введенNaBPC157 ня за 24 години до забою) Дію оцінювали через добові інтервали аж до кінця п'ятої доби після наВнаслідок того, що NaBPC157 був ефективний кладення лігатури в значно менших дозах, ніж ІНШІ сполучення(тобто мкг абонг/кг протимг/кг), його ефективність(і тераРезультати певтичне застосування) можна розповсюдити на При введенні перед обробкою була отримана ураження інших органів Це є слідством того факсильна захисна дія відносно підшлункової залози ту, що ефективність інших сполучень в інших орОчевидний цілющий ефект послідовно відмічався ганах також є результатом їх «цитопротективної при введенні препарату на фоні тяжкого гострого дм»(наприклад, сомастатин патологічні стани панкреатиту, що вже виник Оцінюючи появу некнадниркових залоз, підшлункової залози, печінки, розу, набряку, нейтрофілів і одноядерних кліток, у легень і шлунково-кишкового тракту) щурів, оброблених NaBPCI 57, послідовно відмічали менший розвиток некрозу, набряку і менше Приклад 22 демонстрація органопротективної число нейрофілів, але була більша КІЛЬКІСТЬ одноД" ядерних кліток При визначенні рівня сироваткової Вступ амілази в порівнянні з контрольними значеннями З метою корисного розширення «цитопротекбуло відмічене значно менше підвищентивної» дм в «органопротективну» дію в основному ня(№ВРС1 57 ввели перед обробкою), а також прийняте дослідження захисної дії на ендотелій зниження вже підвищених piBHiB(NaBPC157 ввоШироко признається, в якості чіткої вказівки, викодили в лікувальних цілях) Нарівні з цим позитивристати тести зі слизовою оболонкою шлунка щуним впливом на панкреатит, був відмічений позирів після ушкоджуючої дії етанолу, при забарвлентивний вплив NaBPCI 57 на ДІЛЬНИЦІ ураження ні монастралу синім внаслідок здатності шлунка і дванадцятипалої кишки у щурів з перев'ямоностралу синього зв'язуватися з пошкодженим заною жовчною протокою, як при введенні до обендотелієм робки, так і після обробки При спільному розгляді Матеріали і методи даних NaBPCI 57 можна використати для лікуванВсім щурам вводили монострал ня гострого панкреатиту з додатковим позитивним CHHm(MB)(Sigma Company, США)(1,0мл/кг маси впливом на супутню патологію шлунка і дванадцятіла, в/в) за 3 хвилини до етанолу, і тварин умерт 25 61955 26 типалої кишки єю на індуковану дигіталісом кардютоксичність Приклад 24 вплив на кардютоксичністю NaBPCI 57 виявляв позитивні ефекти на раптове Матеріали і методи зниження числа ударів серця в хвилину і поруДосліди проводили на щурах Албіно Вістар і шення ритму(вентрикулярну екстрасистолу, вентморських свинках Хартлі Кардютоксичність індурикулярну тахікардію і атрювентрикулярний блок) кували призначенням розчину хлориду бау вигляді їх попередження або ослаблення Дія рію(10мг/кг маси тіла), десипрамшу(10мг/кг), дипNaBPCI 57 в нг-дозах на сповільнення провідності, талісу(загальна доза 6,5мг/кг) та індукованої токсичною дозою дипсталіс, була неізопреналшу(15мг/кг) через канюлю в яремній вені значною Ефект був більш вираженим змкг-дозами Крім того, вводили доксорубіцин багато раNaBPCI 57 зів(3мг/кг, п/пі, один раз в тиждень протягом 13 NaBPCI 57 виразно запобігав ішемії та інфарктижнів) І однократно(7мг/кг, в/в) і провокували карту міокарда Дія була більш вираженою з мкгдюмюпатію Кардютоксичність також індукували дозами Однократне внутрішньочеревне введення іммобілізованим стресом, як ушкодження міокарда NaBPCI 57 перед обробкою призвело до поперенефармаколопчного характеру NaBPC157 вводидження ішемії, що було показано на електрокарділи, як зазначено нижче ограмах, і пошкоджень міокарда, дитектованих ГІСТОЛОГІЧНО в дослідах з іммобілізованим стресом 1 Хлорид барію Введення NaBPCI 57 після обробки вже при наявa) перед обробкою(за 1 годину до) NaBPC157 ності електрокардіографічних змін, що реєстру50мкг/кг, 10мкг/кг і Юнг/кг, внутрішньочеревно, ються, також привело до ослаблення ішемії Мкгb) після обробки(через 60 секунд) NaBPC157 дози NaBPCI 57 спричиняли збільшення напру10мкг/кг і Юнг/кг, внутрішньовенно ження комплексу QRS, особливо при попередньо2Десипрамш NaBPC157 50мкг/кг і 50нг/кг, му введенні внутрішньочеревно за одну годину до обробки 3 Дигіталіс NaBPCI 57 50мкг/кг і 50нг/кг, внутВведення NaBPCI 57 призводить до значно рішньовенно з 15-хвилинними інтервалами більш менших патоморфолопчних змін, що спостерігаються при кардіомюпатм, індукованій ан4 Ізопрепалін NaBPCI 57 50мкг/кг і 50нг/кг, трациклшом(тяжке пошкодження мюцитів і стінок внутрішньовенно за 15 хвилин до обробки судин, і вакуолізація) після однократного і в біль5 Іммобілізований стрес NaBPC157 10мкг/кг і шій мірі після багаторазового призначення доксо10нг/кг,фіг внутрішньочеревно за одну годину до і рубіцину Активність LDH значно знижується, невідразу ж після фіксацмфіп при 24- і 48-годинній зважаючи на помітно підвищені абсолютні іммобілізації значення 6 а) Хронічна токсичність під дією доксорубіцину NaBPCI 57 10мкг/кг і Юнг/кг, внутрішньочеПідсумовуючи, NaBPCI 57 показав себе приревно одночасно з доксорубіцином, датним для використання як антиаритмічного, антианпнального і кардюпротективного агента Ь) гостра токсичність під дією доксорубіцину NaBPCI 57 10мкг/кг і Юнг/кг, внутрішньочеревПриклад 25 антидеприсантна активність но за одну годину до введення доксорубіцину Матеріали і методи На моделях з аритмією, у анестезованих тваРІЗНІ антидеприсанти володіють противиразрин постійно записували електрокардіограму Коковою активністю, і моделі, що використовуються в жні 15 секунд або при порушенні ритму, проводили цей час при дослідженні виразок і депресії, значпростягнуті записи при 50мм/сек або 100мм/сек ною мірою схожі Отже, досліджували можливість На інших моделях електрокардіограми записували того, що спочатку противиразковий агент з цитоодин раз або повторно у тварин при нетривалій /органопротективною активністю, такою як анестезії зі швидкістю паперу 50мм/сек при проNaBPCI 57, буде ефективно впливати на депресистягнутих записах Токсичність під впливом доксовні розлади, в двох тестах по депресії на щурах рубіцину оцінювали при макроскопічному і мікротест з примусовим плаванням(процедура Порсолскопічному обстеженні серця та інших органів та) і метод хронічного непередбачуваного стребіохімічними аналізами Аналогічну процедуру су(через 5 днів після проведення процедури непепроводили в дослідах з іммобілізованим стресом редбачуваного стресу, введення препарату один раз на день під час стресової процедури і оцінка Результати нерухомості у відкритому тесті на четвертий і шосБула відмічена антиаритмічна дія NaBPCI 57 тий дні лікування) на моделі з індукованою хлоридом барію аритмією При попередньому введенні перед обробкою Результати NaBPCI 57 знижував і попереджував появу аритмії У ДОСЛІДІ з примусовим плаванням відмічали і зменшував та/або запобігав розвитку ішемії У зниження часу нерухомості щурів, оброблених дослідах з введенням після обробки, NaBPCI 57 NaBPCI 57(1 Омкг/кг, Юнг, Юпг/кг, в/ч), в порівнянні викликав швидке перетворення в синусовий ритм і з активністю у тварин, оброблених звичайними запобігав повторній появі аритмії антидеприсантами, іміпраміном або ніаламідом, ВІДПОВІДНО в дозах 15мг або 40мг(в/ч) Додаткове NaBPCI 57 повністю запобігав раптовому змепосилювання умов досліду в процедурах хронічноншенню числа ударів серця в хвилину і порушення го непередбачуваного стресу призвело до втрати провідності, індуковані десипрамшом(подовження активності іміпрамшу(ЗОмл) в той час, як введення PQ і розширення QRS) NaBPCI 57 також запобігав NaBPCI 57(1 Омкг/кг, 10нг) призводило до поліпрозвитку вентрикулярної тахікардії, пов'язаної з шення мобільності щурів з хронічним стресом в проаритмічною дією десипрамшу, і тяжкий атрюзалежності від дози вентрикулярний блок Дія залежала від дози Крім того, NaBPCI 57 володіє селективною діПриклад 26 моделі хвороби Паркінсона 28 27 61955 Матеріали і методи Тріс-ВРС157 вводили внутрішньом'язово(в/м) або на 7-й, 9-й, 14-й і 16-й дні після операцм(10мкг/кг Вводили паркінсонгенні агенти, 1-метил-4маси тіла), або один раз на день в період між 7-м фенил-1, 2, 3, 6-тетра21-м днями після операцм(10мкг або Юнг/кг маси пдропіридин(МРТР)(відомий, як препарат, руйнутіла) В якості стандартної обробки відразу ж після ючий дофамінову систему чорних смужок шляхом утворення КІСТКОВІ дефекти у тварин сьомої групи утворення вільних радикалів)(30мг/кг маси тіла, були заповнені аутолопчним кістковим транспланв/ч, один раз на день протягом б днів і через 4 дні тантом однократно в дозі 50,0мг/кг маси тіла, в/ч) або резерпш(спричиняє виділення катехоламшових пуВсіх тварин забивали на 6 тижні після операхирців)(5,0мг/кг маси тіла, в/ч) ції Загоєння сегментальних дефектів оцінювали ДВІЧІ на тиждень рентгенологічно і ГІСТОЛОГІЧНО МаВРС157(1,50мкг/кг або 15,0нг/кг маси тіла, в/ч) застосовували за 15 хвилин до або альтернативно Результати через 15 хвилин після кожного призначення МРТР Паралельне порівняння рентгенограм, зробУ дослідах з резерпіном NaBPCI 57(10,0мкг/кг або лених на чотири тимчасових інтерва1О,Онг/кг маси тіла, в/ч) вводили за 15 хвилин до ли(поверхнева кісткова мозоль, мікрофотоденсирезерпіну або через 24 години на фоні повної каметрія кісткового дефекту), і даних кількісної талепсії, що вже виникла пстоморфометрм виявило, що кістковий мозок, введений місцево в кістковий дефект, і ТрісРезультати ВРС157, введений внутрішньом'язово(особливо в NaBPC157 значною мірою поліпшував порудобовій дозі 10мкг/кг маси тіла протягом 14 днів), шену МРТР соматосенсорну орієнтацію і зменшудостовірно поліпшували загоєння кістки(р < 0,001) вав індуковану МРТР пперактивність Крім того, Дія відповідала дії аутологічного кісткового трансNaBPC157 зменшував МРТР-моторні аномаплантату лм(тремор, акінезія, каталепсія, в противному разі дуже виражені в регуляції солі), призводячи до Беручи до уваги клінічне значення цього домайже повного усунення звичайно летального курсліду, кістковий мозок і Тріс-ВРС157(особливо в су введення МРТР для контрольних тварин У дощоденній дозі 10мкг/кг маси тіла протягом 14 діб) слідах з резерпіном NaBPC157 значною мірою приводять до загоєння кісткових дефектів У зв'яззапобігав розвитку у іншому разі дуже вираженої ку з їх простим введенням і низьким ризиком каталепсії При введенні через 24 години після ускладнень, аутолопчний кістковий мозок, застообробки NaBPC157 давав зворотний хід каталепсований місцево, і особливо введені внутрішньосії, що вже виникла У підтримку цього, послідовно м'язово остеогенні речовини такі, як Тріс-ВРС157, спостерігали зменшення індукованої резерпіном мають переваги перед іншими більш складними rmoTepMii(NaBPC157 вводили до обробки) і зворохірургічними способами(тобто КІСТКОВІ імплантантний розвиток подальшого вираженого падіння ти, КІСТКОВІ імплантати з судинами, метод Ілізаротемператури(ЫаВРС157 вводили після обробки) ва) для лікування загоєння травм у людей Обидві вищезгадані моделі, що звичайно виПриклад 28 вплив на загоєння ран користовуються на тваринах, ВІДОМІ, ЯК показуючі Матеріали і методи порушення у людей та їх лікування Внаслідок того NaBPCI 57 використали для того, щоб встанофакту, що була продемонстрована висока ефеквити його вплив на різні елементи, пов'язані з противність при введенні до і після обробки вмкг- і нгцесом загоєння Вважають, що елементами, що дозах, виявилося, що NaBPC157 добре придатний мають значення для процесу загоєння, є утворендля використання в лікуванні хвороби Паркінсона і ня грануляційної тканини, анпогенез і продукція патолопй, подібних хворобі Паркінсона колагену Вплив NaBPCI 57 51 на утворення грануляційної тканини, продукцію колагену і анпогеКрім того, ефект, що спостерігається при гипонез, а також розвиток сили натягнення тестували, термм, індукованій резерпіном, дозволяє прийти до використовуючи три експериментальні моделі на висновку, що NaBPCI 57 добре придатний для щурах 1) шкірні рани у вигляді насічок, 2) анастолікування температурних порушень мози товста кишка - товста кишка і 3) анастомози Приклад 27 вплив на загоєння кісткових дестравохід - дванадцятипала кишка Зразки ГІСТОЛОфектів ГІЧНО оцінювали на колаген і кровоносні судини, Матеріал і методи використовуючи оціночну систему в балах і морНа 42 кроликах протягом б тижнів після опефометрію рації вивчали остеогенну дію кісткового мозку і Тріс-ВРС157 на загоєння сегментальних кісткових Результати дефектів Після індукції травми(в центрі обох проУ всіх дослідах були встановлені достовірні меневих кісток зробили 0,8-сантиметровий остеоВІДМІННОСТІ між щурами, обробленими NaBPCI 57, і перюститний дефект), досліди з використанням контрольними тваринами Досліди показали силькісткового мозку і Тріс-ВРС157(6 кроликів в групі) ний стимулюючий вплив NaBPC157 на процес завиконували таким чином оброблених фізіологічгоєння Ці ефекти досягалися при різних шляхах ним розчином(2мл внутрішньом'язово і 2мл місцевведення, включаючи внутрішньошлункове і місво в кожний з кісткових дефектів), травмованих цеве застосування Крім того, оцінка сили натягтварин використовували як контроль(група 1) У нення виявила підвищені значення для оброблетварин в другій і третій групі кожний із кісткових них NaBPCI 57 щурів дефектів місцево обробили або 2мл аутологічного Засновуючись на близькій схожості між модекісткового мозку(7-й день після операції) або Тріслями на тваринах і ВІДПОВІДНИМИ порушеннями у ВРС157(10мкг/кг маси тіла 7-й і 14-й дні після опелюдей і високій мірі близькості між процесами зарації) Тваринам четвертої, п'ятої і шостої груп гоювання у щурів і людей, NaBPCI 57 можна вико ЗО 29 61955 ристати для лікування загоєння ран у людей Беручи до уваги схожість між вищезгаданими моделями на тваринах і ВІДПОВІДНИМИ порушенняПриклад 29 вплив на порушення дихання Мами у людей, NaBPC157 можна застосовувати для теріали і методи лікування синдрому легеневої гіпертонії Крім того, У даних дослідженнях використали морських є очевидним його корисне застосування в комерсвинок(Хартлі, обох статей, з масою тіла 500 ційному розведенні 700г) з плетизмографією всього тіла, уретановою анестезією(1,5г/кг, в/ч), штучною вентиляцією при Приклад 31 експериментальна гіпертензія постійному тиску(0,98кРа) і релаксацією скелетної Матеріали, методи і результати мускулатури під дією суксаметонію(0,2мг/кг маси У тварин з ппертензією(ппертензією Голдбтіла, в/в) Оцінювали об'єм наповнення(мм, середлатта) з двома нирками(2КІС) і з однією нирнє значення ± стандартне відхилення) до і після кою(1КІС) NaBPC157 швидко знижували кров'яний застосування спазмогенів(пстамш, серотонін, ацетиск(наприклад, через 5 або 10 хвилин після ін'єктилхолін, брадикінін, в/в) або №ВРС157(за 10 ції) Ця дія продовжувалася 20 хвилин у щурів хвилин до повторного введення спазмогену, в/в) 1 КІС або, щонайменше, 12 годин у тварин 2КІС Дія неодноразово досягалася після другого або Результати третього введення через 24 - 48 годин Подібним Індукуєме під дією серотоніну, гістаміну, ацечином у щурів, які протягом тривалого періоду чатилхоліну і брадикіншу зниження обсягу наповненсу знаходилися на раціоні з високим рівнем фрукня інгібувалося МаВРС157(10мкг/кг маси тіла, в/в този(80%) або високим вмістом солі(15%), та/або 10нг/кг маси тіла, в/в) Засновуючись на NaBPC157 помітно знижували в противному разі ЦІЛЮЩІЙ дії NaBPC157, що спостерігається, на послідовно підвищені значення кров'яного тиску до звуження бронхів, що індукується різними спазмонормальних показників Лікувальний ефект продогенами, і ВІДОМІЙ близькості між використаною мовжувався довго, і толерантність не розвивалася деллю і захворюваннями людини, є очевидним навіть після шестимісячного періоду Не було відуспішне використання NaBPC157 для лікування мічено впливу NaBPC157 на основні показники різних порушень, пов'язаних із звуженням бронхів кров'яного тиску та/або порушеннями дихальних шляхів Приклад ЗО вплив на синдром легеневої гіпертонії Матеріали і методи Дані досліди описують ефекти антагоністів і антагоністів окислу азоту(ЫО) і вплив NaBPC157 на розвиток синдрому легеневої rmepTOHii(PHS) і тканинні ураження у курчат Проводили досліди по встановленню гострої токсичності Вони включали однократне введення фізіологічного розчину(1мл, в/ч), ЫаВРС157(10мкг/кг маси тіла), LNAME(aHTaroHicr NO/доза 50, 100, 150мг/кг маси тіла) і І_-арпнш(антагоніст NO/ЮОмг/кг маси тіла) з їх комбшаціями(І_-МАМЕ + NaBPC157, L-NAME + Lарпнін) Проводили патологічні дослідження селезінки, серця, печінки і легень і гематологічні аналізи Крім того, поставили досліди по хронічній токсичності Тварин обробляли щодня протягом п'яти тижнів L-NAME(1 Омг/кг маси тіла), Lарпншом(100мг/кг маси тіла), №ВРС157(10мкг/кг маси тіла) і їх комбшаціями(І_-МАМЕ + NaBPC157, L-NAME + L-арпнш) внутрішньочеревно По сім тварин з кожної групи, включаючи контрольних(фізюлопчний розчин 1мл, в/ч) умертвляли кожний тиждень Результати Застосування L-NAME викликало PHS у оброблених курчат Ця дія запобігалася при одночасному введенні L-арпншу і NaBPC157 При патопстолопчному дослідженні гострої і хронічної токсичності було виявлено, що L-NAME викликав сильні тканинні пошкодження(некроз кліток міокарда і печінки і некроз лімфоідних кліток в селезінці), в той час, як L-арпнш в основному викликав ппермію, набряк і крововиливи у всіх органах Гематологічні аналізи показали достовірне зниження рівня гемоглобіну і числа лейкоцитів в групах курчат, оброблених L-NAME Вплив L-NAME успішно інгібувався застосуванням L-арпншу і NaBPC157 NaBPC157 не викликав ніякого пошкодження тканини або органу У доповненні до зниження у противному разі підвищених значень кров'яного тиску NaBPC157 також спричиняв помітне ослаблення або навіть усунення уражень і порушень, що звичайно з'являються в різних органах, якими були(через три тижні після згодовування раціону з високим вмістом солі в контролі) дуже сильна палінова дегенерація з вираженими паренхіматозними крововиливами, дегенерація стінок артерій, вакуолізація кліток серця, сильна гіперемія (особливо в мозковому шарі) надниркових залоз, сильна гіперемія, паренхіматозні крововиливи з гематурією в нирках і гемосидероз і еритроцитографія в селезінці Судини були менш уражені у щурів, оброблених NaBPC157, в доповненні до меншої вакуолізацм стінок і відсутності кровотечі Крім того, у щурів при обробці NaBPC157 послідовно спостерігалася виразна захисна дія відносно пошкодження очного дна Використовуючи різні моделі гіпертонії на тваринах, при введенні NaBPC157 в дозах Юмкг або 10нг/кг маси тіла в/в, в/ч або в/ш, досягалися ПОСЛІДОВНІ результати при різних схемах застосувань Беручи до уваги явну схожість цих моделей і ВІДПОВІДНИХ захворюваннь у людини, NaBPC1157 можна використати для лікування гіпертензії і пошкоджень різних органів, викликаних гіпертензією Приклад 32 вплив на час кровотечі Матеріали і методи Вивчали вплив 2-АМР-ВРС157 на час кровотечі у мишей і щурів(з і без попередньою обробкою гепарином) в поєднанні з оцінкою активності в умовах in vitro на параметри згортання людської крові Результати При основних умовах(2-ДМР-ВРС157, Юмкг, Юнг, Юпг, 1пг, Юнг/кг маситіла, в/ч одночасно з обрізанням хвоста) у мишей і щурів було послідовно показане значне зниження часу кровотечі, яке залежало від дози У дослідах з попередньою об 32 31 61955 робкою гепарином(1000 МЕ/кг в/ч)(за 2 години до ленням хвоста У тестах з гарячою пластиною початку кровотечі) у тварин, оброблених 2-PJPMNaBPCI 57, на відміну від морфіну, не чинив дії на ВРС157 в дозі Юмкг або Юнг/кг маси тіла, постійнормальних тваринах Крім того, NaBPCI 57 прино відмічали значне зниження в противному разі в значали у вигляді попередньої обробки і один раз сильній мірі підвищеного часу кровотечі В умовах а день протягом 14 днів після ін'єкції капсаїцину У in vitro не було показано впливу(2-АРМ-ВРС157 в дослідах NaBPCI 57 в сильній мірі знижував індуконцентрації 10мкг/кг, час інкубації 1 година) на ковану капсаїцином алодинію Це зниження ефекпараметри згортання людської крові Таким чином, ту капсаїцину неможливо було отримати при ввепередбачається вплив на ендотеліальний шар денні NaBPCI 57 на фоні дегенерації соматосенсорних нейронів, що вже виникла під дією капБеручи до уваги схожість в механізмі кровотечі саїцину дегенерації соматосенсорних нейроу людей і тварин і значення моделей, що широко нів(введення тільки на 14-й день після капсаїцину) визнається, використаних для скринінгу агентів, 2Таким чином, оскільки в противному разі неминуче АРМ-ВРС157 можна застосовувати для лікування виснаження соматонейронів після введення капсапорушеної коагуляцм(наприклад, гепаринізації) їцину, можна повністю усунути при щоденному Приклад 33 вплив на експериментальний діавведенні NaBPC157, можливо, що дію NaBPC157 бет можна специфічно віднести до ЦІЛІСНОСТІ чутливих Матеріали, методи і результати соматосенсорних нейронів, що зазнали впливу При внутрішньочеревному введенні(тобто капсаїцину, і їх захисту(тобто основних аферент10мкг/кг маси тіла) було показано, що NaBPC157 них нейронів, що мають маленький діаметр тіла і запобігає розвитку діабету у щурів, індукованого непокриті МІЄЛІНОВОЮ оболонкою(С-) або покриті алоксаном, а також стрептозотоцином Протягом тонкою МІЄЛІНОВОЮ оболонкою(А-8) волокна) 14 днів була встановлена знижена глікозурія і менше ураження острівців У попередніх дослідах Беручи до уваги, що капсаїцин індукує в осноавторів NaBPC-157 був також ефективним при вному однакові порушення у людей і тварин, введенні на фоні 14-денних уражень, під дією алоNaBPC-157 можна використати для лікування різксану У подальших дослідах антидіабетичні ефекних больових розладів, а також захворювань, що ти NaBPC157 потім вивчалися при особливій конвиникли внаслідок ослаблення функцій соматосецентрації уваги на його можливій активності при нсорних нейронів внутрішньошлунковому введенні Застосування Приклад 35 вплив на судоми ЫаВРС157(доза Юмкг і Юнг/кг живої маси) скомбіМатеріали і методи нували з введенням алоксану в дозі 300мг/кг, п/ш Вивчали дію КВРС157 на судоми, індуковані або 200мг/кг маси тіла, п/ш перед(за 2 4 години бікукуліном, пікротоксином, стрихніном і ізоніазиабо за 1 годину до введення алоксаном), разом і дом КБРС157(100мкг, Юмкг або Юнг/кг живої мапісля(через 48 годин після введення алоксаном) си) вводили(в/ч) одночасно або за 15 хвилин до обробки В основному NaBPC157 знижував підвизастосування агентів, що викликають судоми(мг/кг щені рівні глюкози в сироватці крові і значно підмаси тіла, в/б), пікротоксину(З), стрихншу(6, 3 або вищував виживання оброблених алоксаном тва1,5), букукулшу(2,5) і ізоніазиду(800мг) рин(дія була особливо очевидною в групах щурів, Результати оброблених більш високими дозами алоксану) КВРС157 призвів до послідовно позитивноЦікаво, що в доповнення до підвищених рівнів го(залежного від дози і часу) протисудомного ефеглюкози в сироватці крові тварин, яким вводили кту на фоні всіх використаних агентів, що виклиалоксан, відмічалася підвищена поява дільниць кають судоми Беручи до уваги схожість ураження шлунка у контрольних діабетичних щувикористаних моделей і захворювань людини, рів При кожній схемі введення NaBPCI 57 достовіКВРС157 можна використати для лікування судом рно зменшувалась тяжкість виразок незалежно від Приклад 36 травма спинного мозку умов обробки Важливо, що такі ж результати Матеріали і методи отримували на мишах Травму спинного мозку індукували на щурахБеручи до уваги схожість між патологією у люсамцях Албіно Вістар при регульованому тисдини і використаними моделями і в СВІТІ їх ширококу(затиск для судин Aesulap 0,10 0,15 N) на оголего використання для скринінгу активності сполуному спинному мозку на рівні ТЫ2) протягом ЗО чень, NaBPCI 57 можна застосовувати для секунд Тварин обробляли NaBPCI 57(1 Омкг, лікування цукрового діабету Юнг/кг маси тіла, в/ч) або фізіологічним розчином відразу ж після травми і один раз на день до 10-го Приклад 34 антиноцицептивні ефекти дня після травми Тварин забивали через 24 годиМатеріали і методи ни після останнього введення Антиноцицептивні ефекти NaBPCI 57 оцінювали в порівнянні зі стандартними сполученнями Результати аспірином або морфином на різних експериментаРетельне обстеження було проведене клінічльних моделях опосередкованого/прямого сприйно(оцшювали щодня в балах 1 - 5) і мікроскопічно няття болю і нейротоксичності/ больові судоВоно виявило у щурів, оброблених NaBPCI 57, ми(оцтова кислота/ сульфат магнію), здавлення значне ослаблення у іншому разі стійкого параліхвоста, гаряча пластина і введення капсаїцину ча(у контрольних щурів) Беручи до уваги схожість використаних моделей із захворюваннями людиРезультати ни, NaBPCI 57 можна використати для лікування NaBPCI 57(введений або в дозах нг, абомкг/кг, травми спинного мозку в/ч) достовірно знижував реакції при больових судомах(запальних і незапальних, залежних від Приклад 37 хронічна алкогольна інтоксикація простагландинів і незалежних) і в тестах зі здавМатеріали і методи 34 33 61955 Вивчали вплив NaBPC157 на хронічну алкогориферичних нервів У дорослих щурів-самців Вісльну інтоксикацію Для цих ДОСЛІДІВ використали тар(225 250г) під анестезією оголяли правий сідщурів-самців Албіно Вістар Щурам спаювали або ничий нерв, звільняли від з'єднувальної тканини і ВІСКІ, що є в продажу, або етанол(10 - 20% водний робили поперечний розріз на 5см дістальніше від розчин) протягом трьох МІСЯЦІВ Введення NaBPCсідничої вирізки Робили три периневрильних 157(1 Омкг, 10нг/кг маси тіла), пропранолошви(10,0 Ethilon, Ethicon) для анастомозу з метою лу(10мг/кг маси тіла) і ранітидину(10мг/кг маси гарантії правильного збігу пучків Тварин оброблятіла)(контрольні щури отримували рівний обсяг ли місцево в МІСЦІ анастомозу у вигляді ванночки з фізіологічного розчину 5/0мл/кг) внутрішньошлун1мл розчину NaBPCI 57(2мкг/кг або 2нг/мл), внутково або внутрішньочеревно проводили в профірішньошлунково або внутрішньочеревно(10мкг лактичних цілях(за 10 днів перед початком ввеабо 10нг/кг маси тіла) відразу ж після утворення дення алкоголю) або разом з алкоголем або в анастомозу Контрольні тварини отримували рівтерапевтичних цілях(починаючи з кінця двомісячний об'єм фізіологічного розчину У вказані дні ного періоду, тобто протягом останнього місяця після операцм(3, 6, 9, 12 і ЗО днів) ставили функціексперименту) ональні тести Ці тести включали тест з гарячою водою(60°С), тест з холодною водою(2°С), тест з Результати дослідженням руху, EMG-дистальну латенцію і Пряме вимірювання кров'яного тиску в порамплітуду СМАР Також відбирали зразки для ГІтальній вені чітко показало, що NaBPC157, а також СТОЛОГІЧНОГО І морфометричного аналізів У інших пропранолол(при всіх схемах введення) помітно дослідах з використанням тієї ж хірургічної процезапобігали та/або зменшували в противному разі дури і того ж iviecra в нерві мікрохірургічним пінцепідвищені значення портального кров'яного тиску у том протягом 60 секунд проводили травматичне контрольних щурів У протилежність цьому лікуздавлення, і NaBPCI 57 застосовували місцево вання ранітидином призвело навіть до більш висоОцінку проводили через 2, 7, 10, 50, 100 днів ких значень портального тиску, ніж ті, що були у контрольних тварин Крім того, в більшій мірі, ніж пропранолол, NaBPC157 був здатний помітно ослабляти в противному разі виражені ураження в шлунку щурів, що отримали алкоголь Подібний цілющий ефект був також відмічений при ураженнях інших органів(тобто нирок, серця) Беручи до уваги ці ПОСЛІДОВНІ ПОЗИТИВНІ ефекти і загальновідомий доказ того, що підвищене споживання алкоголю призводить до аналогічних змін у людей, є очевидним, що NaBPC157 корисний для лікування порушень, що виникли під дією алкоголю Приклад 38 вплив на ішемічні порушення в мозку Матеріали і методи NaBPCI 57(1 Омкг або 10нг/кг маси тіла, в/ч) або фізіологічний розчин(5/0мл/кг маси тіла/ в/ч) вводили або за 1 годину до, або через 1 годину після накладення лігатури на обидві сонні артерії на період тривалістю 3 або 6 годин у щурів Результати Є очевидною сильна позитивна дія NaBPCI 57 при введенні як до обробки(за 1 годину до накладення лігатури), так і після обробки(через 1 годину після накладення лігатури) Це було в мкг- і нгдозах і в дослідах тривалістю 3 або 6 годин Крім бальних значень, найбільш чіткими і характерними виявленими фактами була наявність сильного периваскулярного набряку і набряку мозкової тканини поряд з ппермією мозку Також були відмічені зони демієлінізацм, особливо в мозочку Всі ЦІ ознаки були значно менш виражені в групах тварин, оброблених NaBPCI 57, незалежно від умов обробки Беручи до уваги тяжкі ішемічні ураження, відмічені в контролі і явну схожість між ішемічними порушеннями у щурів і людей, є очевидним сприятливе застосування NaBPCI 57 для лікування ішемічних порушеннь мозку Приклад 39 вплив на пошкодження нерва Матеріали і методи Вивчали вплив NaBPCI 57 на регенерацію пе Результати При ОЦІНЦІ КЛІНІЧНО або мікроскопічно, особли во в ранньому періоді, застосування NaBPCI 57 помітно поліпшувало загоєння у травмованих щурів Приймаючи до уваги близьку схожість травми у тварин із захворюваннями у людини, NaBPC157 можна використати для лікування пошкоджень периферичних нервів Приклад 40 вплив на нейролептичні розлади Оцінювали вплив NaBPC157 на різні індуковані нейролептичні розлади Матеріали, методи і результати Введення NaBPCI 57(1 Омкг або 10нг/кг маси тіла, в/ч) послідовно ослабляло каталепсію, що виникла під дією галоперідолу і флуфеназину(галоперідолу 0,625, 1,25, 2,5, 5,0 і 10,0мг/кг маси тіла, в/ч, флуфеназин 0,3125, 0,625, 1,25, 2,5 і 5,0мг/кг маси тіла, в/ч(4,0мл/кг)), при більш низьких дозах обох нейролептиків в подальші інтервали часу У поповненні до цілющої дії на фоні більш низьких доз нейролептиків, навіть більш сильний корисний антикаталептичнии ефект NaBPCI 57 був відмічений при більш високих дозах обох нейролептиків, що спостерігається як в мкг-, так і нгдозах NaBPCI 57 Ця дія була також відмічена при соматосенсорній орієнтації у тварин, оброблених сульпіридом(20, 40, 80 і 160мг/кг маси тіла, в/ч), незважаючи на те, що у контрольних мишей при обробці сульпіридом каталепсія не спостерігалася Є очевидним позитивне використання NaBPCI 57 при лікуванні порушень, пов'язаних з дофаміновими системами, каталептичними порушеннями і нейролептичними розладами Приклад 41 застосування для лікування шоку Матеріали і методи Вивчали експериментальний геморагічний шок у щурів під анестезією(канюлі в загальній сонній артерії і яремній вені) Контролюєме видалення обсягу крові проводили до падіжу або стабільного низького кров'яного тиску(30 - 35mm Hg) У цих дослідах СаВРСІ 57(1 Омкг або 10нг/кг маси тіла) 36 35 61955 або фізіологічний розчин вводили внутрішньоче24 години до забою Тварини інших груп отримуревно^,Омл/кг) за 15 хвилин до кровотечі або внували однократну мкг-дозу препарату на 15-й день трішньовенно(3,0мл/кг) після 5-хвилинного періоду післ оварюектомм П'ять груп використали в якості стабільного низького кров'яного тиску контролю тваринам двох груп проводили оварюектомію, обробляли фізіологічним розчином і забиРезультати вали на 15-й і 28-й дні після видалення яєчників, У порівнянні з контрольними значеннями дотваринам однієї групи не була проведена оварюестовірно більш висока втрата обсягу крові, що підктомія, але їх обробляли фізіологічним розчином, і тримується до падіжу(залежна від дози), була потварини двох груп без оварюектомм були обробслідовно відмічена у щурів, оброблених лені №ВРС157(10мкг або 10нг/кг живої маси/ в/ч) СаВРС157 У тварин із зниженим обсягом крові і один раз на день протягом 28 днів Від кожної твагіпотензією, оброблених СаВРСІ 57, було показане рини брали вапнальні мазки за 5 хвилин до опенегайне і підвищення кров'яного тиску при відсутрації і на 9, 14 і 28 дні експерименту і їх забарвлюності падіння, що тривало продовжувалося Це вали Рар для цитологічного аналізу Ступінь контрастувало з коротким і слабим підйомом кродозування вапнального епітелію виражали за дов'яного тиску і падіжом 75% тварин до кінця 45помогою показників дозрівання Після забою відхвилинного дослідного періоду в контрольній групі бирали дистальні КІНЦІ кісток від кожної тварини У щурів, підданих тільки операції після анестезії, для проведення біомеханічного тестування, яке але не ексангуляцм, СаВРСІ 57(в/ч або в/в), ввестисло описано нижче дений після 65-хвилинного періоду стабілізації, не впливав достовірно на показники артеріального Біомеханічне тестування тиску протягом такого ж періоду часу після обробВсі КІСТКИ перевірили в залежності від різних ки На основі цих даних передбачається, що моментів згинання(одна точка згинання)(момент СаВРСІ 57 може бути ефективним в пом'якшенні згинання = Nm) в різних напрямах, передньонаслідків гострої втрати крові Беручи до уваги задньому- і латеро-латеральному У цьому ДОСЛІДІ явну схожість між використаними моделями на використали стегнову і великогомілкову кістки тваринах і порушеннями у людей, СаВРСІ 57 можДистальні частини кісток фіксували кістковим цена використати для лікування шоку MeHTOM(Palacos) в металевих трубках довжиною Приклад 42 вплив на аномальні лімфоцити Матеріали, методи і результати Вивчали імунологічні показники у двох пацієнток, що страждають рідкісним КЛІНІЧНИМ захворюванням - спадковою еозинофілією, пов'язаною з штраепідермальним бульозним дерматитом і підгострим склерозивним паненцифалітом Досліджували дію NaBPC157(in vitro) на хромосомну аберацію в лімфоцитах і проліферацію Т-кліток NaBPC157 індукував достовірне зниження хромосомної аберації грубих типів(тобто нормалізував лімфоцитарні показники) і виявив стимулюючий ефект на мітоз Приклад 43 вплив на аномалії розвитку Матеріали і методи Вивчали вплив NaBPC157 на виникнення аномалії розвитку у мишей, індукованих вітаміном А МаВСР157(10нг/кг маси тіла або 10мкг/кг маси тіла в/ч) або фізіологічний розчин(5мл/кг тіла, в/ч) вводили одночасно з вітаміном А(15700МЕ/кг маси тіла, 66 в/м) на 10-й день вагітності В якості контролю використали мишей, оброблених вітаміном А, але отримавших в тій же дозі і в той же час фізіологічний розчин Результати При введенні вітаміну А був індукований ряд аномалій розвитку У групах мишей, оброблених NaBPC157, було відмічене достовірне зниження КІЛЬКОСТІ аномалії розвитку Є очевидним корисне застосування NaBPC157 при лікуванні порушень у плодів Приклад 44 оварюектомія Матеріали і методи Проводили звичайну оварюектомію NaBPC157 вводили(10мкг або 10нг/кг маси тіла, в/ч) або один раз на день протягом 28 днів, або один раз на день протягом 14 днів, починаючи з 15-го дня після оварюектомм Постійно при тривалій схемі введення останнє застосування було за 1см Металеві трубки фіксували в системі для навантаження Кістки ПОСТІЙНО тримали вологими Вимірювали вільну частину кістки, а також довжину від фіксуючої частини до точки навантаження Експеримент проводили ВІДПОВІДНО принципу згинання палиці, фіксованої в одній точці, в межах еластичності Навантаження становило 0, 1, 0,2, 0,5, 0,7, 1,0 N Деформацію або кут згинання визначали, як кут відхилення лазерного променя, який відбивався від невеликого дзеркала, зафіксованого на КІНЦІ кістки Масу дзеркала додавали до прикладеної сили згинання Міліметрівка, на яку направляли лазерний промінь, була видалена на 1,5 - 1,8см від кістки з невеликим дзеркалом, встановленим на ній Кут деформації визначали, використовуючи тригонометричний метод При кожному окремому навантаженні замінювали тривалість деформацм(і подальшого відновлення) Після зняття навантаження кістка повернулася в м початкове положення, що свідчить про те, що структурні зміни в КІСТЦІ були відсутні, і що навантаження було забезпечене межами еластичності по діаграмі Хука Це спостереження показало, що було можливим навантажувати одну і ту ж кістку ДВІЧІ В різному напрямі без зміни и структури Якщо не спостерігали додаткову деформацію протягом двох подальших хвилин, або якщо досягалося додаткове відновлення, ці точки встановлювалися як кшцеві(в основному час вимірювання становив приблизно ЗО секунд(контроль з оварюектомією) або 16 хвилин(здорові тварини)) Кісткову кутову деформацію(навантаження і відновлення після навантаження) виражали вмм/сек Результати Щоденне введення NaBPC157 в обох дозах призвело до помітно підвищеного значення показників дозрівання в порівнянні з атрофічними зниженими показниками дозрівання у необроблених контрольних щурів Таким чином, передбачається, 38 37 61955 що NaBPC157 здатний запобігати атрофії піхви у шував показники по гемоглобіну щурів, викликаній кастрацією Отже, є очевидною протипухлинна дія NaBPC157 Беручи до уваги очевидну схожість У тварин контрольних груп при проведенні моделей на тварин і захворювань у людини і позиоварюектомм спостерігали найнижчу амплітуду тивні ефекти, отримані як в дослідах in vivo, так і in згинання з найкоротшим часом, а також найнижчу vitro, NaBPC157 є корисним для протипухлинної амплітуду повернення в початковий стан Однакотерапії NaBPC157 є придатним для ослаблення во низькі значення були отримані в обох контрольшкідливих ефектів від застосування цитостатиків них групах щурів, котрих умертвили через 15 або 28 днів Це було відмічене в обох групах тварин з Приклад 46 антивірусна активність видаленими яєчниками, оброблених фізіологічним Матеріали і методи розчином(забиті або на 15-й, або 28-й дні) ПозиАРВО-віруси(кліщовий енцефалгг(ТВЕ), Впативну тенденцію спостерігали в групі, що отримала ma, Denque 1, 2, 3, 4, Smbis, West Nile, Ealovo), NaBPC157 вмкг-дозах на 15-й день після оварюекгепатит А, лімфатичний хорюменшпт(І_СМ) і гертомм Достовірно кращі результати отримали у всіх пес тип 1 вводили в/ш(або п о (після операції} інших групах, оброблених NaBPC157 в нг- або мкггепатит А) у вигляді вірусних суспензій, в розведозах Найкращі результати були отримані в групі денні 10 (0,02мг/миша) NaBPCI 57(20мкг/кг маси тварин, які щодня отримували NaBPC157 в мкг тіла) або 0,9% ЫаС1(0,02мл/миша) вводили в/ш дозах протягом 28 днів Всі параметри у тварин з або в/ч а) перед обробкою, Ь) одночасно з введенвидаленими яєчниками помітно поліпшилися і міра ням вірусу або с) через 4 дні після зараження на поліпшення мала тенденцію до досягнення знафоні симптомів захворювання, що вже виникли чень, відмічених в групах здорових щурів Не було Результати відмічено ВІДМІННОСТІ між здоровими щурами, неПісля одночасного введення NaBPC157 з вірузалежно від того, були вони оброблені фізіологічсами було відмічене значне сповільнення в появі ним розчином або NaBPCI 57(мкг- або нг-дози) симптомів захворювання і подальшого падіжу(в противному разі постійно мав місце на 4-й і 5-й дні Беручи до уваги загальноприйняте значення після зараження у контрольних тварин) При ввецих моделей на тваринах для захворювань, пов'яденні на фоні тяжкої картини захворювання, послізаних з оварюектомією у людей, як відносно атдовно зазначали достовірне збільшення виживанрофії піхви, так розвитку остеопорозу, є очевидня При введенні NaBPCI 57 перед обробкою ним, що NaBPC157 можна використати для вірусом очевидним була повна відсутність або лікування оварюектомм симптомів, або подальшого падіжу тварин Приклад 45 пухлини Матеріали, методи і результати У цілях перевірки отриманих результатів тестували також вірулентність використаних вірусних Однією З моделей експериментальних пухлин, суспензій(заражені ARBO-вірусами) шляхом заращо найбільш використовуються, є оцінка числа ження суспензіями мозкової тканини, приготоваметастазів карциноми і меланоми В-16 у мишей ними від мишей, яким раніше ввели NaBPC157 Подібно різноманітним моделям експериментальабо фізіологічний розчин, і ВІДПОВІДНО ЯКІ них пухлин, ці експериментальні моделі розділявижили(МаВРС157)(незважаючи на введення вірують значну схожість з порушеннями, що спостерісу) або загинули спонтанно(фізюлопчний розчин) гаються у людей Було показано, що NaBPC157, На відміну від мишей, заражених суспензією моззастосований в різних схемах, знижує число метакової тканини з обробкою фізіологічним розчистазів у оброблених мишей в порівнянні з ВІДПОВІном(які не відрізнялися від мишей, яких заразили ДНИМИ контрольними значеннями Асцитна пухливірусною суспензією і обробили фізіологічним розна Ерліха(ЕАТ) є пухлиною, яка може рости у чином) симптоми захворювання або падіж не спомишей всіх штамів Вона може рости в асцитній стерігали у мишей, яких заразили суспензією мозабо СОЛІДНІЙ формі в залежності від шляху ввекової тканини при обробці NaBPCI 57 Після дення пухлинних клітин Незважаючи на те, що введення суспензії мозкової тканини мишей спозвичайно пухлинні моделі на тваринах тільки частстерігали протягом 50 днів ково розділяють схожість з хворобами у людей, застосування цієї моделі досягло загального виПозитивні ефекти NaBPCI 57 зберігалися при знання внаслідок м придатності для вивчення проінкубації при підвищеній температурі(56°С протятипухлинних препаратів гом ЗО хвилин) Виживання(дні) у мишей, яким ввели асцитні пухлинні клітини Ерліха в основному зводиться до періоду менш, ніж 25 днів Попередня інкубація пухлинних кліток з NaBPCI 57(2мкг/мл) призвела до збільшення тривалості життя у тварин, які ввели згадані пухлинні клітини Більш 90% тварин вижило до кінця 45-денного періоду спостережень Крім того, різні цитостатичні препарати індукували нейтропенію у пацієнтів, а також на експериментальних моделях Циклофосфамід є загальноприйнятим препаратом, що використовується для індукції нейтропенм Використання циклофосфаміду(180мг/кг, в/ч) індукувало достовірні порушення NaBPC157 попереджував нейтропенію, зменшував КІЛЬКІСТЬ ретикулоцитів і поліп Беручи до уваги, що ці віруси індукують аналогічні порушення у людей, NaBPC157 можна використати для лікування, вірусних захворювань, особливо лікування в тих випадках, коли помітно послаблений загальний стан(наприклад, СНІД або пов'язані з СНІДом захворювання) Приклад 47 ураження кишечника Матеріали і методи Вивчали ефекти NaBPCI 57(111 мкг або 10нг/кг, в/ш, в/ч) на щурах в порівнянні з декількома стандартними речовинами на декількох експериментальних моделях виразки(48-годинний стрес, що подавляється, тести з виразкою при підшкірному введенні цистеамшу, внутрішньошлунковому введенні 96% етанолу, ДІЛЬНИЦІ поразки під дією 40 39 61955 NSAIAs, ОІ\ІРЕ(динггрофторбензолу), рефлюкс дини після періоду кондицюнування NaBPC157(B стравоходу з подальшим кінцевим-латеральним дозі 10мкг/кг) в поєднанні з діазепамом віддаляв анастомозом між стравоходом і порожньою кишцей ефект до останнього терміну спостережень У кою)(перед-/спільно/після обробки) цій групі на шість годинних інтервалів, на відміну від мишей, кондицюнованих діазепамом, латентні Результати періоди перед судомами після введення ізоніазиду Тільки введення NaBPC157 було послідовно були як і раніше довшими, ніж у ВІДПОВІДНОГО контефективним на всіх тестованих моделях Бромкролю NaBPC157 не викликав якоі-небудь толерариптин, аматодин, фамотидин, циметидин і сомаснтності татин були неефективними(стрес, що подавляється) або були тільки частково Беручи до уваги значення цих моделей для ефективними(бромкриптин, ураження кишечника захворювань людини, є очевидним, що NaBPC157 під дією DNFB, сукралфат, ранітидин, холестерапридатний для лікування порушень ВІДМІНИ мін, рефлюкс стравоходу) Розглядаючи результаПриклад 50 вплив на порушення нирок ти по стандартним пептидам, захисну дію, залежну Матеріали і методи від дози(цистеамш) та/або частковий позитивний Введення хлориду ртуті(1мг/кг, в/в) або циспефект(пов'язаний з умовами обробки) (етанол) латини(10мг/кг, п/ш) приводить до гострої ниркової отримали з глюкагоном, NPY і секретином в той недостатності у експериментальних тварин При час, як ССК/2 6-30/ був неефективний відтворенні таким чином ниркоподібна недостатність тісно корелювали з ВІДПОВІДНИМ розладом у Беручи до уваги, що всі ці моделі використолюдини Отже, ураження, індуковані у щурів, в вувалися для скринінгу препаратів, що використозначно високій мірі розділяють схожість з ВІДПОВІДвуються в цей час для лікування уражень шлункоНИМИ ураженнями у людей во-кишкового тракту і ПОСЛІДОВНІ позитивні ефекти NaGPC157, є очевидним його корисне застосуванРезультати ня для лікування уражень усього кишкового тракту NaBPC157 помітно ослабляв ураження у щурів при введенні як до обробки, так і після обробки Приклад 48 вплив на розлади пізнавальної Одностороння нефректомія створила помітне фуздатності нкціональне перевантаження і функціональну гіМатеріали і методи пертрофію нирки, що залишилася Введення Використання антихолшерпчних препараNaBPC157 збільшило діурез у тварин після однотів(скополаміну, атропіну, 10мг/кг маси тіла, в/ч) сторонньої нефректомії і знизило гіпертрофію нирприводило до значного дефіциту пізнавальної здаки, що залишилася Таким чином, в поняттях фунтності у щурів, що успішно відтворюється при ОЦІкціональної теорії про компенсаторну ниркову НЦІ поведінки тварин у водяному Т-лабіринті прогіпертрофію, ці виявлені факти підкреслюють потягом тривалого періоду часу ліпшену функцію нирки, що залишилася Це також Результати підтверджується додатковими біохімічними даниУ порівнянні з контролем у щурів, оброблених ми Крім того, ці дані повністю узгоджуються з скополаміном і атропіном, можна було чітко побаефектами, отриманими на щурах з гіпертонією зі чити підвищену КІЛЬКІСТЬ помилок Цей дефіцит стенозом ниркової артерії та/або після одностопізнавальної здатності усувався(отримані значенронньої нефректомії Є очевидним корисне застоня були рівні контрольним значенням) при подасування NaBPC157 для лікування ниркових порульшому спільному введенні з NaBPC157(10MKr або шень 10нг/кг маси тіла, в/ч) Беручи до уваги велике значення цих моделей для розладів пізнавальної здатності у людини, є очевидним, що NaBPC157 корисний для лікування порушень пізнавальної здатності Приклад 49 вплив на порушення скасування Матеріали, методи і результати NaBPC157 виявив протисудомну дію, взаємодіючи з ГАМК-енергетичною системою, і підвищував ефективність діазепаму при спільному введенні(10мкг/кг, 10нг/кг, в/ч) з діазепамом(5,0мг/кг, в/ч, ДВІЧІ на день протягом 10 днів) NaBPC157 ослабляв толерантність до діазепаму і віддаляв ефекти скасування і фізичну залежність У тестах по толерантності через 42 години після кондиційної схеми введення, спостерігали більш короткі перед судомами латентні періоди, ніж у здорових мишей після введення ізоніазиду(800мг/кг, в/ч), якщо діазепам(5,0мг/кг, в/ч) давали знову мишам, раніше кондиційно оброблених одним діазепамом У тесті фізичної залежності(оцшювали через б, 14, 42 і 72 години після кондиційної обробки) були відмічені більш короткі перед судомами латентні періоди у мишей, кондицюнованих діазепамом в порівнянні з некондицюнованими здоровими мишами після обробки ізоніазидом через 42і 72 го Приклад 51 КЛІТИННІ імунні реакції у ВІДПОВІДЬ лімфоцитів периферичної крові Дані по вивченню клітинних імунних реакцій у ВІДПОВІДЬ лімфоцитів периферичної крові на ВРС в контролі і у пацієнтів з різними захворюваннями представлені в таблиці 2 ВІДПОВІДНІ реакції Тклітин периферичної крові на ВСР тестували за допомогою методу, описаного deSmet et al (deSmet MD et al в «Cellular immune responses of patients with uveitis to remal antigens and their fragments» Am JOphthal, 110 1 3 5 - 1 4 2 , 1990) з 7денними клітинними культурами Клітини інкубували без антигену і з 20нг/л антигену(ВРС157пентадекапептиду) Для кожного пацієнта вирахували індекс стимуляції діленням середнього числа стимульованих антигеном культур на середнє число контрольних клітинних культур без додавання антигена, тобто ВРС157-пентадекапептиду Результати представлені в таблиці 2 Контрольні значення ^2, визначені у контрольних суб'єктів(таблиця 2), відповідали значенням, отриманим іншими дослідниками для пептидів схожої молекулярної маси, тобто у контрольних суб'єктів була відсутня сенсибілізація лімфоцитів периферичної крові на ВРС157-пентадекапептид 42 41 61955 У пацієнтів з різним захворюваннями ПОМІТНІ КЛІшень у пацієнтів, страждаючих явно від інших заТИННІ реакції у ВІДПОВІДЬ на ВСР, представлені в хворювань На основі цього можна припустити про 1 таблиці 2, вказують на системну сенсибілізації застосування ВСР-пов язаних агентів(наприклад, лімфоцитів на цей пептид шлункового соку Ці дані солей ВРС157-пентадекапептиду) в імуномодулячітко вказують на наявність ВСР-пов'язаних поруЦІЙНІЙ терапії ВІДПОВІДНИХ захворювань Таблиця 2 Підвищені індекси стимуляції Т-кліток периферичної крові у 11 пацієнтів з різними захворюваннями Захворювання Пептична виразка Множинний склероз Підгострий склероз Пансенцефаліт Очний неврит Очний неврит Увеїт Увеїт Увеїт Сірковід'ємна спондилоартропатія Спадкова еозинофілія і бульозний дерматит Увеїт Стать Ж Ж Ж Ч Ж Ж Ч Ж Ж Ж Ж Результати вищеописаних фармакологічних досліджень демонструють корисну активність солей ВСР-пептидів для захисту організмів від стресу і захворювань і, загалом, нормалізації функцій 3S00 ЗО ЭО 250С 2000 ^500 10 Э0 Індекс стимуляції Контрольні значення