Застосування [6-(4-хлорфеніл)-2,2-диметил-7-феніл-2,3-дигідро-1н-піролізин-5-іл]оцтової кислоти при лікуванні дегенерації суглобового хряща або структурних змін субхондральної кістки

1. Застосування [6-(4-хлорфеніл)-2,2-диметил7-феніл-2,3-дигідро-1Н-піролізин-5-іл]оцтової кислоти формули (Іа) C2 2 (19) 1 3 81229 4 7. Застосування за будь-яким з пп. 1-6, де вказане (8) зниженого рівня основного фактора росту лікування або профілактика включає в себе фібробластів (b-FGF); введення додатково до сполуки формули (Іа) (9) підвищеного рівня кератансульфату; однієї або декількох речовин, вибраних з групи, що (10) підвищеного рівня матриксних металопротеаз складається з полісульфатованого (ММР), включаючи стромелізин; глікозаміноглікану (PSGAG), глюкозаміну, (11) підвищеного відношення матриксних хондроїтинсульфату (CS), гіалуронової кислоти металопротеаз (ММР), включаючи стромелізин, до (НА), пентозанполісульфату (PPS), доксицикліну тканинного інгібітору металопротеаз (ТІМР); та міноцикліну. (12) підвищеного рівня остеокальцину; 8. Застосування [6-(4-хлорфеніл)-2,2-диметил-7(13) підвищеного рівня лужної фосфатази; феніл-2,3-дигідро-1Н-піролізин-5-іл]оцтової (14) підвищеної відповіді цАМФ на гормональний кислоти формули (Іа) стимул; (15) підвищеного рівня активатора плазміногену урокіназного типу (uPA); (16) підвищеного рівня олігомерного білка хрящового матриксу; (17) присутності специфічних неоепітопів колагену типу II і Cl (18) підвищеного рівня колагенази. N 14. Застосування за будь-яким з пп. 8-13, де фармацевтична композиція призначена для COOH , введення вказаної сполуки формули (Іа) у кількості її фізіологічно прийнятної солі або фізіологічно близько 1-10 мг/кг/день. гідролізованого ефіру для одержання 15. Застосування за будь-яким з пп. 8-14, де фармацевтичної композиції для профілактики вказане лікування або профілактика включає в прогресування дегенерації або деструкції себе введення додатково до сполуки формули (Іа) суглобового хряща і/або субхондральної кістки. однієї або декількох речовин, вибраних з групи, що 9. Застосування за п. 8, де вказане прогресування складається з полісульфатованого асоційоване з остеоартритом. глікозаміноглікану (PSGAG), глюкозаміну, 10. Застосування за п. 8 або 9, де вказана хондроїтинсульфату (CS), гіалуронової кислоти дегенерація або деструкція пов'язана з ранньою (НА), пентозанполісульфату (PPS), доксицикліну стадією. та міноцикліну. 11. Застосування за п. 10, де вказана рання стадія 16. Фармацевтична композиція для лікування або включає у себе пошкодження, ураження або профілактики дегенерації або деструкції втрату суглобового хряща і/або субхондральної суглобового хряща і/або субхондральної кістки, кістки. яка містить 12. Застосування за п. 11, де вказана рання стадія, (А) [6-(4-хлорфеніл)-2,2-диметил-7-феніл-2,3яка включає в себе пошкодження або втрату дигідро-1Н-піролізин-5-іл]оцтову кислоту формули суглобового хряща, є безсимптомною. (Іа) 13. Застосування за будь-яким з пп. 10-12, де вказана рання стадія визначається одним або декількома позитивними результатами будь-якого біохімічного тесту, що проводиться на рідинах організму або суглобової тканини ссавця відносно: (1) підвищеного рівня інтерлейкіну-1 бета (IL-1β); Cl (2) підвищеного рівня фактора некрозу пухлини N альфа (TNFα); (3) підвищеного відношення IL-1β до білкового COOH антагоніста рецептора IL-1 (IL-IRa); , (4) підвищеної експресії рецепторів р55 TNF (p55 її фармацевтично прийнятну сіль або фізіологічно TNF-R); гідролізований ефір; і (5) підвищеного рівня інтерлейкіну-6 (IL-6); (В) одну або декілька речовин, вибраних з групи, збільшення фактора інгібування лейкемії (LIF); яка складається з полісульфатованих (6) зниженого рівня інсуліноподібного фактора глікозаміногліканів (PSGAG), глюкозаміну, росту 1 (IGF-1); хондроїтинсульфату (CS), гіалуронової кислоти (7) зниження трансформуючого фактора росту (НА), пентозанполісульфату (PPS), доксицикліну і бета (TGFβ); зниженого рівня тромбоцитарного міноцикліну. фактора росту (PDGF); Даний винахід відноситься до застосування у ссавців анельованих сполук піролу і, зокрема ML3000, їх солей або похідних, для лікування і профілактики ушкодження хряща і/або субхондральної кістки і руйнування запалених суглобів у таких ссавців. Таке ушкодження хряща і/або субхондральної кістки є природним наслідком процесу остеопорозу та його результатів, коли він 5 81229 6 відбувається у ссавця. Можливість досягнення карагенаном, у щурів і ад'ювантний артрит щурів такого несподіваного ефекту названа [4]. «хондропротекцією». Остеоартрит (ОА) є найпоширенішим Нестероїдні протизапальні засоби (NSAID), захворюванням серед хвороб опорно-рухового такі як ацетилсаліцилова кислота (ASA), апарату. В основному дане захворювання уражає диклофенак, індометацин, ібупрофен і напроксен, істинні суглоби (діартрози) кінцівок, що несуть широко використовуються у клінічній медицині. З навантаження, такі як тазостегнові і колінні фармакологічної точки зору, вони діють як суглоби, а також уражає інші суглоби, такі як інгібітори циклооксигенази (СОХ). міжфалангові суглоби і суглоби хребта. Структурні Піролізини, які володіють подібною зміни при даному захворюванні включають в себе фармакологічною дією, відомі з багатьох прогресуюче руйнування суглобового хряща, публікацій. Наприклад, піролізини з утворення остеофітів і, на клінічній стадії протизапальною активністю описані в [Arch. захворювання, різний ступінь синовіального Pharm. 319, 65-69 (1986); 319, 231-234 (1986); 318, запалення. З цими змінами також пов'язана значна 661-663 (1985); 318, 663-664 (1985); 319, 500-505 перебудова субхондральної кістки, яка, за деяким (1986); 319, 749-755 (1986); 327, 509-514 (1994); даними, ймовірно, пов'язана з надмірною 330, 307-312 (1997), а також у J. Med. Chem. 1987, резорбцією кістки на ранніх стадіях захворювання, 30, 820-823 і 1994, 37,1894-1897]. з подальшим надмірним кісткоутворенням, що Також можна вказати піролізини, описані в [US приводить до склерозу кістки і потовщення 5260451 (відповідає ЕР 0397175), а також у WO субхондральної кістки. 95/32970; WO 95/32971; і WO 95/32972]. Дані Дані механізми, що приводять до розвитку і сполуки представлені структурною формулою прогресування структурних змін, які спостерігаються при остеоартриті (ОА), включають в себе багато факторів і є комплексними, і у більшості своїй залишаються невідомими. Вони залучають не тільки хрящ, в якому спостерігається велике число морфологічних змін, але також і синовіальну мембрану, яка є ділянкою запальної реакції різного ступеню і тяжкості [1]. Ймовірно, і містять анельовану діарилпірольну групу, а існує велика кількість шляхів, які відповідають за також кислотний залишок R3 як третій замісник. катаболізм матриксу хряща, включаючи Дані сполуки характеризуються високою підвищення регуляції розчинних факторів, таких як ліпофільністю, хорошою біодоступністю і середнім інтерлейкін-1 (IL-1), фактор некрозу пухлин-a рівнем тривалості періоду напіввиведення, [див. (TNF-a) і простагландини, які можуть індукувати Drugs of the Future, 1995,20 (10): 1007-1009]. руйнування суглобового хряща. Безпосереднє Крім того, піролізини подібної будови описані у ушкодження хрондроцитів також стимулює [DE 19845446.6 і WO 01/05792]. Більш того активність металопротеази матриксу (ММР), стверджується, що піролізини, заміщені наприклад, колагеназ, стромелізинів і желатиназ, і алкілсульфінілбензоїлом і продукцію різних медіаторів запалення [2]. алкілсульфонілбензоїлом, відповідно до [US Припускають, що метаболічні процеси, що 4232038], володіють протизапальними, постійно протікають у будь-якому вказаному вище анальгетичними і жарознижувальними суглобі і необхідні для його відновлення і властивостями. Відповідно до [DE 19624290.8 і DE подальшого нормального стану, піддають 19624289.4], деякі сполуки даного типу знижують ушкодженню, такому як травматичне ушкодження. рівень ліпідів. Отже, для того, щоб сполука була прийнятним ML3000 ([2,2-диметил-6-(4-хлорфеніл)-7хондропротективним агентом, вона, передусім, феніл-2,3-дигідро-1Н-піролізин-5-іл]оцтова повинна підтримувати таку метаболічну активність кислота) формули (Іа) хондроцитів, тобто не інгібувати або не впливати на клітинний поділ і біосинтез компонентів матриксу, які є частиною відновлювального процесу. У цьому відношенні, фахівцеві у даній області буде зрозуміло, що велика кількість NSAID володіє вираженою інгібіторною активністю відносно біосинтезу головних компонентів позаклітинного матриксу. У той же час, прийнятний хондропротективний не володіючи антиоксидантною активністю, є агент повинен перешкоджати деградуючій подвійним збалансованим інгібітором СОХ і 5активності медіаторів, таких як різні цитокіни, ліпоксигеназ (5-LO) [3]. Даний препарат є простагландини і протеїнази, відносно хряща. неселективним інгібітором СОХ, інгібуючи як СОХТому, що зрозуміло фахівцеві у даній області, 1, так і СОХ-2. Він володіє анальгетичною, можливі хондропротективні препарати потрібно жарознижувальною і протизапальною активністю і, оцінювати як з точки зору позитивних ефектів як було показано, надає сильний протизапальний відносно анаболічних шляхів, так і по їх здатності ефект у великій кількості моделей на тваринах, інгібувати катаболічні процеси. Катаболічні події, включаючи набряк кінцівки, викликаний які звичайно розглядаються, серед іншого, включають в себе вивільнення та інгібування 7 81229 8 ферментів, що деградують матрикс, вплив на алкіл, галогеналкіл, алкокси, арилокси, біосинтез простагландинів і лейкотриєнів та галогеналкокси, алкілтіо, гідрокси, нітро, здатність препарату інгібувати IL-1, що викликає алкілсульфініл, алкілсульфоніл, сульфамоїл, Nдеградацію суглобового хряща. алкілсульфамоїл, Ν,Ν-діалкілсульфамоїл, Багато років використовували ряд препаратів, алкілсульфонамідо і алкілсульфон-N-алкіламідо; таких як NSAID, активність яких була другий з радикалів R1, R2, R3 являє собою безпосередньо пов'язана з інгібуванням ферментів алкіл, необов'язково заміщений одним або більше СОХ. Хоча вони можуть ефективно знижувати замісниками з групи, що включає в себе галоген, симптоми остеоартриту, такі як біль, вони мають циклоалкіл, алкокси, трифторметокси, гідрокси і обмежену здатність до зниження прогресування трифторметил; циклоалкіл, необов'язково ОА в експериментах in vivo [8, 9]. При лікуванні заміщений одним або більше замісниками, тенідапом і царпрофеном - обидва препарати є незалежно вибраними з групи, що включає в себе NSAID з інгібіторною активністю відносно як галоген, алкіл, галогеналкіл, циклоалкіл, алкокси, циклооксигенази-1 (СОХ-1), так і СОХ-2, - дані галогеналкокси і гідрокси; арил, необов'язково препарати показали анти-ОА дію [8, 9], тоді як інші заміщений одним або більше замісниками, NSAID, такі як диклофенак або ASA, були незалежно вибраними з групи, що включає в себе неефективні [10] або навіть посилювали галоген, алкіл, галогеналкіл, алкокси, арилокси, ушкодження хряща в експериментах на моделі ОА галогеналкокси, алкілтіо, гідрокси, нітро, у собак [11]. Аналогічно, на людях останні алкілсульфініл, алкілсульфоніл, сульфамоїл, Nдослідження на основі критеріїв рентгенологічного алкілсульфамоїл, Ν,Ν-діалкілсульфамоїл, аналізу пацієнтів, які страждають ОА колінного алкілсульфонамідо і алкілсульфон-N-алкіламідо; суглоба, показали, що, при лікуванні або ароматичну або неароматичну, моно- або тіапрофеновою кислотою, іншим представником біциклічну, необов'язково бензоанельовану, NSAID, протягом періоду понад 5 років прогресія гетероциклічну групу з 1,2 або 3 гетероатомами, ушкодження хряща може не зменшуватися, а при незалежно вибраними з Ν, Ο і S, і необов'язково лікуванні індометацином дана прогресія може заміщену одним або більше замісниками, навіть посилюватися [15]. незалежно вибраними з групи, що включає в себе Несподівано було виявлено, що деякі галоген, алкіл, галогеналкіл, алкокси, арилокси, анельовані похідні піролу, такі як ML3000, значно галогеналкокси, алкілтіо, гідрокси, нітро, знижують розвиток уражень експериментального алкілсульфініл, алкілсульфоніл, сульфамоїл, NОА у собак. Захисний ефект цих сполук, зокрема алкілсульфамоїл, Ν,Ν-діалкілсульфамоїл, був особливо очевидний у зниженні розвитку алкілсульфонамідо і алкілсульфон-N-алкіламідо; уражень хряща. Даний феномен пов'язували не третій з радикалів R1, R2, R3 являє собою Н, тільки зі значним інгібуванням продукції як PGE2, алкіл, галогеналкіл, гідроксіалкіл, -СНО, -СООН, так і LTB4, але також і зі зниженням in situ двох галоген, ціано, алкілсульфоніл, сульфамоїл або Bголовних катаболічних факторів, залучених до Y, де деградації хряща, а саме IL-1b і колагенази-1. В являє собою алкілен або алкенілен, Таким чином, даний винахід відноситься до необов'язково заміщений гідрокси або алкокси; застосування анельованих похідних піролу, Y являє собою -СООН, SO3H, ОРО(ОН)2, представлених загальною формулою (І): ОР(ОН)2, -СНО або тетразоліл; або другий і третій радикали з радикалів R1, R2, R3 являють собою, разом з атомом, до якого вони приєднані, насичений або ненасичений циклоалкіл; R4-R11, які можуть бути однаковими або , різними, являють собою водень, алкіл, гідроксіалкіл, алкоксіалкіл, гідрокси, СООН або де X являє собою CR8R9, S, О, NR12 або ацилокси, де сусідні радикали можуть також С(О); являти собою зв'язки або гемінальні радикали, А являє собою CR10R11 або зв'язок між X і разом з атомом С, до якого вони приєднані, атомом, що несе радикали R6 і R7; можуть також являти собою карбоніл або перший з радикалів R1, R2, R3 являє собою циклоалкіл; арил, необов'язково заміщений одним або більше R12 являє собою водень, алкіл або феніл, замісниками, незалежно вибраними з групи, що і до їх оптичних ізомерів, фізіологічно включає в себе галоген, алкіл, галогеналкіл, прийнятних солей і похідних, для лікування або алкокси, арилокси, галогеналкокси, алкілтіо, профілактики дегенерації або деструкції гідрокси, нітро, алкілсульфініл, алкілсульфоніл, суглобового хряща і/або субхондральної кістки. сульфамоїл, N-алкілсульфамоїл, Ν,ΝТермін «алкіл, алкокси і тому подібне» діалкілсульфамоїл, алкілсульфонамідо і включає в себе лінійні або розгалужені алкільні алкілсульфон-N-алкіламідо; або ароматичну або групи, такі як СН3, С2Н5, н-пропіл, СН(СН3 )2, ннеароматичну, моноабо біциклічну, бутил, СН(СН3)-С2Н5, ізобутил, С(СН3)3, н-пентил необов'язково бензоанельовану, гетероциклічну або н-гексил, зокрема, СН3, С2Н5 або СН(СН3)2, що групу з 1, 2 або 3 гетероатомами, незалежно переважно містять, якщо не вказано іншого, від 1 вибраними з Ν, Ο і S, і, необов'язково, заміщену до 8, зокрема, від 1 до 6 і, більш переважно, від 1 одним або більше замісниками, незалежно до 4 атомів вуглецю; як замісники радикала R1вибраними з групи, що включає в себе галоген, 9 81229 10 Алкілтіо означає -S-Алкіл і також відноситься R12 «алкіл, алкокси і тому подібне» переважно до алкілсульфанілу або алкілмеркапто, такого як містять від 1 до 4 атомів вуглецю. SCH3, SC2H5, SCH2-C2H5, SCH(CH3)2, н-бутилтіо, 1Заміщені «алкіл, алкокси і тому подібне» метилпропілтіо, 2-метилпропілтіо, SC(CH3)3. включають в себе, зокрема, Метилтіо є переважним. галогеналкіл, тобто, алкіл, який частково або Алкілсульфініл означає -S(O)-Алкіл і також повністю заміщений фтором, хлором, бромом і/або відноситься до алкілсульфоксо, такого як SO-CH3, йодом, наприклад, CH2F, CHF2, CF3, CH2CI, 2SO-C2H5, н-пропілсульфініл, 1фторетил, 2-хлоретил або 2,2,2-трифторетил; як метилетилсульфініл, н-бутилсульфініл, 1замісник радикала R1-R12 галогеналкіл переважно метилпропілсульфініл, 2-метилпропілсульфініл, означає CHF2 і особливо CF3; 1,1-диметилетилсульфініл. Метилсульфініл є галогеналкокси, тобто алкокси, який частково переважним. або повністю заміщений фтором, хлором, бромом Алкілсульфоніл означає -S(О)2-алкіл і також і/або йодом, наприклад, групи галогеналкокси відноситься до алкілсульфону, такого як SO2-CH3, відповідають згаданим вище групам галогеналкілу; SO2-C2H5, н-пропілсульфоніл, SO2-CH(CH3)2, няк замісник радикала R1-R12 галогеналкокси бутилсульфоніл, 1-метилпропілсульфоніл, 2переважно означає OCHF2 і особливо OCF3; метилпропілсульфоніл, SO2-S(CH3)3. алкоксіалкіл, тобто алкіл, заміщений алкокси, Метилсульфоніл є переважним. наприклад, -СН2-ОСН3 або 2-метоксіетил; Сульфамоїл означає -S(O)2NH2 і також гідроксіалкіл, тобто алкіл, який переважно відноситься до амідосульфонілу або аміду монозаміщений гідрокси, наприклад, сульфонової кислоти. гідроксиметил або 2-гідроксіетил; N-Алкілсульфамоїл означає монозаміщений трифторметилалкіл, тобто алкіл, який сульфамоїл-S(О)2NН-алкіл, наприклад, -S(O)2NHпереважно монозаміщений трифторметилом, CH3. наприклад, групи, описані відносно гідроксіалкілу, Ν,Ν-Діалкілсульфамоїл означає дизаміщений які заміщені трифторметилом замість гідрокси; сульфамоїл-S(О)2N-(алкіл)2, де N-приєднані трифторметоксіалкіл, тобто алкіл, який алкільні групи можуть бути однаковими або переважно монозаміщений трифторметокси, різними, наприклад, -S(O)2N(CH3)2 . наприклад, групи, описані відносно гідроксіалкілу, Алкілсульфонамідо означає -NНS(О)2-алкіл, які заміщені трифторметокси замість гідрокси; такий як NHSO2-CH3, NHSO2-С2Н5, нциклоалкілалкіл, тобто, алкіл, який переважно пропілсульфонамідо, NHSO2-CH(CH3)2, нмонозаміщений циклоалкілом, наприклад, групи, бутилсульфонамідо, 1-метилпропілсульфонамідо, описані відносно гідроксіалкілу, який заміщений 2-метилпропіпсульфонамідо, NHSO2-C(CH3)3. циклопропілом, циклобутилом, циклопентилом або Метилсульфонамідо є переважним. циклогексилом замість гідрокси. Алкілсульфон-N-алкіламідо означає Термін «циклоалкіл» включає в себе моно- або N(алкіл)S(О)2-алкіл, де N- і S-приєднані алкільні біциклічні алкільні групи, такі як циклопропіл, групи можуть бути однаковими або різними, циклобутан, циклопентил, циклогексил і тому наприклад, N(CH3)SO2-CH3. подібне, що переважно містять, якщо не вказано Карбоніл, СНО, -СООН, -SO3H означає >С=О , іншого, від 3 до 9, зокрема, від 3 до 7 і, більш форміл, карбокси, карбоксикарбоніл і сульфо, переважно, від 5 до 6 атомів вуглецю. відповідно. Термін «алкілен» включає в себе лінійні або «Арил» переважно означає нафтил і зокрема розгалужені алкіленові групи, такі як метилен і феніл. етилен, що переважно містять, якщо не вказано Термін «галоген» включає в себе атом фтору, іншого, від 1 до 8, зокрема, від 1 до 6 і, більш хлору, брому або йоду. Звичайно переважними є переважно, від 1 до 4 атомів вуглецю. Якщо фтор і хлор, і у деяких випадках також бром. алкілен заміщений гідроксилом або алкокси, то «Гетероциклічні залишки» включають в себе, переважно, якщо він є монозаміщеним. зокрема 5- або 6-членні гетероциклічні залишки, Термін «алкенілен» включає в себе лінійні або які можуть бути ароматичними або розгалужені, моно- або поліненасичені алкіленові неароматичними, моно- або біциклічними і/або групи, такі як етенілен, що переважно містять, бензоанельованими. Прикладами є азотвмісні якщо не вказано іншого, від 2 до 8, зокрема, від 2 гетероциклічні залишки, такі як піроліл, імідазоліл, до 6 і, більш переважно, від 2 до 4 атомів вуглецю. піразоліл, піридазиніл, піразиніл, індоліл, хінолініл, Якщо алкенілен заміщений гідроксилом або особливо піридил, піримідил та ізохінолініл. алкокси, то переважно, якщо він є монозаміщеним. Ароматичні залишки також включають в себе Ацилокси означає -OCOR, де R являє собою гетероциклічні залишки, які містять атом кисню алкіл або арил. Переважними прикладами є або сірки, такі як тієніл, бензотієніл, фураніл і ацетилокси і бензоїлокси. особливо бензофураніл. Вони також включають в -СООАлкіл означає алкоксикарбоніл, такий як себе гетероциклічні залишки, що містять 2 або СО-ОСН3, СО-ОС2Н5, СО-ОСН2-С2Н5, СОбільше різних гетероатомів, такі як тіазоліл, ОСН(СН3)2, н-бутоксикарбоніл, СО-ОСН(СН3)ізотіазоліл, тіадіазоліл, ізоксазоліл і оксазоліл. С2Н5, СО-ОСН2-СН(СН3)2, СО-ОС(СН3)3, зокрема, Тієніл, піридил і тіазоліл є переважними СО-ОСН3, СО-ОС2Н5, СО-ОСН(СН3)2 або СОароматичними гетероциклічними залишками. ОСН2-СН(СН3)2. Неароматичнї залишки включають в себе -СООАлкФеніл означає алкоксикарбонільну азотвмісні гетероциклічні залишки, такі як групу, яка заміщена на алкільній групі фенілом, піролідиніл, піперидиніл і піперазиніл. Вони також таку як бензилоксикарбоніл. 11 81229 12 Особливо переважними є 6,7-дигідро-5Нвключають в себе гетероциклічні залишки, які піролізини, де R4-R9 являють собою водень або містять 2 або більше різних гетероатомів, такі як принаймні один або два радикали R4-R9, морфолініл. наприклад, R6 і/або R7 являють собою алкіл, Заміщені залишки, зокрема, алкіл, циклоалкіл, зокрема метил. арил і гетероарил є переважно моно-, ди- або Відповідно до важливого аспекту даного тризаміщеними. винаходу, найбільш ефективними є сполуки [a]-Анельовані сполуки можуть бути 6- або, формули (І), де перший і другий радикал з особливо, 5-членними, гетероциклічними або, радикалів R1, R2, R3, переважно R1 і R2, особливо, аліциклічними сполуками, якщо незалежно являють собою систему, багату Паліциклічними, то ненасиченими або, особливо, електронами, вибрану з арильних і ароматичних насиченими, і/або заміщеними або незаміщеними. гетероциклічних залишків, зокрема, фенілу, [a]-Анельовані похідні піролу формули (І) необов'язково заміщених одним або більше ніж включають в себе, зокрема похідні, де X являє одним замісником, які, зокрема, незалежно собою CR8R9, і А являє собою зв'язок між X і вибрані з групи, що включає в себе галоген, алкіл і атомом, що несе радикали R6 і R7 (піролізини); X галогеналкіл, зокрема, CF3, R1 переважно являє являє собою CR8R9, і А являє собою CR10R11 собою незаміщений феніл, і R2 переважно являє (індолізини); X являє собою NR12, і А являє собою собою 4-заміщений феніл. зв'язок між X і атомом, що несе радикали R6 і R7 Відповідно ще до одного важливого аспекту (піроло[1,2-а]імідазоли); X являє собою S, і А даного винаходу, особливо ефективними є являє собою зв'язок між X і атомом, що несе сполуки формули (І), де третій радикал з радикалів радикали R6 і R7 (піроло[2,1-b]тіазоли); X являє R1, R2, R3, переважно R3, являє собою кислотний собою S, і А являє собою CR10R11 (піроло[2,1залишок, такий як СООН, або B-Y, де Υ являє b]1,3-тіазини); X являє собою О, і А являє собою собою СООН, і В переважно являє собою алкілен, CR10R11 (піроло[2,1-b]1,3-оксазини); X являє або являє собою попередник кислотної групи, собою О, і А являє собою зв'язок між X і атомом, такий як Β-Υ, де Υ являє собою тетразоліл. що несе радикали R6 і R7 (піроло[2,1-b]оксазоли), Особливо переважним є застосування сполуки не вказані залишки мають значення, які [6-(4-хлорфеніл)-2,2-диметил-7-феніл-2,3-дигідровизначаються вище. 1Н-піролізин-5-іл]оцтової кислоти (ML3000), Якщо [a]-анельоване похідне є 5-членним представленої формулою (Іа): ненасиченим залишком, то головним чином R4 і R6 являють собою зв'язок, так, наприклад, як у піролізині, піроло[2,1-b]імідазолі і піроло[2,1b]тіазолі. Якщо [a]-анельована сполука є 6членним ненасиченим залишком, то головним чином R4 і R6, так, наприклад, як у піроло[2,1-b]1,3-тіазині, піроло[2,1-b]-1,3-оксазині або 5,6дигідроіндолізині, і, необов'язково, також R8 і R10, так, наприклад, як в індолізині, являють собою зв'язок. її фізіологічно прийнятних солей і похідних, Не обмежуючись конкретним [a]-анельованим наприклад, складних ефірів, що фізіологічно похідним за конкретним втіленням даного гідролізуються. винаходу, R4-R7, які можуть бути однаковими або Фізіологічно прийнятні солі включають в себе різними, являють собою водень або алкіл. солі додавання кислот або основ. Відповідно ще до одного з конкретних втілень Солями додавання кислот є, наприклад, солі даного винаходу, принаймні один з радикалів R4, сполук формули (І) з неорганічними кислотами, R5, R6 і R7 являє собою гідроксіалкіл, зокрема, такими як хлористоводнева кислота, сірчана гідроксиметил і радикали, що залишилися з числа кислота, азотна кислота або фосфорна кислота, R4, R5, R6 і R7 незалежно являють собою Η або або з органічними кислотами, зокрема алкіл. Відповідно до даного втілення, переважно, карбоновими кислотами, наприклад, оцтовою щоб R4 являв собою гідроксіалкіл, зокрема кислотою, винною кислотою, молочною кислотою, гідроксиметил, і R5 являв би собою Η або алкіл, a лимонною кислотою, яблучною кислотою, R6, R7 незалежно являли б собою Η або алкіл. мигдалевою кислотою, аскорбіновою кислотою, Відповідно ще до одного конкретного втілення малеїновою кислотою, фумаровою кислотою, даного винаходу, один з радикалів R8 і R9 являє глюконовою кислотою або сульфоновою собою Н, алкіл, гідроксіалкіл або алкоксіалкіл, а кислотою, наприклад метансульфоновою інший являє собою гідроксил, алкокси, карбоксил кислотою, фенілсульфоновою кислотою і або ацилокси, або R8 і R9, разом з атомом С, до толуолсульфоновою кислотою і т.п. якого вони приєднані, являють собою карбонільну Солями додавання основи є, наприклад, солі групу. сполук формули (І) з неорганічними основами, Особливо ефективними є 6,7-дигідро-5Нтакими як гідроксид натрію або калію, або з піролізини, тобто сполуки формули (І), де X являє органічними основами, такими як моно-, ди- або собою CR8R9, А являє собою зв'язок між X і триетаноламін і т.п. атомом, що несе радикали R6 і R7, і R4, R5, R6, Фізіологічно прийнятні похідні включають в R7, R8, R9, які можуть бути однаковими або себе, зокрема проліки сполук формули (І), які різними, мають значення, приведені вище, і перетворюються in vivo у сполуки формули (І) або переважно являють собою водень або алкіл. 13 81229 14 дегенерації або деструкції суглобового хряща і/або в їх активні форми (метаболіти). Прикладами є субхондральної кістки однієї або більше сполук складні ефіри, що гідролізуються, сполук формули формули (І). (І), де третій радикал з радикалів R1, R2, R3 являє Вказане лікування або профілактика головним собою кислотний залишок, наприклад, його чином включає в себе поліпшення, зменшення, алкільний (третій радикал з радикалів R1, R2, R3, посилення ефекту лікування, реверсію або що включає в себе функціональну групу профілактику будь-якої дегенерації або деструкції, СООалкіл), аралкільний (третій радикал з наприклад, травми, ушкодження або ураження радикалів R1, R2, R3, що включає в себе суглобового хряща і/або субхондральної кістки, функціональну групу СООалкарил, наприклад, особливо на вказаних ранніх стадіях вказаної СООалкфеніл), півалоїлоксиметильний, дегенерації або деструкції. Вираз «лікування або ацетоксиметильний, фталідильний, інданільний і профілактика», що використовується тут, який метоксиметиловий складний ефір. відноситься до введення хондропротективних Відповідно до особливого аспекту, даний сполук відповідно до даного винаходу відноситься винахід відноситься до застосування як до терапевтичної мети вказаного введення, так і хондропротективних агентів, які вибрані з числа до терапевтичних результатів, що по суті сполук формули (І). досягаються вказаним введенням. Як Зрозуміло, що термін «хондропротективний розглядається вище, обсяг терапії, здійснюваний агент», який використовується тут, відноситься до введенням вказаної сполуки, може знаходитися в тих сполук, чия основна дія направлена на хрящ. області від поліпшення стану до значного Також треба взяти до уваги, що такі поліпшення перебігу захворювання, і потім до хондропротективні агенти можуть також володіти активного лікування захворювання, включаючи протизапальною дією відносно синовіальної реверсію патологічного процесу. Найвищий оболонки, можуть позитивно впливати на ступінь терапевтичної ефективності дає біосинетез клітин у субхондральній кістці та в профілактика будь-якого ушкодження або інших сполучних тканинах, таких як синовіальні ураження суглобового хряща і/або субхондральної фібробласти, і можуть опосередковувати міграцію кістки на ранніх стадіях дегенерації вказаного клітин запалення, для того щоб перешкоджати суглобового хряща і/або субхондральної кістки. запальному процесу. Під виразом «ранні стадії дегенерації у Даний винахід відновиться до способів суглобовому хрящі і/або субхондральній кістці» лікування і до ефективних у цьому відношенні розуміють самий початок патологічних змін, що фармацевтичних композицій, також внаслідок визначаються, у суглобовому хрящі і/або цього відповідним чином упакованих, які субхондральній кістці, які є результатом застосовні для ссавців, що мають або можуть мати патологічного процесу. у майбутньому, ушкодження або ураження Хрящ являє собою волокнисту сполучну суглобового хряща і/або субхондральної кістки в тканину, яка існує у декількох формах, наприклад, одному або декількох суглобах даного ссавця. гіаліновий хрящ, еластичний хрящ і волокнистий Використання сполук формули (І) має певні хрящ. Ця сполучна тканина складається з води, переваги у порівнянні з NSAID, особливо у колагену і протеогліканів, які разом утворюють порівнянні з широко відомими для застосування, унікальний гідратований гель, зміцнений які можуть насправді загострювати прогрес волокнами, який є нееластичним, але пружним, і остеоартриту, особливо тоді, коли призначене який володіє важливою амортизаційною здатністю. тривале застосування. Дивно, що сполуки Суглобовий хрящ являє собою хрящ, що формули (І) ефективні при лікуванні або знаходиться у суглобах ссавців. Він складається з профілактиці таких ушкоджень суглобового хряща, живих клітин (хондроцитів), які синтезують (і при цьому не здійснюючи побічної дії на процес оточені нею) інтерстиціальну речовину, яку запалення у такому суглобі ссавця. звичайно називають позаклітинним матриксом. Здатність сполук формули (І) інвертувати Хондроцити, що продукують позаклітинний процес захворювання, яке зрештою приводить до матрикс у хрящі, є високоактивними, і цілісність деструкції та ураження суглобового хряща і/або такого матриксу підтримується рівновагою між субхондральної кістки, має важливе значення з точки зору безпеки і ефективності лікування дією катаболічних цитокінів IL-1a, b і TNFa та ссавців, особливо тих, у яких процес дегенерації анаболічних цитокінів IGF і TGFb. IL-1a, b і TNFa або деструкції суглобового хряща і/або індукують продукцію специфічних металопротеаз, субхондральної кістки знаходиться на ранніх що деградують матрикс, тоді як IGF і ΤGFb діють стадіях. як фактори росту, індукуючи продукцію Тут під терміном «ссавець(ссавці)» розуміють макромолекулярних будівельних блоків хряща, будь-якого ссавця, переважно людину, кішку, колагену і протеогліканів. Інші цитокіни та їх собаку або коня і велику різноманітність їх різних інгібітори, а також тканинні інгібітори порід. металопротеази (ΤIMΡ) також впливають на цю Відповідно до даного винаходу, лікування або рівновагу, яка називається гомеостазом матриксу. профілактика дегенерації або деструкції Термін «металопротеаза», що суглобового хряща і/або субхондральної кістки в використовується тут, відноситься до одному або декількох суглобах ссавців, за металопротеаз матриксу (ММР), особливо необхідності такого лікування, полягає у введенні включаючи ті металопротеази даного вказаному ссавцеві терапевтично ефективної ферментативного сімейства, концентрація яких кількості для лікування або профілактики вказаної звичайно збільшується у процесі дегенерації 15 81229 16 хондроцитів, які потім утворюють кластери. Також суглобового Хряща, тобто, стромелізини, відбувається зниження числа колагенази і желатинази. Колагеназа звичайно глікозаміногліканових компонентів хряща і відповідає за деградацію природного колагену; неоднорідне зменшення протеогліканів. У багатьох стромелізин звичайно відповідає за дегенерацію ділянках волокнистий хрящ, що характеризується протеогліканів; і желатиназа звичайно відповідає позаклітинним матриксом з товстих, компактних за деградацію денатурованого колагену. Фермент паралельних колагенових пучків, замінюється на агреканаза з властивостями ММР також гіаліновий хрящ. Однак необхідно зазначити, що ці відноситься до цього класу, оскільки вона та описані вище патологічні зміни у суглобовому відповідає за протеоліз агрегатів протеогліканів хрящі характерні для більш пізніх стадій хряща, які присутні на ранніх стадіях дегенерації остеоартриту, і що спочатку виникає гіпертрофія, хряща. Трьома колагеназами, що присутні у тобто потовщення суглобового хряща, як показано суглобовому хрящі на ранніх стадіях дегенерації, є на моделі з розтином хрестоподібної зв'язки колагеназа-1 (ММР-1), колагеназа-2 (ММР-8) і ссавця, головним чином на моделі колінного колагеназа-3 (ММР-13). З трьох стромелізинів, суглоба собак. Потовщення хряща відбувається стромелізину-1 (ММР-3), стромелізину-2 (ММР-10) внаслідок збільшення водного компонента, і стромелізину-3 (ММР-11), у суглобовому хрящі на посилення синтезу протеогліканів і збільшення як ранніх стадіях його дегенерації присутній тільки вмісту, так і концентрації протеогліканів у стромелізин-1. суглобовому хрящі. Дана стадія гіпертрофічного Оскільки остеоартрит визначений тут як відновлення суглобового хряща може тривати ушкодження істинних суглобів (рухоме, деякий час, але відновлена хрящова тканина синовіальне зчленування), отже, у таких суглобах позбавлена пружності і стійкості до механічного завжди знаходиться принаймні дві поверхні кістки, стресу, що є у нормальному гіаліновому хрящі. які можуть стикатися, але які фактично оточені Зрештою, продукція протеогліканів слабшає, і синовіальною мембраною, яка секретує хондроцити не можуть більше підтримувати свій синовіальну рідину, прозору лужну в'язку рідину, позаклітинний матрикс. Ця заключна стадія що наповнює суглобову порожнину, і суглобовий приводить до глибокого ураження суглобового хрящ, який вставлений між поверхнями хряща. зчленованих кісток, звичайно замість синовіальної Ранні стадії патологічних змін, що приводять мембрани на цьому місці. до ушкодження і ураження хряща, включають в Найбільш ранні макроскопічні дані про себе спробу відновлення за допомогою патологію пов'язані з розм'якшенням суглобового збільшення синтезу макромолекул матриксу. хряща у ділянках суглобової поверхні, що Однак склад відновленого хряща має дефекти звичайно перевантажуються, які, у випадку внаслідок зміни композиції і розподілу колінного суглоба ссавця, особливо на моделях глікозаміногліканового компонента і зміни його остеоартриту, що включають розтин здатності до агрегації з гіалуроновою кислотою. хрестоподібної зв'язки у колінному суглобі, Частинки, що вивільняються у процесі складаються зі стегнових виростків і патологічних змін, також можуть викликати великогомілкового плато. З розвитком запальні зміни синовіальної мембрани. Однак, остеоартриту цілісність хрящової поверхні незважаючи на існуючу патологію, початкові стадії ушкоджується, і суглобовий хрящ тоншає з появою ушкодження і ураження хряща можуть протікати вертикальних розщеплень, що поширюються на без симптомів, з відносно слабким болем. Отже, всю товщину хряща, у процесі, який називається існуючою метою є ідентифікація тих компонентів фібриляцією. Рух суглоба може викликати позаклітинного матриксу і цитокінів, вимірювані фібриляцію хряща до відщеплення сегментів, зміни яких можуть бути ідентифіковані, профіль залишаючи без захисту нижню частину кістки яких у ссавця на ранніх стадіях ушкодження і (субхондральної), яка потім склерозується. Також втрати хряща до виникнення фокального розвиваються субхондральні кісти, які можуть бути ураження хряща може бути ідентифікований наповнені синовіальною рідиною. На межах радіографічно. Досягнення цієї мети дасть суглоба утворюються остеофіти (кісткові шпори). можливість діагностичної класифікації ссавців, які Також у патології дегенерації і деструкції є кандидатами на раннє фармакологічне хряща грають роль зміни у субхондральній кістці. втручання ще до виникнення значної дегенерації Вивчення суглобів ссавців, головним чином собак, хряща. яких піддавали фронтальному розтину Вказані патологічні зміни у суглобовому хрящі хрестоподібної зв'язки, показали наявність припускають зміни у складі, формі і щільності субхондрального склерозу і остеопенії, тобто, суглобового хряща у порівнянні з тими, які були до ураження кістки у трабекулі субхондральної кістки. початку вказаного патологічного процесу, що Наслідком цих змін є потовщення субхондральної приводять до деградації корисних властивостей пластинки. Ураження субхондральної кістки вказаного суглобового хряща, включаючи силу, збільшує механічне напруження на розташований пружність, еластичність, конформаційну цілісність і вище суглобовий хрящ, що приводить до його стабільність, життєздатність і здатність успішно дегенерації. Подальше потовщення протистояти різним типам механічного стресу, субхондральної пластинки негативно впливає на особливо здатність амортизувати механічні удари. основні механізми відновлення і, таким чином, Ці патологічні зміни у композиції головним чином сприяє прогресії руйнування хряща. включають в себе зміни у типі і кількості Руйнування позаклітинного матриксу хряща супроводжується мітотичним діленням 17 81229 18 також з інгібіторами інших медіаторів запалення. глікозаміногліканів і колагенових волокон у Додаткові класи таких інгібіторів і їх приклади суглобовому хрящі. включають в себе, наприклад, антагоністи Н1Патологічні зміни у субхондральній кістці рецептора; антагоністи рецептора кінін-В1 і В2; включають в себе склероз, збільшення щільності інгібітори простагландинів, такі як антагоністи поряд зі зниженням пружності та еластичності, і рецепторів PGD, PGF PGI2 і PGE; інгібітори зменшення здатності до успішного опору тромбоксану А2 (ТХА2); антагоністи рецептора механічному стресу різних типів, особливо PAF; золота у вигляді аурумтіогрупи разом з здатності амортизувати механічні удари. Дані різними гідрофільними групами; імуносупресивні патологічні зміни головним чином включають в агенти, наприклад, циклоспорин, азатіоприн і себе некоректне відновлення мікротріщин метотриксат; протизапальні глюкокортикоїди, трабекул з потовщенням трабекул і патогенні наприклад, дексаметазон; протипаразитні зміни у продукції метаболітів остеобластів і препарати з широким спектром дії, наприклад, диференційованого фенотипу. авермектини та мілбеміцини; пеніциламін; Синовіт, тобто запалення синовіальної гідроксихлорохін; засоби проти подагри, оболонки, синовіальної мембрани може наприклад, колхіцин, інгібітори ксантиноксидази, здійснювати внесок у патологічне ушкодження і наприклад, алопуринол і урикозуричні агенти, ураження хряща. Синовіальне запалення наприклад, пробенецид, сульфінпіразон і характеризується великою інфільтрацією бензбромарон. синовіальної рідини мононуклеарними клітинами, Оскільки ранні стадії дегенерації суглобового гіперплазією клітин синовіальної мембрани і хряща переважають серед геріатричних ссавців, появою лімфоїдних агрегатів. Синовіт здійснює фахівцеві у даній області буде зрозуміло, що значний внесок в ушкодження хряща при сполуки формули (І) можуть також вводитися у ревматоїдному артриті та інших запальних поєднанні з терапевтичними агентами, артопатіях. Роль синовіального запалення на призначеними для лікування великої кількості ранніх стадіях ОА недостатньо зрозуміла, однак захворювань, синдромів і симптомів, якими синовіт присутній на клінічній стадії ОА. страждають ссавці у старості. Такі терапевтичні Відповідно до першого аспекту даного агенти і стани, при яких вони можуть винаходу, застосування сполук формули (І) використовуватися, включають в себе, наприклад, спрямоване на лікування або профілактику терапевтичні агенти для поліпшення когнітивних дегенерації або деструкції суглобового хряща і/або функцій для поліпшення пам'яті; і антидискінетичні субхондральної кістки, де вказана дегенерація або агенти/агенти для лікування паркінсонізму, деструкція пов'язана з остеоартритом. Зокрема, наприклад, селегелін. Інший великий клас таких вказане застосування безпосередньо спрямоване терапевтичних агентів включає в себе агенти на лікування або профілактику пов'язаних з ним проти гіпертензій та інші серцево-судинні патологічних змін. Таким чином, даний винахід препарати, призначені для лікування гіпертензій, також відноситься до лікування остеоартриту, де ішемії міокарда, включаючи стенокардію, серцеву вказане лікування супроводжується терапевтично недостатність із застійними явищами та інфаркт ефективною дією на суглобовий хрящ і/або міокарда, наприклад, діуретики, вазодилататори, субхондральну кістку. Лікування або профілактика дегенерації або такі як гідралазин, антагоністи b-адренергічних деструкції суглобового хряща і/або субхондральнії рецепторів, такі як пропранолол, інгібітори кістки може також включати в себе введення ще ферменту, що перетворює ангіотензин-II (АСЕоднієї або більше ніж однієї сполуки формули (І), інгібітори), такі як еналаприл, який одного або декількох представників групи, яка використовується для лікування геріатричних складається по суті з полісульфатованих ссавців з мітральною недостатністю, і еналаприл глікозаміногліканів (PSGAG), глюкозаміну, разом з інгібіторами нейтральної пептидази, хондроїтинсульфату (CS), гіалуронової кислоти антагоністи рецептора ангіотензину II, такі як (НА), пентозанполісульфату (PPS), доксицикліну і лозартан, інгібітори реніну, блокатори кальцієвих міноцикліну. каналів, такі як ніфедипін, симпатолітичні агенти, Крім того, сполуки формули (І) відповідно до такі як метилдопа, a 2-адренергічний агоніст, такий винаходу також можуть бути комбіновані з іншими як клонідин, антагоністи a-адренергічного терапевтично активними інгредієнтами, які добре рецептора, такі як празозин, та інгібітори HMGвідомі фахівцеві у даній області і вибір яких, якCoA-редуктази (антигіперхолестеринемічні правило, визначається умовами, при яких агенти), такі як ловастатин або аторвастатин. Ще вводиться терапевтичний агент згідно з один клас таких терапевтичних агентів включає в винаходом. Наприклад, у тому випадку, коли себе протипухлинні агенти, особливо суглоб паралельно тяжко інфікований антимітотичні препарати, включаючи алкалоїди мікроорганізмами, наприклад, бактеріями, барвінку, такі як вінбластин і вінкристин, для грибами, найпростішими, вірусами і тому лікування різних форм раку; терапевтичні агенти подібним, активний інгредієнт відповідно до для лікування ниркової недостатності; препарати винаходу переважно вводиться у поєднанні з проти ожиріння для лікування проблем надмірної одним або декількома антибіотичними, ваги у ссавців; протипаразитарні препарати для протигрибковими, протипротозойними, лікування як ендо-, так і ектопаразитів, якими противірусними або аналогічними терапевтичними звичайно страждають ссавці; і засоби проти агентами. Також активний інгредієнт відповідно до свербіння для лікування різних типів свербіння у винаходу може вводитися у поєднанні з NSAID, а ссавців. 19 81229 20 лікування або профілактики вказаної дегенерації Інші типи препаратів, які можуть або деструкції суглобового хряща і/або використовуватися у поєднанні з протизапальними субхондральної кістки. Наприклад, вони ефективні агентами відповідно до винаходу включають в при системному або місцевому, пероральному або себе засіб, що посилює синтез гормону росту; парентеральному застосуваннях, і з цією метою сильні анальгетики; місцеві і загальні анестетики; і вони об'єднані з ефективними фармацевтичними антагоністи Н2-рецептора та інші ексципієнтами, розріджувачами і ад'ювантами, гастропротективні препарати. Фахівцеві у даній наприклад, органічними і неорганічними інертними області зрозуміло, що деякі з представлених вище носіями, такими як вода, желатин, лактоза, поєднань терапевтичних агентів можуть часто крохмаль, стеарат магнію, тальк, рослинна олія, використовуватися для лікування різних гострих камедь, поліалкіленгліколі і тому подібне. Дані станів у ссавців, наприклад, бактеріальних фармацевтичні препарати можуть інфекцій одночасно присутніх при використовуватися у твердій формі, наприклад, у дегенеративному захворюванні суглоба. Однак вигляді таблеток, капсул і особливо у поєднанні для фахівців у даній області так само, якщо не у або у суміші з кормом, приємним на смак і більшій мірі, представляє інтерес лікування придатним для ссавців; або ж вони можуть хронічних станів ссавців. вводитися у рідкій формі, наприклад, у вигляді Відповідно до режиму, який може розчинів і еліксирів. Фармацевтичні ексципієнти і використовуватися для цієї мети, припускається, ад'юванти, які можуть бути додані, включають в що сполуки формули (І) можуть вводитися у себе консерванти, антиоксиданти, протимікробні поєднанні з іншими лікарськими препаратами, агенти та інші стабілізатори; змочувальні агенти, ефективними при постійному лікуванні хронічних емульгувальні і суспендувальні агенти і сполуки, станів, таких як гіперліпідемія. Також вважають, які запобігають злежуванню; ароматичні і що введення поєднань може допускати велике забарвлювальні домішки; композиції для число різних форм, залишаючись у межах даного поліпшення стисливості або створення винаходу. Наприклад, сполуки формули (І) можна уповільненого, постійного або контрольованого легко комбінувати з одним або декількома іншими вивільнення активного інгредієнта; і різні солі для терапевтичними агентами, які можуть зміни осмотичного тиску фармацевтичного поєднуватися необхідним чином, у зручній препарату або для дії як буфера. Конкретні лікарській формі, такій як пероральна таблетка, лікарські форми, які були успішно використані, що містить всі препарати, які утворюють суміш. включають в себе 5% змішано-міцелярний розчин При формуванні композиції час, що змінюється, ML3000 для внутрішньовенного введення, 3% напіввиведення різних препаратів може бути пасту, приємну на смак, і пероральні таблетки. узгоджений фахівцем у даній області шляхом Терапевтично ефективна кількість сполуки створення форм з контрольованим вивільненням формули (І), як вказано, може вводитися вказаних препаратів з різним часом вивільнення вказаному ссавцеві системно, де вказане таким чином, щоб досягалося відносно однакове системне введення включає в себе [1] ін'єкцію або дозування. Корм, насичений ліками, що інфузію у відповідну тканинуабо порожнину використовується тут як лікарська форма, також організму фармацевтичної композиції, що містить може бути одержаний відповідно до добре відомих вказану сполуку у придатній рідкій формі, такій як правил в області одержання композиції, де водні розчини, емульсії або суспензії, для її використовувані у поєднанні лікарські препарати внутрішньоартеріальної, інтрадермальної або просто знаходяться у суміші в складі корму. У черезшкірної (включаючи підшкірну), або даному винаході також розглядається одночасне інтраспінальної, особливо інтратекальної, і, введення, при якому поєднання препаратів найчастіше, внутрішньом'язової або досягається одночасним введенням препаратів, внутрішньовенної доставки; або для використання які повинні вводитися у поєднанні. Таке одночасне як депо для її доставки; [2] введення у відповідну введення може досягатися навіть за допомогою тканину або порожнину організму фармацевтичної введення різних лікарських форм і різними композиції, що містить вказану сполуку у придатній шляхами введення. У даному винаході, крім того, твердій формі, наприклад, містить зв'язувальну розглядається застосування таких поєднань речовину біосумісних і біорозкладаних речовин, в відповідно до різних, але постійних і тривалих якій дисперговані частинки твердої графіків прийому препарату, внаслідок чого у хондропротективної сполуки формули (І) або в які, ссавців, які одержують препарат, підтримуються можливо, включені глобули або окремі клітини бажані рівні препарату, що вводиться, у плазмі, рідкої хондропротективної сполуки формули (І), навіть якщо препарати, які утворюють поєднання, для використання її як твердого імплантанта для не вводяться вказаному ссавцеві одночасно. Всі уповільненого, постійного і/або контрольованого такі поєднання можуть бути прийнятні у даній вивільнення; або [3] введення або надходження з області для розробки і введення. Коли сполуки їжею фармацевтичної композиції, що містить формули (І) використовуються як активні вказану сполуку у придатній твердій або рідкій інгредієнти у способах і композиціях відповідно до формі для черезшкірної доставки, наприклад, винаходу, вони можуть вводитися у стандартних черезшкірний пластир або субепідермальний фармацевтичних формах. Таким чином, даний (субкутикулярний) імплантат, для пероральної винахід також відноситься до фармацевтичних доставки. композицій, що містять фармацевтично Значна кількість описаних тут лікарських форм прийнятний носій і кількість сполуки формули (І), може бути одержана таким чином, щоб вказаної вище, терапевтично ефективну для 21 81229 22 ін'єкції, інфузії, імплантуватися, депонуватися, забезпечити уповільнене, постійне і/або вставлятися або вводитися краплинним шляхом контрольоване вивільнення активного інгредієнта хондропротективна сполука формули (І). Таке з вказаної лікарської форми. введення може включати в себе, але ними не Ефективною лікарською формою ML3000 для обмежуватися, внутрішньосуглобове, контрольованого вивільнення відповідно до інтрахондральне, внутрішньореберне, винаходу є форма, при якій рівень ML3000 у внутрішньозв'язкове, інтрамедулярне, плазмі підтримується вище 100нг/мл майже внутрішньом'язове, внутрішньокісткове, протягом доби після одиничного прийому дози внутрішньотазове, інтраспінальне, 5мг/кг. Переважними пероральними лікарськими інтрастернальне, інтрасиновіальне, формами ML3000 для контрольованого внутрішньопередплеснове, інтратекальне або вивільнення відповідно до винаходу є форми, при внутрішньовенне введення. яких концентрація ML3000 у плазмі підтримується Фармацевтичні композиції у рідкій формі, що вище 100нг/мл у період, більший, ніж період, при містять хондропротективну сполуку формули (І), якому підтримується порівнянний рівень ML3000 у мають переваги ін'єкційного введення рідини у плазмі після прийому лікарської форми з негайним ділянку суглоба або у ділянку, що знаходиться вивільненням, коли вказана лікарська форма з поряд. При введенні сполуки формули (І) негайним вивільненням вводиться у тій же дозі. безпосередньо у суглоб можна досягти високої Лікарська форма з негайним вивільненням концентрації вказаної сполуки за короткий період ML3000, що містить дози 2,5 і 5мг/кг, підтримує часу, таким чином не тільки поліпшуючи доступ концентрацію ML3000 у плазмі вище 100 і вказаної сполуки до тканин суглоба і, отже, 200нг/мл протягом 8 годин, відповідно. поліпшуючи терапевтичну активність сполуки Переважними пероральними лікарськими формули (І), але в той же час зводячи до мінімуму формами для системного введення є тверді несприятливі побічні реакції, які в іншому випадку форми, наприклад, пероральні композиції з можуть виникнути. Результатом є висока місцева приємним смаком, такі як галети, що швидко концентрація сполуки формули (І) і відповідно розчиняються, таблетки, капсули, таблетки у низька системна концентрація. формі капсули і тому подібне з приємним смаком, і Матеріал для ін'єкцій також може бути рідини, наприклад, розчини, суспензії, емульсії і одержаний з фармацевтичних композицій, що тому подібне. Можуть використовуватися містять хондропротективну сполуку формули (І), спеціальні типи фармацевтичних композицій, де фармацевтична композиція складена у вигляді придатні для перорального введення ссавцям, і композиції для уповільненого, контрольованого вони включать в себе, але ними не обмежуються, або постійного вивільнення. Дані суміші вказаної такі типи як пероральна паста, яку наносять на композиції можуть бути твердими, напівтвердими, задню частину язика ссавцеві, що піддається гелями або іншими твердо/рідкими поєднаннями, в лікуванню, гранулярна форма, яка доставляється яких для тривалого вивільнення сполуки формули шляхом включення в їжу ссавця, і жувальна (І) з визначеною швидкістю або швидкостями, що форма, в якій активний інгредієнт поглинається змінюються, якщо бажано, використовується разом зі смачною жуйкою, або жувальна форма, матрикс, який руйнується, або серія покриттів. Для яка може доставляти активний інгредієнт шляхом опису даних сумішей використовуються терміни поглинання з жуйки, що не з'їдається, у процесі «тривале вивільнення» і «дія протягом тривалого жування ссавцем, який піддається лікуванню. часу». Всі ці різні поєднання біорозкладаних Вказана терапевтично ефективна кількість полімерів, наприклад, різних целюлозних сполуки формули (І), як зазначено, може також полімерів і природних матеріалів, наприклад, вводитися вказаному ссавцеві місцево, де вказане кукурудзяний крохмаль і стеарат магнію, місцеве введення включає в себе [1] ін'єкцію або використовуються для одержання повільного і/або інфузію у локальну ділянку дегенерації або рівномірного розподілу сполуки формули (І), що деструкції суглобового хряща і/або міститься у матриксі. Ці фармацевтичні композиції субхондральної кістки фармацевтичної композиції, можуть вводитися шляхом ін'єкції у відповідну що містить вказану сполуку формули (І) у ділянку суглоба, являючись, відповідно, рідкими відповідній рідкій формі для її доставки, або суспендованими, або можуть бути доставлені включаючи компоненти, які забезпечують іншим способом, якщо за своєю природою є більш уповільнене, контрольоване і/або постійне твердими. вивільнення вказаної сполуки на вказаній Терапевтично ефективною кількістю сполуки локальній ділянці; або для застосування як депо формули (І) для лікування або профілактики для її доставки, де вказана композиція забезпечує дегенерації або деструкції суглобового хряща і/або зберігання вказаної сполуки і потім її уповільнене, субхондральної кістки є кількість, що вводиться постійне і/або контрольоване вивільнення; або [2] ссавцеві, за необхідності такого лікування, введення фармацевтичної композиції, що містить виражена у міліграмах на кілограм маси тіла вказану сполуку у відповідній твердій формі, для вказаного ссавця на день: «мг/кг/день». Вираз «на використання як твердого імплантату для її день», що використовується, не повинен бути доставки, вказана композиція необов'язково інтерпретований як обов'язкова вимога щоденного забезпечує уповільнене, постійне і/або введення ссавцеві, за необхідності такого контрольоване вивільнення вказаної сполуки на введення, будь-якої конкретної лікарської форми. вказаній локальній ділянці. Вираз «на день» є лише позначенням найменшого Місцеве введення зосереджене на відповідних відповідного, але довільного проміжку часу, який тканинах суглоба, в які може вводитися шляхом 23 81229 24 суглобового хряща і/або субхондральної кістки, в використовується як частина сумарного відрізка одному або декількох суглобах поліпшить, для вимірювання дози хондропротективної зменшить, вплине ефективний чином, буде сполуки, що вводиться. Доза, тобто терапевтично сприяти реверсії або запобіганню будь-якому ефективна кількість сполуки формули (І) для ушкодженню або ураженню суглобового хряща лікування або профілактики дегенерації або або субхондральної кістки. У переважному втіленні деструкції суглобового хряща і/або вказана упаковка, що складається з пакувального субхондральної кістки звичайно знаходиться у картону і контейнера, як описано вище, відповідає межах приблизно від 0,1мг/кг/день до всім нормативним вимогам, пов'язаним з 20,0мг/кг/день, переважно, приблизно від продажем і застосуванням препаратів для 0,1мг/кг/день до 12,0мг/кг/день, більш переважно, лікування тварин, включаючи, зокрема, вказану приблизно від 0,5мг/кг/день до 10,0мг/кг/день, і, інструкцію і довідковий матеріал. найбільш переважно, приблизно від 0,5мг/кг/день Додатковим об'єктом даного винаходу є до 8,0мг/кг/день. Звичайні лікарські форми і упаковка, описана безпосередньо вище, що кількості у випадку ML3000 включають в себе складається з відповідного описаного контейнера; пероральне введення ML3000 з дозою у межах вкладеної у вказаний контейнер пероральної 2,5-5,0мг/кг/день маси тіла. лікарської форми сполуки формули [1]; і Фахівцеві у даній області необхідно не тільки розпечатаної інструкції, що супроводжує вказаний визначити переважний шлях введення і відповідну контейнер, і довідкового матеріалу, описаного лікарську форму і кількість, але вказаний фахівець вище. також повинен визначити режим введення дози, Також у даному винаході описується спосіб, тобто частоту її введення. У загальному випадку, що включає в себе дві основні стадії: (І) найбільш придатним є вибір між введенням дози визначення стану ссавця, що є кандидатом для один раз на добу (s.i.d.) і введенням дози два рази лікування, у якого вже є або наступить надалі стан на добу (b.i.d.), і між тим, що перший варіант дегенерації або деструкції суглобового хряща і/або забезпечує швидкий і сильний ефект лікування, субхондральної кістки одного або декількох тоді як останній варіант не забезпечує сильного суглобів даного ссавця, таким чином ефекту, але забезпечує тривале лікування. Однак підтверджуючи, що вказаний ссавець потребує у цьому загальному правилі не беруться до уваги такого лікування; і потім (II) лікування або такі важливі змінні як конкретний тип суглобового профілактика вказаного стану шляхом введення хряща або субхондральної кістки, що зазнає вказаному ссавцеві терапевтично ефективної дегенерації або деструкції, використовуваний кількості для лікування або профілактики вказаної конкретний терапевтичний агент і його дегенерації або деструкції суглобового хряща і/або фармакокінетичні властивості, і конкретний субхондральної кістки хондропротективної сполуки пацієнт (ссавець), якому призначають лікування. формули (І). Різні аспекти стадії (II) вже були Для схваленого ринкового продукту велика детально описані вище. Тому зараз більш частина цієї інформації вже є внаслідок клінічних детально будуть розглянуті аспекти стадії (І). досліджень, що проводяться для одержання Оскільки мова йде про діагностику, доцільно такого дозволу. В інших випадках дана інформація встановити стан ссавця, який є кандидатом для може бути легко одержана відповідно до способів і лікування відповідно до даного винаходу, у тому принципів згідно з даним докладним описом у відношенні, чи є у ссавця у даний момент або чи світлі знань у даній області. Одержані результати буде у майбутньому стан дегенерації або також можуть бути скорельовані з даними, деструкції суглобового хряща і/або одержаними з відповідних оцінок дозволеного субхондральної кістки в одному або декількох продукту на основі тих же способів аналізу. суглобах вказаного ссавця. Вираз «у даний Також даний винахід відноситься до упаковки, момент або у майбутньому», який придатної для комерційного використання для використовується тут, припускає, що, відповідно лікування або профілактики дегенерації або до описаних нижче способів винесення цього деструкції суглобового хряща і/або рішення, можна визначити, чи має потребу субхондральної кістки одного або декількох ссавець, який є кандидатом, у лікуванні у даний суглобів у ссавця, за необхідності такого момент або, вельми вірогідно, буде потребувати лікування, що складається з відповідного такого лікування у найближчому майбутньому. пакувального картону і внутрішнього змінного Необхідність лікування у майбутньому може бути контейнера, що знаходиться у ньому; вкладеної у встановлена на основі визначення відомих вказаний контейнер відповідної лікарської форми факторів, які з практики фахівця у даній області сполуки формули (І), описаної вище; та безпосередньо приводять до стану дегенерації розпечатаної інструкції, що супроводжує вказаний або деструкції суглобового хряща і/або пакувальний картон або контейнер,і довідкового субхондральної кістки. Наприклад, фахівець у матеріалу, який може бути закріплений на даній області може визначити за даними клінічного вказаному пакувальному картоні або на вказаному дослідження ссавця, що у нього починається контейнері, вкладений у вказаний пакувальний дисплазія стегна, і може підкріпити дані висновки картон або зображений на невід'ємній частині радіографічним доказом, з якого може бути вказаного пакувального картону або контейнера, визначено, відповідно до загальноприйнятих вказана інструкція або довідковий матеріал способів вимірювання, що у ссавця найближчим починається зі слів, які повідомляють читачеві, що часом почнеться дисплазія стегна. вказаний активний інгредієнт при введенні ссавцеві з дегенерацією або деструкцією 25 81229 26 тромбоцитарного фактора росту (PDGF); норма Статус вказаного ссавця як такого, що вже має або зниження основного фактора росту або у якого ще настане стан дегенерації або фібробластів (b-FGF); збільшення деструкції, і особливо на вказаних ранніх стадіях, а кератинсульфату; збільшення стромелізину; отже, такого, що потребує даного лікування, збільшення співвідношення стромелізину до зокрема, визначають тканинних інгібіторів металопротеаз (ТІМР); (A) за позитивними результатами клінічного збільшення остеокальцину; збільшення лужних артроскопічного обстеження і оцінки суглобів фосфатаз; збільшення відповіді цАМФ на ссавця, який, можливо, потребує лікування. гормональний сигнал; збільшення інгібітору Діагностика дисплазії стегна, що починається або плазміногену урокіназного типу (uPA); збільшення існує, вже обговорювалася. Інші клінічні симптоми і олігомерного білка хрящового матриксу і ознаки можуть включати в себе симптоми і ознаки, збільшення колагенази. одержані при безпосередньому обстеженні суглобів ссавця, який, можливо, потребує IL-1, який зустрічається у вигляді IL-1a та ILлікування; 1b, являє собою катаболічний цитокін, який (B) за проведенням будь-яких інвазивних опосередковує ушкодження і ураження хірургічних процедур на одному або декількох суглобового хряща у суглобах ссавців. Він суглобах ссавця, що у більшості випадків могло б викликає супресію синтезу колагену типу II, що бути достатньою причиною для рішення про знаходиться у суглобовому хрящі, при цьому необхідність такого лікування. Це виходить з того збільшуючи синтез колагену типу І, характерного факту, що інвазивна хірургія суглоба ссавця для фібробластів; індукує продукцію ферментів, неминуче приводить до погіршення здатності залучених до деградації матриксу; і супресує цього суглоба витримувати своє звичайне здатність хондроцитів синтезувати нові навантаженням так само ефективно, як це було до протеоглікани. Число рецепторів IL-1 на поверхні операції. Підвищене механічне навантаження на хондроцитів суглобового хряща на ранніх стадіях суглоб може, з практики фахівця у даній області, дегенерації, які повинні бути зайняті, щоб безпосередньо приводити до ранніх стадій викликати продукцію ферментів катаболізму, дегенерації суглобового хряща і/або складає лише одну четверту від числа, субхондральної кістки. Таке хірургічне втручання у необхідного у нормі (1% проти 4%). IL-1 і його ділянці суглоба також може викликати приплив модулятор IL-1Ra продукуються аутокринним і крові та інших рідин, що містять цитокіни та інші паракринним способом одними і тими ж фактори, які є причинними факторами запалення, синовіальними макрофагами, і у присутності і, таким чином, може дати можливість їх міграції і гранулоцитарно-макрофагального абсорбції на твердих тканинах суглоба, включаючи колонієстимулюючого фактора (GM-CSF) хрящ і/або субхондральну кістку. Фахівцеві у даній продукція IL-1Ra може збільшуватися. Однак між області потрібно брати до уваги, що це також активністю IL-1 і IL-1Ra існує значна диспропорція, може безпосередньо привести до ранніх стадій для припинення ефектів IL-1 потрібно приблизно у дегенерації суглобового хряща і/або 130 разів більше IL-1Ra, що було виміряно на субхондральної кістки; хондроцитах і на експлантатах хряща. Будь-яке (C) за позитивними результатами огляду порушення балансу між IL-1 і IL-1Ra буде одного або декількох суглобів вказаного ссавця, з додатково посилювати дегенерацію суглобового використанням неінвазивних процедур, у тому хряща. числі радіографічної і магнітно-резонансної Отже, відповідним об'єктом є вимірювання томографії (MRI). Останнім методом, у порівнянні рівнів IL-1 і IL-1Ra та їх співвідношення у ссавців з з першим, можна краще оцінити стан м'яких дегенерацією суглобового хряща на ранній стадії, і тканин. MRI є методом поліпозиційної вимірювання тих же показників у неуражених сцинтиграфії організму з високим контрастним ссавців, для того, щоб вимірні зміни можна було розрізненням м'яких тканин. Оскільки за ідентифікувати як профіль у ссавців на ранніх допомогою MRI можна візуалізувати зміни у м'яких стадіях ушкодження і втрати хряща перед тканинах, вона підходить для візуалізації ідентифікацією осередкового ураження хряща зображення при патології на ранніх стадіях радіографічно. Дані результати дають дегенерації суглобового хряща і субхондральної діагностичну класифікацію ссавців, які є кістки; кандидатами для раннього фармакологічного (D) за позитивними результатами біохімічного втручання перед початком значної дегенерації аналізу, що проводиться на рідинах організму або хряща. Більш того можна визначити кількісне суглобовій тканині ссавця, який є кандидатом для співвідношення макрофагів, що секретують IL-1a і лікування, відносно однієї або декількох з IL-1b, присутніх у синовіальній рідині та наступних речовин: збільшення інтерлейкіну-1 синовіальній тканині суглоба на ранніх стадіях бета (IL-1b); збільшення фактора некрозу пухлини дегенерації суглобового хряща, і воно значно альфа (TNFa); збільшення співвідношення IL-1b та вище кількісного співвідношення тих же клітин, білкового антагоніста рецептора IL-1 (IL-1Ra); виділених з синовіальної рідини і синовіальної збільшення експресії рецепторів р55 TNF (p55 тканини нормальних суглобів, тобто суглобів, в TNF-R); збільшення інтерлейкіну-6 (IL-6); яких не протікають ранні стадії дегенерації збільшення фактора інгібування лейкемії (LIF); суглобового хряща. І знову, дані результати норма або зниження інсуліноподібного фактора представляють діагностичну класифікацію ссавців, росту 1 (IGF-1); зниження трансформуючого які є кандидатами для раннього фармакологічного фактора росту бета (TGFb); норма або зниження втручання до початку значної дегенерації хряща. 27 81229 28 порівнянні з контролем може використовуватися Більш того зміни у субхондральній кістці, що як діагностичний набір для ідентифікації ссавців, протікають до макроскопічних змін у суглобовому які є відповідними кандидатами для хрящі, з'являються внаслідок доступу цитокінів, які фармакологічного лікування, перед тим як будьідповідають за ініціацію і підтримку запального яка осередкова втрата хряща стає помітною при процесу, до нижніх шарів хряща через радіографічному аналізі. мікротріщини упоперек кальцифікованої зони. Фактор інгібування лейкемії (LIF) продукується Метаболізм залучених хондроцитів зазнає моноцитами, гранулоцитами, Т-клітинами, несприятливих впливів, і, крім того, хондроцити у фібробластами та іншими клітинами, пов'язаними серединній зоні суглобового хряща продукують зі станом запалення. Синовіоцити і хондроцити велику кількість цитокінів, включаючи цитокіни, які відповідають за ініціацію і підтримку запального синтезують і секретують LIF у присутності IL-1b і процесу. Дані хондроцити, які діють аутокринним TNFa. Таким чином, вимірювання відносного шляхом, таким чином сприяють руйнуванню збільшення рівнів LIF може використовуватися власного позаклітинного матриксу. Збільшення діагностично для вибору ссавців, які є вмісту води у суглобовому хрящі також сприяє кандидатами для фармакологічного лікування на цьому процесу шляхом збільшення дифузії ранніх стадіях ушкодження і втрати суглобового цитокінів запалення по всьому матриксу. Отже, хряща. відповідним об'єктом є вимірювання рівнів різних Дегенерація, ушкодження і втрата суглобового запальних цитокінів, що продукуються хряща у ссавців викликані дисбалансом між хондроцитами, синовіальними клітинами і/або цитокінами, які запускають описані вище субхондральними остеоцитами у ссавців, катаболічні процеси, і тими цитокінами, які особливо собак, у процесі деградації суглобового відповідають за підтримку синтетичних і хряща, і вимірювання тих же показників у проліферативних відповідей хондроцитів у хрящі. неуражених ссавців, для того, щоб вимірні зміни Інсуліноподібний фактор росту (IGF-1), можна було ідентифікувати як профіль у ссавців трансформуючий фактор росту бета (TGFb), на ранніх стадіях ушкодження і втрати хряща одержаний з тромбоцитів фактор росту (PDGF) і перед ідентифікацією осередкової втрати хряща фактор росту фібробластів, наприклад, основний радіографічно. Дані результати дають фактор росту фібробластів (b-FGF) є мітогенними діагностичну класифікацію ссавців, які є факторами відносно хондроцитів і стимулюють кандидатами для раннього фармакологічного синтез матриксу у суглобовому хрящі. втручання до початку значної дегенерації хряща. Інсуліноподібний фактор росту (IGF) існує у Фактор некрозу пухлини альфа (TNFa) володіє вигляді типу І і типу II, і IGF-I є ефективним однією десятою активності IL-1 відносно медіатором синтезу хряща. Більш того він знижує дегенерації суглобового хряща, але його деградацію і стимулює синтез протеогліканів концентрація у синовіальній рідині значно навіть у присутності IL-1b і TNFa. Сироваткові рівні збільшується у колінних суглобах ссавців, IGF-1 підтримуються високоафінними особливо при розтині хрестоподібних зв'язок, у зв'язувальними білками (IGF-BP), і IGF-1 є порівнянні з протилежним не оперованим коліном. найважливішим фактором як у кругообігу речовин Також збільшується експресія рецепторів р55 TNF у кістці, так і в хрящі. Рівні IGF-1 у порівнянні з (TNF-R) на хондроцитах, виділених з суглобового контролем дозволяють дати діагностичну оцінку хряща, присутніх у таких колінних суглобах. Отже, ссавцеві, який є кандидатом для раннього оскільки TNFa грає роль у патологічних змінах, які фармакологічного лікування дегенерації відбуваються на ранніх стадіях ушкодження і суглобового хряща. ураження хряща, таким чином, він є відповідним Трансформуючий фактор росту (TGFb) об'єктом для вимірювання рівнів TNFa і TNF-R у продукується хондроцитами і є потужним суглобах ссавців на ранніх стадіях дегенерації мітогеном у кругообігу речовин як хряща, так і суглобового хряща та ідентичних значень у кістки. Більш того він стимулює синтез матриксу і здорових ссавців, для того, щоб вимірні зміни володіє протизапальною активністю. Він також можна було ідентифікувати як профіль у ссавців інгібує деградацію матриксу, стимулюючи на ранніх стадіях ушкодження і втрати хряща продукцію інгібіторів протеаз і блокуючи перед ідентифікацією осередкової втрати хряща вивільнення колагенази і металопротеази. Також радіографічно. Дані результати дають він стимулює відновлення хряща, активуючи діагностичну класифікацію ссавців, які є продукцію колагену, фібронектину, інгібіторів кандидатами для раннього фармакологічного активаторів плазміногену і тканинних інгібіторів втручання до початку значної дегенерації хряща. металопротеаз (ТlМР) різними клітинами суглоба Інтерлейкін-6 (IL-6) є багатофункціональним ссавців. На ранніх стадіях ушкодження і втрати цитокіном, але грає роль у запаленні, і його суглобового хряща у ссавців рівні TGFb у підвищені рівні, у порівнянні з контрольними, синовіальній рідині є низькими. Отже, рівні TGFb у визначають у суглобах і синовіальній рідині при порівнянні з контролем дозволяють дати ушкодженні. IL-6 також відповідає за підвищення діагностичну оцінку ссавцеві, який є кандидатом експресії TNF-R на хондроцитах і збільшення для раннього фармакологічного лікування продукції протеогліканів хондроцитами, а також дегенерації суглобового хряща. індукції вивільнення глікозаміногліканів. З прогресуванням дегенерації, тобто Вимірювання рівнів IL-6 у суглобах, синовіальній катаболізму суглобового хряща у суглобах ссавців, рідині і хондроцитах суглобів ссавців на ранніх збільшується число метаболітів, які можуть стадіях ушкодження і втрати суглобового хряща у використовуватися як маркери дегенерації хряща, 29 81229 30 Дисбаланс співвідношення стромелізин/TIΜΡ в як на його наявність, так і на його прогресування. суглобовому хрящі та рідинах суглоба ссавців на Наприклад, при дегенерації хряща з участю IL-1a ранніх стадіях дегенерації суглобового хряща та IL-1b або TNFa вивільняються також може використовуватися для ідентифікації глікозаміноглікани (GAGS), які можуть бути таких ссавців. Змінений суглоб, що має вказані виміряні у синовіальній рідині досліджуваного ушкодження, викликає надмірну продукцію ссавця. Більш того рівні GAG змінюються після стромелізину, ферменту, що продукується лікування, так що можна контролювати хід хондроцитами і синовіоцитами під дією IL-1. фармакологічного втручання, використовуючи як Концентрації стромелізину також вище у маркери кругообігу речовин у суглобовому хрящі фібрильованому хрящі у порівнянні з хрящем, що рівні GAG синовіальної рідини. знаходиться вдалині від центра даного Оскільки до процесу деградації суглобового ушкодження. Підвищені рівні стромелізину можуть хряща залучений колаген, а також інші компоненти мати місце тільки у досить короткий проміжок часу, хряща, деякі продукти колагену служать як але у тому випадку, коли ушкодження суглоба маркери деградації хряща у ссавців, особливо при виходить за межі рухової зони суглобового хряща і ушкодженні і втраті суглобового хряща у собак. У досягає субхондральної кістки, велика ймовірність рідинах організму, таких як синовіальна рідина, подальшої дегенерації суглобового хряща, яка плазма або сеча, можуть бути ідентифіковані звичайно передує отвердінню субхондральної специфічні продукти розпаду колагену типу II, кістки. наприклад, неоепітопи з 20-30 амінокислот. Більш того на моделі з розтином Присутності неоепітопів у цих рідинах організму хрестоподібних зв'язок ссавців, що можуть використовуватися як індикатори атаки і використовується для визначення ранніх стадій прогресу ОА. дегенерації суглобового хряща, спостерігається Кератинсульфат є представником GAG, що збільшення числа клітин, залучених до синтезу має епітоп, 5D4, рівень якого у синовіальній рідині стромелізину, IL-1a, IL-1b і трьох онкогенних білків, може використовуватися як маркер ранніх стадій c-MYC, c-FOS і c-JUN. У синовіальній оболонці ушкодження і втрати суглобового хряща. Навпаки, вони головним чином знаходяться у клітинах, що рівні хондроїтинсульфату, іншого представника вистилають синовіальну оболонку, тоді як у хрящі GAG, що експресуються як велика кількість цими клітинами є хондроцити на поверхневих і епітопів, пов'язані з анаболічними процесами у середніх шарах, і клітини у фібрильованих суглобовому хрящі ссавця на ранніх стадіях ділянках верхньої суглобової поверхні великої ушкодження і втрати хряща. Рівні даних епітопів у гомілкової кістки. Крім того, стромелізин і IL-1 синовіальній рідині, особливо 3В3, 7D4 і 846, дифундують у матрикс хряща верхньої суглобової можуть бути визначені за допомогою специфічних поверхні великої гомілкової кістки. Стромелізин, моноклональних антитіл, що їх впізнають. Епітоп який викликає деградацію компонентів сполучної 3В3 експресується на хондроїтинсульфатних тканини, включаючи протеоглікани і колаген типу ланцюгах хряща у процесі відновлення і IX, активно синтезується у синовіальній оболонці перебудови позаклітинного матриксу, і тому його ссавців на ранніх стадіях дегенерації суглобового рівні у синовіальній рідині зворотно корелюють з хряща і є основним протеолітичним ферментом, рівнями згаданого вище 5D4. Експресія 3В3 у залученим до деструкції хряща. У синовіальній новосинтезованих PG у поверхневому і більш рідині таких ссавців можна виявити збільшення глибокому серединному шарі суглобового хряща рівнів мРНК стромелізину, а також збільшення означає, що 3В3 пов'язаний з ранніми змінами у рівнів мРНК колагенази. Збільшення рівнів обох суглобовому хрящі ссавців на ранніх стадіях ізоформ IL-1, але головним чином IL-1b, стимулює дегенерації хряща. Отже, визначення рівнів 3В3 у збільшення синтезу стромелізину шляхом синовіальній рідині досліджуваних ссавців і посилення індукції фібробластами синовіальної порівняння цих рівнів з контрольними значеннями оболонки генної експресії стромелізину і дає можливість створити діагностичний профіль колагенази. У той же час IL-1 не індукує мРНК ссавця, який є кандидатом для раннього тканинних інгібіторів металопротеази (ТІМР), і рівні фармакологічного лікування. даних інгібіторів залишаються незміненими, тоді як Додатковими маркерами анаболічної рівні металопротеази, що визначаються, у активності хряща є пропептиди проколагену типу II синовіальній оболонці значно збільшуються. (РІІР). Тип II є основним колагеном суглобового Металопротеази секретуються хондроцитами хряща і він продукується хондроцитами як у вигляді проферментів, які повинні активуватися проколаген. У процесі утворення колагенових перед початком деградації макромолекул фібрил неколагенові амінопропептиди позаклітинного матриксу. Активація включає в відщеплюються і вивільняються у рідини себе ферментативний каскад, в якому ключову організму, в яких вони можуть бути виміряні як роль грають серинові протеази, включаючи відбиття анаболічної активності у суглобовому систему активатор плазміногену/плазмін. хрящі. Рівні карбокси-PIIP будуть збільшуватися, і Цілісність суглобового хряща у суглобах його рівні в синовіальній рідині корелюють з ссавців залежить від адекватної підтримки, що радіографічним підтвердженням змін у хрящі. одержують від кісткового ложа, яке він покриває, Отже, вимірювання рівнів карбокси-РllР у тобто від структурних властивостей синовіальній рідині і порівняння з контрольними субхондральної кістки, що лежить нижче. Зміна значеннями дають можливість ідентифікувати цього кісткового ложа передує деградаційним ссавця, який є кандидатом для раннього змінам у суглобовому хрящі. Дані зміни включають фармакологічного лікування. 31 81229 32 сироватці, вказують на ранні стадії дегенерації в себе збільшення жорсткості субхондральної суглобового хряща. кістки, що супроводжує втрату амортизувапьної Вираз «рідина організму», що здатності. Ці зміни субхондральної кістки викликані використовується тут, відноситься до всіх неправильним відновленням трабекулярних доступних рідин тіла, які можуть мікротріщин, що з'являються, у свою чергу, використовуватися як клінічний зразок, який може внаслідок надмірного навантаження суглоба. містити досліджувану сполуку у достатній Трабекулярне потовщення субхондральної кістки є концентрації у вказаній рідині, щоб бути у межах частиною змін кістки, які приводять до збільшення виявлення використовуваним приладом або мінеральної щільності і/або об'єму кістки в аналізом. Рідини тіла можуть включати в себе ушкоджених суглобах, що, у свою чергу, викликано цільну кров, сироватку, плазму, сечу, церебральну дефектом клітин кістки в остеобластах, який рідину, синовіальну рідину та інтерстиціальну й приводить до зміни фенотипічних властивостей інші позаклітинні рідини. Отже, описані вище даних остеобластоподібних клітин субхондральної вимірювання звичайно проводять in vitro у зразку, кістки. одержаному від ссавця, який є кандидатом на Дані зміни у щільності субхондральної кістки лікування. не тільки є підтвердженням дисбалансу у Фіг.1: таблиця, в якій перераховані процесах перебудови кістки, але і ключовою макроскопічні оцінки змін хряща виростків ланкою у кінцевому осередковому ураженні стегнової кістки і верхніх суглобових поверхонь хряща. Склероз кістки також відбувається великогомілкової кістки; внаслідок порушеної регуляції цього процесу Фіг.2: таблиця, в якій перераховані гістологічні перебудови кістки. Більш того виникають сайтоцінки синовіальної мембрани; зв'язані відмінності у метаболізмі остеобластів, що Фіг.3: таблиця, в якій перерахований об'єм приводить до продукції різних молекул, які хрящових клітин відносно колагенази-1 (ММР-1) і деградують хрящ. Ці зміни у метаболізмі остеобластів, у свою чергу, приводять до обсяг клітин синовіальної мембрани для IL-1b у відповідних змін метаболізму хондроцитів, собак з остеоартритом; роблячи їх більш чутливими до активності, що Фіг.4: гістологічна оцінка хряща у собак з індукується цитокінами описаних вище типів. Дані остеоартритом, взятого зі стегнового виростка і аномалії остеобластів і відмінний фенотип великогомілкових плато; характеризуються відмінними рівнями продукції Фіг.5: рівні PGE2 у синовіальних рідинах і LTB4 остеокальцину, лужної фосфатази, відповіді цАМФ у культивованих синовіальних експлантатах у на гормональний сигнал, активатора плазміногену собак з остеоартритом. урокіназного типу (uPA) та інсуліноподібного Фіг.6: вивільнення остеокальцину первинними фактора росту 1 (IGF-1). остеобластами собак; Іншим доказом участі активності Фіг.7: активність лужної фосфатази у субхондральної кістки у можливій дегенерації первинних остеобластах собак; суглобового хряща є звуження суглобової щілини, Фіг.8: продукування IGF-1 первинними що може бути виміряне сцинтиграфією кісток. Дані остеобластами собак; зміни в активності субхондральної кістки Фіг.9: активність первинних остеобластів супроводжуються відповідними змінами собак; специфічних метаболітів кісткових клітин, Фіг.10: синтез PGE2 первинними наприклад, остеокальцину. Остеокальцин є вітамін остеобластами собак. К-залежним білком, що зв'язує кальцій, який є З метою подальшої демонстрації способів і найбільш широко представленим неколагеновим композицій відповідно до винаходу у наступних білком у кістці. Підвищені рівні остеокальцину є абзацах представлені конкретні приклади опису маркером кругообігу речовин кістки при різних типових процедур, які можуть бути використані при захворюваннях, включаючи, зокрема ранні стадії проведенні вказаних способів. Однак дані дегенерації суглобового хряща. Рівні приклади приведені лише з метою ілюстрації і не остеокальцину у рідині тіла, головним чином у повинні розглядатися як такі, що яким-небудь синовіальній рідині, безпосередньо пов'язані зі чином обмежують даний винахід, для цієї мети тут змінами у субхондральній кістці, як було виміряно додається формула винаходу. сцинтиграфією. Приклад 1 На додаток до вказаних маркерів активності Дослідження терапевтичної ефективності субхондральної кістки на ранніх стадіях ML3000 при розвитку ушкоджень в дегенерації суглобового хряща у ссавців, як експериментальній моделі остеоартриту (ОА) у маркери ранніх стадій такої дегенерації хряща собак. Зокрема, визначали дію ML3000 на синтез також можуть бути використані метаболіти колагенази-1 (ММР-1) у хрящі та інтерлейкіну-1b активності хряща і синовіальної оболонки. (IL-1b) у синовіальній мембрані, а також на Наприклад, виявлення у сироватці підвищених активність лужної фосфатази, продукцію IGF-1, рівнів хрящового олігомерного білка матриксу вивільнення остеокальцину, активність PEG2 і uPA служить маркером кругообігу речовин у хрящі. у первинних остеобластах або первинними Аналогічно, виявлення високих рівнів гіалуронату у остеобластами. рідинах організму, головним чином у сироватці, Експериментальні групи служить маркером синовіального запалення. В У даному дослідженні використовували обох випадках підвищені рівні цих маркерних двадцять одну дорослу гібридну собаку (вік 2-3 метаболітів у рідині організму, головним чином, у роки) вагою 20-25кг. Хірургічний розтин 33 81229 34 групою ОА, що приймала плацебо (3,57±0,56 і фронтальної хрестоподібної зв'язки (ACL) правого 3,86±0,66, відповідно), і ці відмінності не мали коліна проводили за допомогою нанесення всім статистичної значимості. собакам колотої рани, як описано раніше [5, 6]. До Хряш. У собак ОА, які приймали плацебо, на хірургічного втручання тварин анестезували обох виростках і плато були присутніми внутрішньовенним введенням пентобарбіталу ушкодження середнього ступеню і розміру, однак натрію (25мг/кг) та інтубували. Після операції на плато ушкодження були більш серйозними собак тримали на фермі без прив'язі, де вони (Фіг.1). В обох групах, що приймали ML3000, на вільно тренувалися на великому відгородженому виростках і плато було значне зниження розміру майданчику. ушкоджень. У групі, яка одержувала 2,5мг/кг/день, Собак навздогад розділяли на 3 групи, що розмір ушкоджень на стегнових виростках був обробляються. Група 1 (n=7 собак) складалася з менше 39% (Р