Химерний поліпептид, який має піруват ортофосфатдикіназну активність та підвищує холодостійкість рослини, фрагмент днк, рекомбінантний вектор, спосіб отримання поліпептиду

1. Химерный полипептид, обладающий пируват ортофосфатдикиназной активностью и повышающий холодоустойчивость растения, полученный в результате замены участка от 832-го до 955го аминокислотных остатков в полипептиде пируват ортофосфатдикиназа дикого типа, чувствительного к холоду, характеризующийся следующей аминокислотной последовательностью: 41 і iie 2 4S L u y Vit G'M s Tyr Ly s 250 Va l As 300 305 L ys Gly T hr Ala val As n He Cln Ser Мес Val 31S CM 320 S / y Tii r Si v V« i Z .« * V » ^ r Лг 9 J"' 34 5 35 0 He 35 e, Gl 360 Cy Thr s Me С Pr o 95 43і М 01 и v •i Asp e ,40 425 Ac q Thr l «0 145 V » i 5І У Si &l n v. Cy , s se c 49 0 355 370 Glu va l 5 40 0 Th r Al a li e Ly АГ s 9 46 0 Ph e Leu Al a Gl u Va l Al Gl » u Gl u Th Oln e Th ТГ r Р Al a Hi Al s a S c r 6 !о C l y L eu А ї р T yc V t l C ln L y» O l u M » t 3 « r Al » S ec L eu C l y L« u L eu sa r V« l А ГЧ S« r Cl y Al e Al « 170 175 lie Bi n 50 5 51 0 со о о со CN Gl M« y As p О Asn 41 5 O» A»p Olu tl« Gl u 38 41 0 no Cln Ajn Oly РГО «ТО СІУ Ty Ly r s 39 5 SO Cly Алп Arj A»p M»t, iy« s «r 365 Al a 38 37 39 0 l T hr T ht Al» by» L y» Arj V»l As p u 13І 29 0 330 M Gl Ly u s 27 5 285 ?95 lit H«t pro v.l ser Pro Pro v»l The Thr Al. Ly» Ly» Arv v»l «50 «55 AU v.l Thf Pro Olu Ol n Aro by* V»l Al» U u A»p Le u Uu 7 0 75 «0 &6O 6« 670 675 tftt ? ro Ty r G in А Г9 S e r As p P he O l u G iy He P h« A ro A l« Me t A s p Ph« Thr Ph» ciy Ly. Cly At« Stt Olu Oly A*n Aro. A»p Met* ty» s.r «»0 68» «»0 «iy -fu Pro v.l Thr lit Aro Leu Uu A*p Pro Pro Leu His Glu Ph« !5 7oe UC 105 110 U*U S e r v.l Pro Pro Gly Leu Thr He Ser Thr Clu АІ» Су» Clu Glu ^o^ le u P :e C l u C i y A jp U u C lu Н іл He V« l A s n G lU le u A l» V» l A jp 1JC 120 12* T y r s4 n с іл A »n Oly Ly * st r uu P ro F ro oly u u T r p As p G lu H e ?10 715 720 T h r Я у « e l S e t A le A s p O l u H e Ty r S e r L y i H e O l u A » n U u S t r 7JS 730 ^ii Otu Hi Ain Pro M et L e u Cly Ph e A ro Oly С у* Лгд U u Ol y He Stt Str Oli, G i y Leu Asp Tyr v.l oln by* elu Ket Ser Al. Ser Leu Gly ISO 155 l«0 A»p Pro s.t Lys Pro Leu Leu Leu Ser V*l Aro: Ser ely Al» Al* lie Ху г P f t вК L « J The Ol u M e t G i n V «l A r o A l » П е P h e Ol n A l » A l * 760 165 "0 V *l Str H «t T hr A, n « в C ly V. I T hr V. I U e Pro O lu H e M et V . I :** 170 175 Ser м 7 V« J L y a G i n A1 9 A: < ) Am Cl y A » p L e u A r COC ACC AS T OCC TTA AC T CCS CCS CSA A r > 5 Vi , S e r A r 9 P r o C l u L e u А Г 9 s e r S e r C l y i e u T h r P r o P r o f c r o Ь5 «S 65 i'.S АС А CCT AAT G AT G CA TTA АС А G CC AG ft AAC AAT £20 AS T 7.C0 Г*0 TC T OTT G A> ОСТ AtO CTT C TC AAG Ti A G CC COT ОАЗ ТСЯ S « r S e r L « i S « r » » 1 G l j 3 l y M e t L « u t » u L y « S « r Al a A r « G l u Se c 5 11 !5 585 GTC ATA TTG GGT AAA CAG СТА СТО ОСТ CCA ССЇ OCA ATG AGC AAT GAT Val 21« L«l Gly Lye Gin Leu Leu Ala Prc Pro Ala H«t Ser Aan Aep І9О 5S5 «00 £05 «АТСТССТТ CTGCTATTGC TCATATC7CA АГГТСАСАС4 ТОААОЛАЗС АТС ATG « at H a t і C25 2043 «30 5GT GCA CAA GCC A~C GGA CTC TGT AGA ACT OAA CAT АГО TTT TTC CCT GJ y А.о Ol r O-l y Ib Gl y Le u С у» A* 9 X hr Gl u Hi » K* t P h« fhe Al « 63 5 040 «4 5 «5 '. «91 TCT GAC GAC. ACC АТС AAA GCT GTA AGA AAG ATG АТС ATG JCt, GTC ACT 2 119 Ser A*p Glu Arq lie Lye Ala Val Arg Lya Met lie Met Ala Val Inr 655 640 S6S CCA GAA CAA АСА AAA GCG GCT СТА GAC CTC TTA CTC CCA TAC CAA AOA «70 «75 «85 69 0 Г.ТГ TTC AC T TTT G G T AAA CG A AG A AC T G AA G G C AAC AG C G AC ATG AAA 85 2!8 7 SG T C IA TC A S TT CC T C C T G G O C TC AC T A TT ТС Ь AC T S A A G C A і ьт G AG 2 Ї8 3 СТА G AA C AC ATA G TG AAT O AA CTT АС А G CG G AT АС А G CC ATG AG C AAA L o u G J u t u « H e V a l A a n G l a L e u T h r Al a A a p T h r G l y H a t S o r L y e 715 730 72 S 7.10 3 J .i l GAT (,ЛЛ АТС TAT TCA A=A АТС ЬАА AAA TTA ~CC G AA OTG AAC CCT АТС Aa p G l u l i e Tyr Se r Ar g ~ l « G l u L y» Le u Se r G l u Val Aa n P r o * e t 7JS 740 745 CT 5GT TTC COT OOT TGC CGA TTA OGO ATI TdA TAC CCC GAG СТА АГА L e - з G l y P he Аг ч G l y C ye Ar o L e u G l y l i t ? Se r Ту г P r o G l u Г * в ц Th r 7S0 755 760 2475 120 2 4 27 GAA ATG CAA CTT CG T GCG АТС TTT CAA G CT GCA G TG TCT ATG AAC AAT U5 }'7 5 770 95 22 3* вК АТч . CG C CTT СТА G AC CCT CC A CTT C AT CAG TTT СТА CCC G AA CG T G AT H e А г ? L e u l e a Аї р P r o P r o ї л и Н х в G l u P h e L e u P r o G l u ul y A a p 700 755 710 765 9Є TC C Ti e Tie OG * G O A A AA G O» G C A AA T C TT G C T G AG ATG TC A AG C AT T S a r L e u L e u G l y G l y L y a O l y Al a A a n L e u Al a G l u H « t s a r S e r l i e 10 0 10 5 П0 680 ГСС SAT ГГГ SAO CGC ATT TTC CG A G CA АТС OAT GG* CTT CCT STA АС А ССл OTT CTT AAT CCb OTG TCT CCT. CCG G TG ACG ACG G CT AAA AAG AGO * - i a V e l I A U л а г F r o v a l S e r P r o P r o v * l T h r T h r Al a L y e L y e A r g 70 75 60 12 5 130 O AA TAT C AA C AA AA T S C A AAO ACC С ТА С СЇ C C A SS T TTS WO G AT C AG w i u l yr G i n Cl n A» n G l y L y a Se r L» u P r o P r o G l / Le u Tr p Aa p Ol u Ui 140 1 45 AT T TC A ЗЛ А OO C TT A G AT TA T G TC C AG ЧМ C AS AT» TC T G C A TC T C TC 1 50 155 HO CG T S AC C CG TC T AA A C C T C TC C TC C TT ТС С 9 46b 1447 „ - CT- OCA CAC GTT TOT TTT AGT GCA GAO GAT OCA OAA АСА TGO CAT 15 4 3 ССАТСТССТТ СТССТЮТСС TGXTA1CTCA АТТТСАСАОО TOAAGRASO МО АТС Hat Nat I 1«S 490 GCA CA* ЫЗА AAG AGT GCT АТС IT AG T TCG ТИ TCT ОГГ G AA CO T ATG CTT C TC AAG TC A G CC COT OAG TCO S e r S» : I. 4 K I S e r V . I O U Cl y H a t L e u t e u L y . S « Al . Ar g G i u S e r 5 10 15 «95 TG C7TA AGG ACC CAA АСА ASC CCA GAA 1591 ПАТ a"? GC^ ЬСТ АТО CAT GCA GC« GC- GGS АТС TTA ACC GC" AGA GGP. TOC ТТЛ CCO SCO AG A G TG Л АЗ CAA Г00 CG A AAC G CT G AT CTC CGG CG A C y i L e u P r o Al e A r g V» l L y » G i n A r o A r o Ai n G l y A e p L « u A r j A r o 29 25 3D TTC AAC C AC CAC CC T C AA TCG TCG TTT C TC CCG TC T TTA AC T CCO CCS U u A» n Н и H i » Ac s G i n 5 e r S e r P h e V « l Ar ? C y « L « u T h r P r o Al « )i 40 45 JO 'ІЧ ' і 580 525 5 JO Gt*. АТС АСА TCA CAT OCA GCG GTG GTG GCT CCC GGA ТСЛ Go" AAA 1Ч.Т -» i y Me t 7 ^ Se r Hi s Al e Al a / al Vai Al e Ac g G * y Tr o G l y L ye C y e SJ 5 5 40 5 45 1 S8 J TOT GT TCr* CG^ ТОТ ОСТ GAT ATT CGT «Tu AAC GAT CA* 1 ATI AAG A~T Суш Va. Ser Giy Су» АІЛ Ae p ^1* Arg V e т А а " Аьр АО **et Lye J ' e 5 50 5 55 560 J Tr ACG ATT '^1 GOC CtAC CGT GTG ATT AAA GAA GGt GAC TGC CTT 7CT ''TT 545 S7 0 5Є 0 Ъ -17= ЛАТ GOT АСА AC T GOT GA A OT C AT* TTC TG T AAA CA G С ТА СТ О ОСТ CCA 585 AGA 5TT AGC AGA CCA GAC TTC CGC AOC AGT GCC ТЇА ACT CCC CCG CGA Arg Val s«r Arg Pro Glu LBU Arg Ser Ser Cly Itu Thr Pro Pro Are :5 so «5 1 Є ЗІ OCS GTT CTT AAT СГС GTC TCT CCT CCG GTC ACC ACC SCT AAA AAG AGO >l« Vjl Leu мл Pro V«. Ssr Pro Pro v»l Thr Thr AU Ly« ly» Arg 7» 75 SO OTT ГГС ACT ТТЇ CCT AAA GGA AGA AST GAA GGC AAC AGC GAC ATG AAA У»1 Phe Thr Pho Gly Lj» Gly Arg Ser Glu cly A.n Arg Atp Met Lyt 85 so «5 5Э 0 -С- G TK А ТО HG C АА Т ОІЧ С ТИ С ЛА АТ А ПС AT G TCA TO G GCT OAT CA A 4-і 40 1 8J S TCC TTG TTG OCA OSA AAA OGA CCA ЛАТ СП CCT GAC ATG TCA ASC ATT S«r L«tt L»M Gly Gly Ly» Sly XX» A.» La» »i» BlU Met S»r Sar lie 100 105 110 I.GT ГТА TCA GTT CCT CCT GGC CTC ACT ATT TCA ACT GAA GCA TOT GAC G)y Leu $#z Vet Pro Pro Gly L9J Thr lie 5er Thr Glu Ala Cye Glu I' ЦЯ 125 130 62S ТТЛ АСА ХС «А ААС ААТ 0GT GCA CAA GGC rtTC GOC CTt 1ST АСА АС _ t r u r h t Ai p Ar St5 *A CTC CCA TAC CAA АСА ТСС CAT TTT GAC GGC ЛТТ TTC CGA GCA ATL 6Є0 68S *S5 2 11» 690 GA" GGA CTT CCT GTA ACT АТС CGC CTT ГТА GAC CCT OCA CT"] (.AT GAt» 700 J36 7 705 ~T~ —A CCC CAA TGT GAT СТА OAA CAC ATA GTG AAC GAA CT OCA G'"C 715 ЛТГ TCA GAA WC TTA GAT TAT OTC CAG AAA ОАО ATG TCT GCA TC" CTC 715 ІІІ5 720 v*' АСА OCC АТО AOT GZ3, GAT GAA АТС TAT TCA AArt АТС GAA кл" СТА Aap -hr Gly M»t Ser Ala A»p Olu Jl« Туг S«r Ly» lie Glu А»л Lou 725 730 Ці 22«3 "LT OAA GTG OGT AAC CCT ATG TOC AGA ТТЛ GOD АЛ CTT ОСТ TTC rat 13.1 14 745 TCA TAC CCC »"S GAA АТО CAA GTT 7 68 765 P r o G i n G l u L« u АГ9 79S 2 4 0) 2 501 GAA ТА" AAA GTG GOA ACG АЯ. ATT GAG ATT CCT CGA GCT GCT T^A ATA It a Ty t L ye Val G l y Th r Me t ? l e G l u l i e P r o Ar g Al a Al a Le u X I R 2 SSI •S-T 5AA CAG AT GGA AAA GAA ОСТ GAT TTC TTT ГСО TTT OCA ACC AA'i Zb S4 f>5 "' ' 84C изо * 845 BSO CA- CTC ACC CAG АТС АСА TTT GGG TAC AGC AGA GAT GAT GTT GOC ЛЛ(. Аьр Le u T> *r Gin t*et Thr P he Gly Ту» Sec Arg Л*р А» р Val Gly t.ys 855 S6 0 B«5 Ї6 4 7 TT- —TG 1-Й AT TAT CTT GCT CAA «SC ATT СТО CAC CAT СЛ™ CCA TT* r»n* u*\i TVp L ^e Tyr Le u Al a Rln uly Tie L« u Gin Itx« Asp P ro P h« 9 70 375 eSC J t SS SAC CT" ATT CAC СЛО AAA OGG GTG OGT CAG TTG ATT AAO ATG GCT ACO . - Val l i e Ae p Cl n Ly* Gl y Val Gl y Glr Le u Il« Lye Met Ai d T) г >l > «90 »»5 J 7 43 OA3 AAA GOT CG T GCA OCA AAT CCT AAC T~» AAG GTT (WO ATA ~GT Л! ;>»* Lye O.y АГ7 Al a Al a д ві P ro A» n le u Eye v»l Gl y T i e Су* G l y 900 «OS 910 17»; CAS CAT GOT GG3 GAC CCT TCT TCT OTT GCA TTT TTT CAT OOA ОТ-' ВОЛ S. .1 Ні ь й. у G l y Cl u P ro Se r Se c Val Al e p he P h« Ae p G l y V A I G l y 2 8 35 „ТА GAT TAT ETG TC& TOC TC CCA TTT AGG OTT CCT АТС СКА ACG TTG 2 1 87 935 VZZ ..С-" l~A CAA OTC ATT GTT TAAGfTT Al a Al e A* a Oi l Ve i He VaJ «50 940 OAT CAC GTC GTA SCT CGT СТА CCT GCC .ЧАА AST GCA GCA CCC TTT GCC A»p CiU V«l v«l Ala cl> Leo Ala Cly Lys Ser Gly Ala Arg the Ala SS 200 305 2!C 'AT SAC TCC TAT AGA A-W TTT CTC GAT ATfl TTT GOC AAC CTT GtA ATG Tyr Ajp S*r Tyr Ar? AITS РЬ* Ьо" AeP Met ph« с1У A»n Vai Улі Het 2!5 220 Л5 •3AT CTT CTT CAC AAA T'X AAO AAC CTC TAT CTG GAA GCA AAC CGC GAA Aap Leu Val Clu Lye Tyr «-у* Авя Vfl 1 Tyr Va) Clu Ale I»ye Gly Glu 26S 2«S 270 AAS TTT CCC АСА CAT CCA AAG AAA CAC СТА GAC TTA GCA GTC AAT ОСТ Hi » « In i l « se r Val BOO A-'T COT GGA СТА GCT GCA AAT CTG TTT GCT CAA АТС OGO ОТО ЛСАТТ** .« АГ5 G l y Val А. Й Л 1 * A« n Val phe Al a Gl u м е ч : Cl y V* l Thr Le i } »C5 «10 815 с.-!. ATA TCT АТС CCT GGT АТС ATG GAC ACT GTA TTS AAT CTC GCG СГТ AAT Il« Eer Met Pro Gly net Met A«p Thr Val leu A«n Leu Gly Lei. Ann S8C 185 190 5ft>i AAA OGO ATT CAT CTC GAC ACC CAT sr JA Gl- G U А»Г AriJ Г я Тер Met Leu Gin Сул A-q Thr 4b AA ""A- AAJ. S~O GOA AtC АТО ATT ОАО ATT CCT CGA GCT ОСТ ТГА ATA 12" «00 «0 П9 9 Ч.АА ^0 СТА AT GA" A—" AGA АСА GCA ATT AAG AGG CTT GAG A»T j >, у Lej tl « A»p Thr Ar « Thr Al « II. Г у« Ar g V«l «lu T\ )4D 4 5tC 5?S A_A «LT uC T GAA G~C ATA TT* GGT AAA CAG СТА CTG GCT ГСА 75 1«4 7 -А АЛ ^.л ААС ACT ССТ АТС """G GTA ACC ACC GAA АСА AGC CCA GAA г. а г „l y Lye Se Al a le Le u Val Ar9 TSr Gil. Thr Ser Pro G u 5(Л 510 ..v «sr 2551 830 >- - GAA -A- A-T GGA AAA САА ОСТ G\T TTC ТГТ TCG TTT CGA ACC AAT A a Gl Gl u I e Ol y Ly« Glu Alo Ae p P he P he 5 «r phe Gl y Thr All »j«, 64J 8«* S™ КЗ 415 J- AAA ч" АҐТ GCT AAA GOT &.A GTG AGA AT GCA О~Д CAT ATG GTG - у у » A r c » r С у L y » » у A a \ o l Ar c j H e A l a V a l Ae p H « t V a l < e u Glu 01 у Leu Gin 145 150 165 «5 Gly A l* Va l A rg He A la Va l A sp Me t v a l A m s l u G l y Le u II» A sp 430 Tyr val Gin Lys Slu Met Stc Ala Ser Leu Gly Asp Pro Ser Lys Ala 160 420 GGT GCG GTG AGA ATT CCA GTA GAT ATG GTG AAC GAA GSG СТА ATT CCT TAT GTC CAG AAA GAG АТО ТС" GCA TCT CTC GOT GAC CCG TCT AAA GCT 1SS 410 Asn Arg Leu Trp Met Leu Gin cys Arg Tbr Gly Lys Arg Thr Gly Ly» AAA AAA CTG CCT CCA CGT ТТЛ TGG OAT GAS ATT CTG GAA GGC TTA CAG HO «OS AAC AGA CTT TCG ATG CT6 CAA TGC СОК АСА GOG MA CGT ACT