Спосіб отримання специфічного олігорибонуклеопептиду з активністю фактора переносу до антигенів m. bovis

Реферат: Спосіб отримання специфічного олігорибонуклеопептиду з активністю фактора переносу до антигенів М. bovis включає відбір та підготовку біоматеріалу від тварин-донорів і отримання специфічного олігорибонуклеопептиду. Проводять імунізацію тварин-донорів, бичків віком 12-18 місяців, корпускулярним антигеном з ендотоксином збудника туберкульозу М. bovis. Низькомолекулярний білок отримують із лейкоцитів периферійної крові на 28 добу після першого введення імуногену. UA 118857 U (12) UA 118857 U UA 118857 U 5 10 15 20 25 30 35 40 Корисна модель належить до ветеринарної медицини, а саме до біотехнології та імунології. Найближчим аналогом корисної моделі є [Патент № 71224. МПК А61К 35/00, опубл. 10.07.2012, бюл. № 13. Спосіб отримання низькомолекулярного пептиду специфічного щодо хвороботворних мікобактерій. Бусол В.О., Коваленко Л.В., Тонська Т. Г.], згідно з яким препарат отримують із спленоцитів овець на 30 добу після імунізації тварин-донорів атиповими мікобактеріями. Недоліком відомого аналогу є те, що вихідним матеріалом для отримання препарату є селезінка овець, імунізованих живими мікобактеріями та можливість контамінації отримуваного низькомолекулярного білка з фактором переносу, здатного формувати стан алергії до мікобактерій. Такий спосіб передбачає забій тварин-донорів, що призводить до підвищення собівартості препарату, унеможливлює його біофабричне виробництво та сприяє поширенню мікобактерій, що фільтруються. В основу розроблюваної корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб отримання стерильного специфічного олігорибонуклеопептиду з активністю фактора переносу до антигенів М. bovis з лейкоцитів крові імунізованих бичків та багаторазового використання тварин-донорів лейкоцитів крові. Поставлена задача вирішується тим, що як тварин-донорів використовують бичків віком 1218 місяців, а як імуноген - інактивований корпускулярний антиген з ендотоксином збудника туберкульозу М. bovis. Мікобактеріальний антиген вводять тваринам дворазово з інтервалом 14 3 діб підшкірно в дозі 3 см кожній тварині. На 14 добу після другого введення антигену проводять оцінку стану специфічного імунітету за допомогою внутрішньошкірного тесту з використанням ППД-туберкуліну для ссавців. Тварин, які показали позитивну реакцію на ППД-туберкулін для ссавців використовують як тварин-донорів лейкоцитів крові. Для отримання специфічного олігорибонуклеопептиду від донорів здійснюють забір 3 периферійної крові в стерильну ємкість із антикоагулянтом з яремної вени обсягом 500-800 см від кожного донора. Кров від тварин донорів центрифугують при 1000 об/хв. впродовж 20 хвилин і відділяють плазму від клітин крові. До осаду додають стерильну дистильовану воду у співвідношенні 1:3 для лізису еритроцитів, при цьому лейкоцити залишаються цілісними. Через 30 сек. воду зливають, отриману масу промивають фізрозчином та виділяють лейкоцитарну масу. Отриману лейкоцитарну масу переносять у стерильні поліетиленові пробірки. Для руйнування клітин, їх дезінтегрують за допомогою ультразвуку при частоті З мА протягом 15 с. Отриманий екстракт обережно переміщують у діалізний мішок із проникністю пор 20 кД. Діаліз проводять впродовж 24 год. при t+4 °C при постійному перемішуванні на магнітній мішалці. Стерильність діалізату досягають фільтрацією матеріалу в асептичних умовах через бактерійні фільтри з діаметром пор 0,22 мкм. Отриманий препарат розфасовують у стерильні флакони. З метою контролювання якості препарату визначають його стерильність, безпечність та алергенні властивості. Таким чином, запропонований спосіб дасть змогу використовувати тварин-донорів багаторазово, а також зменшить затрати часу і матеріалів при виготовленні специфічного олігорибонуклеопептиду з активністю фактора переносу до антигенів М. bovis. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 45 Спосіб отримання специфічного олігорибонуклеопептиду з активністю фактора переносу до антигенів М. bovis, що включає відбір та підготовку біоматеріалу від тварин-донорів і отримання специфічного олігорибонуклеопептиду, який відрізняється тим, що проводять імунізацію тварин-донорів, бичків віком 12-18 місяців, корпускулярним антигеном з ендотоксином збудника туберкульозу М. bovis, а низькомолекулярний білок отримують із лейкоцитів периферійної крові на 28 добу після першого введення імуногену. 50 Комп’ютерна верстка В. Мацело Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 1