Спосіб оцінки ризику невиношування вагітності

Спосіб оцінки ризику невиношування вагітності за допомогою імунологічних тестів, який відрізняється тим, що в комплексі визначають вміст лімфоцитотоксичних антитіл, рівень гемолізинів та активність комплементу і в залежності від їх значень оцінюють ризик. (19) (21) u200508330 (22) 26.08.2005 (24) 16.01.2006 (46) 16.01.2006, Бюл. № 1, 2006 р. (72) Козар Валентина Вікторівна (73) ІНСТИТУТ ПРОБЛЕМ ЕНДОКРИННОЇ ПАТОЛОГІЇ ІМ. В.Я. ДАНИЛЕВСЬКОГО АМН УКРАЇНИ 3 12207 4 фоцитів тільки при наявності комплементу, реакція ванням контролю 100% гемолізу еритроцитів або є комплементзалежною. проводили стандартизацію 5% еритроцитів бараСуспензію лімфоцитів виділяли методом флона, яка повинна містити 1млрд. клітин/мл. При петації у середовищі зі щільністю 1,076-1,077 (фіколрерахунку оптичну щільність (ОЩ) 100% гемолізу верографин, декстран-верографин та ін.), що доприймали за умовну 1. Отримували наступне співзволяє одержати життєздатні лімфоцити з виховідношення: дом 95-100%. В пробірку вносили 0,05мл виділе1 ОЩ - фактичне значення ОЩ 100% гемолізу них на градієнті щільності та доведених до (наприклад, 1,6од.) 2 ОЩ - фактичне значення ОЩ випробуваного концентрації 5 106/мл лімфоцитів чоловіка, 0,05мл зразка (наприклад, 1,3од.) сироватки крові вагітної, інкубували 30хв. при Х= 2ОЩ/10Щ, тобто (1,3:1,6) 37°С. Потім додавали 0,05мл комплементу морсьХ=0,8од. кої свинки, витримували 1,5год. при 37°С. По заМетод визначення активності комплементу по кінченні експозиції добавляли барвник (0,1% роз50%-му гемолізу є стандартним уніфікованим мечин еозину та 0,1% розчин трипанового синього). тодом. Постановка реакції проводилася згідно [12] Тривалість фарбування 10-20 хвилин. Облік і оцінбез змін чи доповнень з боку автора. Досліджувану ку результатів реакції проводили, підраховуючи сироватку розводили 1:10 0,85% розчином NaCI і число загиблих (профарбованих) лімфоцитів. Живі розливали в пробірки в кількості від 0,05 до 0,5мл. лімфоцити залишалися безбарвними. Оцінку реПотім об'єм кожної пробірки доводили до 1,5мл зультатів (неживі клітини) проводили не пізніше 3 0,85% розчином NaCI і добавляли по 1,5мл гемсигодин після закінчення реакції: стеми. Пробірки витримували 45хв. при 37°С, охо0-10% - негативна лоджували протягом 10хв. при (+4+8°С), центри11-20% - 1+ (негативна ?) фугували протягом 10хв. при 1500об/хв., 21-40% - 2+ (позитивна) колориметрували в ФЕК (СФ) при 540нм (зелений 41-80%- 3+ (позитивна) світлофільтр). Оцінювали ступінь гемолізу, визна80-100% - 4+ (різко позитивна) [1]. чаючи кількість 50% гемолітичних одиниць комВизначення гемолізінів є також комплемент плементу, які знаходилися в заданому об'ємі сизалежною реакцією. Комплемент обумовлює фікроватки. сацію гемолізінів на еритроцитах і сприяє їхньому Спосіб, що заявляється, апробовано на 4199 гемолізу. Він використовується також для того, вагітних, які проходили обстеження, в зв'язку з щоб виключити вплив антикомплементарних субсобтяжливим акушерським анамнезом, в Харківсьтанцій чи недостатності комплементу в сироватці кій обласній клінічній лікарні з 1996 по 2004pp. При крові досліджуваних вагітних, які можуть дати необстеженні вагітних підвищення вмісту лімфоцитогативний результат. токсичних антитіл відзначалося в 26% випадків, В пробірку вносили 0,025мл сироватки вагітзміна рівня гемолізінів - у 29,6%, активності комної, 0,025мл комплементу морської свинки, 1,5мл плементу - у 26%. 2,5% суспензії еритроцитів барана та 1,5мл 0,85% Контрольну групу складали жінки, співробітнирозчину NaCl. Обов'язково ставили два контроля ки лікарні, які не мали в минулому проблем з виконтроль гемсистеми та контроль 100% гемолізу. ношуванням вагітності (15 осіб), віком до 38 років. Оцінку результатів проводили визначенням на Вагітні були розділені на три групи в залежноФЭК (СФ) оптичної щільності розчину на зеленому сті від значень імунологічних показників. Отримані світлофільтрі при довжині хвилі 500-560нм. Для дані представлені в таблиці. стандартизації показників робили перерахунок отриманих результатів оптичної щільності з урахуТаблиця Імунологічні показники, що характеризують стан вагітних Групи вагітних 1 група 2 група Лімфоцитотоксичні антитіла до 20% 21-30% 3 група від 31% і вище Контроль 7±5% Гемолізіни 0,1-0,8од. 0,1-0,8од. нижче 0,1од. та вище 0,9од. 0,48±0,105од. Як свідчать дані, приведені в таблиці, у вагітних з рівнем лімфоцитотоксичних антитіл до 20% (1 група), гемолізінів від 0,1 до 0,8од., активності комплементу до 100 СН50 вагітність протікала досить сприятливо. Стан вагітних 2 групи можна було характеризувати як середньої тяжкості. У вагітних з рівнем лімфоцитотоксичних антитіл більше 30% (3 група) і зниженням гемолізінів нижче 0,1од. або підвищенням більше 0,9од., на фоні нормаль Компле- Загроза переривання вагітмент ності 82-100 СН50 низька 95-120 СН50 середня до 100 СН50 висока 52±18 СН50 відсутня них чи підвищених показників активності комплементу до 100 СН50 загроза переривання вагітності була найвищою, і клінічно стан оцінювався як важкий та украй важкий. Розроблений спосіб дозволяє дати оцінку тяжкості імунологічних розладів у вагітних у залежності від діапазону значень досліджуваних показників. Показано важливе прогностичне значення не тільки підвищення рівня гемолізінів, але і їхнього знач 5 12207 6 ного зниження (нижче 0,1од.). Саме в групі високогенов антагониста рецептора интерлейкина-1 и го ризику переривання вагітності (3-я група) різке интерлейкина-4 при репродуктивных нарушениях зниження вмісту гемолізінів відзначалося найчас//Иммунол. -2005. -№1 -с.6-9. тіше. Можна припустити, що різке зниження гемо5. Визначення груп крові за системами АВО, лізінів, як і інших природних антитіл, свідчить про резус та іммунних антитіл: Інструкція / Київ, 1999 значне виснаження/пригноблення, а в деяких ви50с. падках, можливо, і параліч, імунної відповіді, зок6. А.Д. Макаричева. Комплексная лабораторрема гуморальної ланки, під впливом антигенів, ная оценка течения беременности -Л.: Медицина, що утворилися в організмі жінки під час вагітності. 1982 -212с. Таким чином, спосіб, що заявляється, дає мо7. D.M. Becker, J.T. Philbrick, J.E. Humphries. Dжливість діагностувати з високою точністю ризик Dimer testing and acute venous thromboembolism невиношування вагітності завдяки комплексному //Arch. Intern Med. -1996. -V.156. -P.939-946. застосуванню та оцінки трьох показників, що відо8. G.R.V. Hughes. The antiphospholipid бражають клітинні та гуморальні механізми поруsyndrome//Lupus. -1996. -V.5.- №5. -P.345-346. шень. 9. Профилактика и лечение невынашивания Література: беременности при лейкоцитарной несовместимос1. В.И. Говалло. Иммунология репродукции. ти. Методические рекомендации /Харьков, УИУВ, М.: Медицина, 1987. -304с. 1975.- 10с. 2. И.А. Газиева, Г.Н. Чистякова. Состояние 10. Патент SU 1246006 AI, Украина. Способ факторов неспецифической резистентности при диагностики угрозы самопроизвольного прерывабеременности, осложненной гестозом различной ния беременности /Л.В. Антипенская, В.В. Щербастепени тяжести //Иммуннол. -2004. -№6. -с.367кова, Л.А. Тагаева, Н.И. Ткачева. -Бюл. №38 от 370. 15.10.87. 3. E.D.Carosella, J. Dausset, N. Rouas- Freiss. 11. Иммунологические методы /Под ред. Г. Immunotolerant functions of HLA-G//Cell Моl. Life Фримеля: Пер. с нем.- М.: Медицина, 1987. -472с. Sci.- 1999. -V.55.-P.327-333. 12. Лабораторные методы исследования в 4. A.B. Шабалдин, М.Л. Филипенко, Е.Н. Вороклинике: Справочник /Под ред. В.В. Меньшикова. нина, А.Н. Глушков, Т.А. Симонова. Полиморфизм М.: Медицина, 1987- 368с. Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601