Спосіб одержання суправітально забарвлених клітин різних типів біологічних тканин

Спосіб одержання суправітально забарвлених клітин різних типів біологічних тканин, що включає забарвлення клітин за допомогою флуоресцентного барвника, який відрізняється тим, що як суправітальний барвник використовують 3,3'dioctadecyloxacarbocyanine bromide. (19) (21) u200509752 (22) 17.10.2005 (24) 17.04.2006 (46) 17.04.2006, Бюл. № 4, 2006 р. (72) Боровий Ігор Анатолійович, Малюкін Юрій Вікторович, Семиноженко Володимир Петрович, Щегельська Олена Анатоліївна, Микулинський Юрій Юхимович, Хвисюк Олексій Миколайович, Дьомін Юрій Альбертович, П'ятикоп Володимир Олександрович, Антонян Ігор Михайлович (73) Боровий Ігор Анатолійович, Малюкін Юрій Вікторович, Семиноженко Володимир Петрович, 3 13724 4 лю, в якості суправітального барвника використоМітка легко зв'язується з клітинами і дає високий вують 3,3-'dioctadecyloxacarbocyanine bromide. рівень сигналу (Фіг.1). Технічний ефект корисної моделі полягає в Приклад 2 тому, що зафарблюючи клітини розчином барвниВивчення впливу 3,3ка DDB (3,3-'dioctadecyloxacarbocyanine bromide) 'dioctadecyloxacarbocyanine bromide на функціонами одержуємо флуоресцентне пофарбовані твальні властивості стромальних клітин кісткового ринні клітки, що зберігають свої біологічні функції мозку in vitro. протягом 2-3 тижнів і зберігають високий рівень Клітини строми кісткового мозку, мічені 3,3флуоресценції in vitro і in vivo. 'dioctadecyloxacarbocyanine bromide, як у досліді 1, Для цього спосіб включає методику суправітаінкубують в культурі на пластикових флаконах у льного фарбування біологічних клітин, що дозвосередовищі DMEM/F12 с 10% ФБС протягом 7 ляє ввести флуоресцентну мітку в біологічну мемднів, відмивають від середовища і досліджують на брану клітин і включає використання специфічного люмінесцентному мікроскопі. Фарбування стромафлуоресцентного барвника 3,3льних клітин 3,3-'dioctadecyloxacarbocyanine 'dioctadecyloxacarbocyanine bromide. bromide не викликає токсичного ефекту протягом 7 Сутність способу пояснюють фотографії Фіг.1днів, не заважає розподілу і диференціюванню 6, де зображені ілюстрації до серії досліджень. клітин у культурі (Фіг.2). Спосіб, що заявляється, здійснюють таким чиПриклад 3 ном. Визначення долі мічених стромальних клітин в Клітини тваринного походження в концентрації організмі експериментальних тварин (in vivo). 500-700тис. клітин інкубують у середовищі Клітини строми кісткового мозку, мічені 3,3DMEM/F12 с 10% ФБС, що містить 3,3''dioctadecyloxacarbocyanine bromide, як у досліді 1, dioctadecyloxacarbocyanine bromide у концентрації вводять експериментальним тваринам (пацюкам) 10-3М в 10% ДМСО і інкубують протягом 15-30хв. у кісткову тканину (тіло хребця). Гістологічний зріз при Т=37°С. Після інкубації клітини відмивають від замороженої тканини через 10 днів після введення барвника, який не зв'язався розчином Хенкса і мічених клітин, (Фіг.3). досліджують клітини на люмінесцентному мікросВводять в ушкоджену роговицю ока пацюка. копі при збудженні 436нм. Пофарбовані клітки свіГістологічний зріз замороженої тканини через 10 тяться жовто-зеленим світлом. днів після введення мічених клітин. (Фіг.4). Пропонований спосіб ілюструється матеріалаВводять в експериментальну кісту головного ми, представленими в наступній серії дослідів. мозку пацюка. Гістологічний зріз замороженої ткаПриклад 1 нини через 10 днів після введення мічених клітин Визначення можливості зв'язування 3,3(Фіг.5). 'dioctadecyloxacarbocyanine bromide зі стромальВводять в експериментальне ушкоджений сіними клітинами кісткового мозку in vitro. м'яник пацюка. Гістологічний зріз замороженої ткаДо клітин строми кісткового мозку ссавців, нини через 10 днів після введення мічених клітин отриманих з культури у вигляді суспензії, у конце(Фіг.6). нтрації 500тис. клітин /у середовищі DMEM/F12 с Це дозволяє простежити долю мічених стро10% ФБС, додають 3,3-'dioctadecyloxacarbocyanine мальних клітин протягом 10 днів після введення. bromide у концентрації 10-3М в 10% ДМСО і інкуТаким чином, запропонований спосіб одербують протягом 15-30хв. при Т=37°С. Потім клітижання суправітально забарвлених клітин різних ни відмивають розчином Хенксу і з осаду, що затипів біологічних тканин дозволяє отримати флуолишився, готують цитологічні препарати. Після ресцентне пофарбовані тваринні клітки, що зберіпідсушування на повітрі, рівень люмінесценції оцігають свої біологічні функції протягом 2-3 тижнів і нюють на люмінесцентному мікроскопі при 436нм. зберігають високий рівень флуоресценції in vitro і in vivo. 5 Комп’ютерна верстка Н. Лисенко 13724 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601