Спосіб визначення імуногенності еритроцитів

Спосіб визначення імуногенності еритроцитів, що включає трансплантацію клітин тваринам з наступним їх аналізом, який відрізняється тим, що після трансплантації здійснюють декапітацію тварин, забір крові, виділяють еритроцити і за допомогою прямої реакції Кумбса проводять розрахунок інтегрального показника - потенціалу імуногенності еритроцитів. (19) (21) u200511737 (22) 09.12.2005 (24) 15.06.2006 (46) 15.06.2006, Бюл. № 6, 2006 р. (72) Гольцев Анатолій Миколайович, Горська Аліна Юріївна, Грищенко Валентин Іванович, Луценко Олена Дмитрівна, Дубрава Тетяна Георгіївна, Останков Максим Вадимович, Гольцев Кирил Анатолійович 3 15079 4 IV. Тварини з тим чи іншим титром AT (коефіперед заморожуванням). Ці групи було використацієнт) 1:2 - 1; 1:4 - 1,2 і т.д. 1:128 - 2,2. (наприклад, но як контроль можливої модифікації імуногенної 50 тварин з титром 1:4=50.1,2=60 балів) активності еритроцитів під впливом тільки кріопроПриклад. Експерименти виконували на мишахтекторів. самках лінії C57BL. Тварини було розділено на 6 Еритромасу заморожували в поліетиленових груп: 1-й-групі вводили нативні сингенні еритроциампулах Corning Incorporated (США) загальним ти, попередньо відмиті 3 рази при 3000 об/хв прообсягом 1,8 М. Заморожування суспензії клітин тягом 5хв за загальноприйнятою методикою [3]; 2здійснювали до температури -196°С шляхом одй групі вводили сингенні еритроцити, попередньо номоментного швидкого занурення ампул у рідкий прогріті при температурі 49,5°С протягом 30хв [4]; азот. Відтавання проводили на водяній бані при 3-й групі вводили еритроцити, кріоконсервовані під температурі 42-44°С з постійним колиханням амзахистом 30%-го ПЕО-1500, без відмивання від пули до зникнення льоду. криопротектора після розморожування [5]; 4-й груЕритроцити вводили однократно внутрішньопі вводили еритроцити, кріоконсервовані під захичеревинно в кількості 3.109/на мишу в об'ємі 0,5 М. стом 30%-го гліцерину, з трьохкратним відмиванКонтроль за утворенням противоеритроцитарням від кріопротектора після розморожування [3]. них аутоантитіл здійснювали за допомогою прямої Тваринам 5- і 6-ї груп вводили сингенні еритроциреакції Кумбса на 13-у добу після введення еритти, що не піддавали заморожуванню, але експонуроцитів. На підставі отриманих результатів розравали, відповідно, з кріопротектором ПЕО-1500 ховували ПІЕ. протягом 40хв при 0°С та гліцерином протягом Результати виконаних досліджень представ20хв при кімнатній температурі (подібно процедурі лені в таблиці. Таблиця Порівняльний аналіз утворення противоеритроцитарних аутоантитіл у реципієнтів після введення сингенних еритроцитів Групи (введення сингенних еритроцитів) Нативні Підгрупи Титр антитіл (розведення сироватки) 0 1 n=15 Прогріті до t=49,5 1 1:16 2 1:32 3 1:128 n=23 Кріоконсервовані 1 0 під захистом ПЕО2 1:2 1500 3 1:8 n=24 Кріоконсервовані 1 0 під захистом гли2 1:4 церину 3 1:8 n=27 Експоновані з 1 0 ПЕО-1500 2 1:2 n=13 Експоновані з глі1 0 церином 2 1:2 n=19 Примітка: n - загальна кількість тварин у групі. З таблиці видно, що характер прояву імуногенних властивостей еритроцитів істотно залежить від того, яку попередню «передобробку» вони пройшли. Так, максимальний потенціал імуногенності був відзначений у прогрітих еритроцитів (479,2 бали). Приблизно в 2,3 рази цей показник був меншим у еритроцитів, кріоконсервованих під захистом гліцерину (209,2 бали) і трохи нижче у тих, які у минулому були заморожені під захистом ПЕО-1500 (183,3 бали), тобто незважаючи на зна Кількість еритВираженність роцитів в агререакції гаті Відсоток тварин ПІЕ ++(+) +(+) ++ 4-5 3-4 6-7 73,9 13,0 13,1 475,2 + +(+) 3-4 6-7 50 29,8 20,2 183,3 +(+) + 4 7 51,8 23,3 25,9 209,2 +(-) 3-4 92,3 7,7 +(-) 3-4 89,5 10,5 37,7 50,5 чно менший, у порівнянні з групою 2, показник імуногенності, Кріоконсервовані сингенні еритроцити все ж таки мають імуногенну активність. Очевидно, що активність такого роду є наслідком зміни якісних характеристик мембранних структур еритроцитів після різних фізико-хімічних факторів, які можна об'єктивно оцінювати за допомогою запропонованого інтегрального показника ПІЕ. Джерела інформації: 1. Калмыков К.К., Лобасенко Н.П., Тупчиенко 5 15079 6 Г.С. Влияние низкотемпературной консервации на 4. Труфакин В.А., Лозовой Л.П. Влияние сомаиммуногенные и антигенные свойства аллотранстотропного гормона на аутоиммунные реакции, плантатов кожи // Криобиология и криомедицина. индуцированные у мышей разных генотипов син1976. - №2. - С. 84-86. генными прогретыми эритроцитами // Бюл. экспе2. Эфуни С.С. Этиология и патогенез аутоимрим. биологии. - 1977.-№3. - С.305-308. мунных заболеваний // Гематология и трансфузи5. Бабийчук Л.А., Землянских Н.Г. Оптимизаология. - 1993. - №4. - С.32-37. ция и преимущества безотмывочного метода кри3. Аграненко В.А., Федорова Л.И. Замороженоконсервирования эритроцитов с ПЭО-1500 // ная кровь и ее клиническое применение. - М.: МеПробл. криобиологии. - 2001. - №1. - С. 35-37 дицина, 1983. - С. 20-25. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601