Спосіб моніторингу активності пухлинного процесу в хворих на рак яєчників та молочної залози

1. Спосіб моніторингу активності пухлинного процесу в хворих на рак яєчників та молочної залози шляхом визначення рівня сироваткових онкомаркерів СА 125 або СА 15-3 і показників клітинного імунітету в тесті пригнічення адгезії лейкоцитів периферичної крові в присутності екстрактів відповідних пухлинних тканин, який відрізняється тим, що активність пухлин яєчників та молочної залози визначають шляхом одночасного дослідження значень рівня онкомаркерів СА 125 3 Найбільш близьким за суттю до заявленого способу є спосіб визначення проліферативного індексу в пухлинній тканині, який можна оцінити шляхом визначення експресії ядерного антигену Кі-67, що відповідає за темп проліферації методом імуно-гістохімічного аналізу [Маршутина И.В., Кирсанова В.А., Сергеева Н.С. и др. Пролиферативная активность и химиочувствительность клеток рака яичников в динамике химиотерапии. // Российский онкол. журн. - 2001. - №1 - С.18-20]. Цей спосіб був обраний за прототип. Перевагою методу є його точність - можна точно визначити темп проліферації в пухлинній тканині на момент аналізу. Недоліком способу-прототипу є його інвазивність (необхідний пункційний матеріал з пухлинної тканини; для дослідження в динаміці забір повинен виконуватися багаторазово, що не завжди технічно можливо) і дорожнеча методики імуногістохімічного аналізу. В основу корисної моделі поставлена задача підвищення діагностичної значимості тестів, використовуваних для моніторингу активності пухлинного процесу, а також забезпечення можливості проводити корекцію тактики обстеження та лікування хворих на рак яєчників та молочної залози у ході проведення хіміотерапії й у період спостереження за хворими в ремісії. Поставлена задача вирішується таким чином, що активність пухлин яєчників і молочної залози визначають шляхом одночасного дослідження і комплексної оцінки значень рівня онкомаркерів CA 125 або CA 15-3 у сироватці крові та показників клітинного імунітету в тесті пригнічення адгезії лейкоцитів периферичної крові в присутності екстрактів відповідних пухлинних тканин, для чого на різних етапах лікування виконується пухлинних тканин, для чого на різних етапах лікування виконується одномоментний забір крові з вени в об’ємі 16-18мл для одночасного виконання вказаних вище методик. Новим у заявленому способі є те, що активність пухлин яєчників і молочної залози визначають шляхом одночасного дослідження і комплексної оцінки значень рівня онкомаркерів СА 125 або СА 15-3 у сироватці крові та показників клітинного імунітету в тесті пригнічення адгезії лейкоцитів периферичної крові в присутності екстрактів відповідних пухлинних тканин. При такому способі моніторингу пухлинного процесу можна одержати більш повну інформацію про активність пухлинного процесу, оцінену за рівнем надходження в кровотік розчинних продуктів пухлини та за функціональною активністю лейкоцитів периферичної крові in vitro у присутності пухлинних екстрактів, що непрямо свідчить про проліферативну активність пухлини in vivo. При наявності нормальних значень рівня сироваткового онкомаркера реєстрація в периферичній крові клону лейкоцитів, прекомитованого до пухлинної тканини, може бути додатковим критерієм активності пухлинного процесу. І навпаки, підвищена кількість продуктів пухлини в сироватці веде до зниження функціональної активності лейкоцитів периферичної крові [Блиндарь В.Н., Зубрихина Г.Н., Зарядьева Е.А., 15140 4 Заботина Т.Н. Адгезивная способность нейтрофилов периферической крови и экспрессия дифференцированных антигенов у доноров и больных раком яичника // Клин. лаб. диагностика - 1998, №12. - С.3-4], які проявляють неадекватну реакцію при інкубації з пухлинними екстрактами. Таким чином, одночасне визначення сироваткових та клітинних маркерів пухлини дозволяє отримати інформацію що до її активності під час різних фаз розвитку пухлинного процесу. Діагностична інформативність запропонованого методу підвищується за рахунок зниження імовірності хибно негативних результатів кожного з використаних способів. Спосіб здійснюють таким чином. Виконують забір крові з вени в об’ємі 6-8мл для визначення рівня онкомаркера і одномоментно 10мл для проведення тесту пригнічення адгезії лейкоцитів з пухлинними екстрактами. Визначення пухлинних маркерів СА 15-3 і СА 125 у сироватці крові здійснюють методом імуноферментного аналізу, за дискримінаційний рівень СА 125 приймали 35ОД/мл, СА 15-3 - 28ОД/мл. Тест пригнічення адгезії лейкоцитів проводили в розробленій і запатентованій нами мікромодифікації [Кайряк О.В., Лісовська Н.Ю. Спосіб виявлення сенсибілізації клітинного типу лейкоцитів людини до тестуючого антигену // Деклараційний патент на винахід №28837А від 16.10.2000. (Україна). Бюл. №5-11]. Результат тесту оцінюють за ступенем афінності лейкоцитів до пухлинного екстракту, вираженого у відсотках - індекс афінності, за дискримінаційний рівень приймали індекс афінності рівний 10%. Діагностична чутливість тесту за літературними даними складає 84-95% [Mori К., Neal D., Lamm D. Immunological assesment of renal cancer patients as avaluated by the lymphocyte adherence inhibition test // J. Urol., - 1986. - Vol.136. - N3 - P.571-575]. Приклад здійснення способу. Хвора М., 1942р.н. IX №15810. Діагноз: Рак яєчників IIIc ст. (Т3зN0М0) II кл.гр. Установлений 23.01.02, верифікований при цитологічному дослідженні асцитичної рідини, в якій виявлені клітини аденокарциноми. 25.01.02 виконано дослідження сироватки крові хворої для встановлення рівня онкомаркера СА 125 та одночасне дослідження лейкоцитів периферичної крові в тесті пригнічення адгезії лейкоцитів у присутності екстракту пухлинної тканини яєчника. Потім хвора одержувала хіміотерапію, враховуючи поширеність пухлинного процесу та неоперабельність пухлини. Повторне обстеження хворої перерахованими вище методами виконали 22.05.02 після 4-го курсу хіміотерапії, коли була зареєстрована часткова регресія пухлини. Після проведення 5-го курсу хіміотерапії відзначений максимальний ефект від хіміотерапії у вигляді відсутності асциту, зменшення пухлин яєчників більш ніж на 50% і хвора прооперована 1.07.02 - виконана радикальна операція (надпіхвова ампутація матки з придатками, резекція сальника). Гістологічно у видалених яєчниках і сальнику аденокарцинома з ознаками вираженого лікарського патоморфозу. Хворій проведено 3 курси ад'ювантної хіміотерапії. Повторне обстеження крові на предмет рівня онкомаркера СА 125 та одночасне дослідження лейкоцитів периферичної крові в тес 5 15140 ті пригнічення адгезії лейкоцитів у присутності екстракту пухлинної тканини яєчника виконано 11.03.03 у період спостереження за хворою в ремісії. Результати обстеження хворої представлені в таблиці та графіку. З таблиці випливає, що високий рівень сироваткових продуктів пухлини, визначений до початку лікування (СА 125 - 188,8ОД/мл), був інформативним. У той же час індекс афінності з пухлинним екстрактом у тесті був негативним (-33%). На фоні ефективної хіміотерапії рівень онкомаркера в сироватці крові знизився до 8,778ОД/мл, що говорить про зниження продукції пухлинних продуктів у сироватці крові. У цей час індекс афінності в тесті підвищився до 34% і став більш інформативним тестом, що можна пояснити тим, що при наявності 6 залишкової пухлинної маси в периферичній крові існує клон лімфоцитів, прекомитованих до пухлини, що реєструється в тесті. При обстеженні хворої в ремісії відзначений низький підпороговий рівень онкомаркера СА 125 (7,086ОД/мл) і негативний індекс афінності в тесті пригнічення адгезії лейкоцитів (-20%), що відповідає відсутності пухлинної тканини в організмі. Хвора до теперішнього часу знаходиться в ремісії. За заявленим способом був проведений моніторинг у 43 хворих на рак яєчників та 18 хворої на рак молочної залози, взагалі проведено 107 паралельних досліджень. Аналіз та порівняння результатів проведеного моніторингу та даних літератури підтвердив підвищення діагностичної чутливості запропонованого рішення на 7-10%. Таблиця Динаміка показників рівня СА 125 та індексу афінності лейкоцитів до пухлинних антигенів раку яєчників у тесті пригнічення адгезії лейкоцитів хворої М. на різних етапах лікування Дата обстеження 25.01.02 22.05.02 11.03.03 Етап комбінованого лікування Перед лікуванням Після 4-го курсу XT В ремісії Комп’ютерна верстка А. Рябко Індекс афінності до пухлинних анРівень онкомаркетигенів раку яєчників у тесті пригніра СА 125, ОД/мл чення адгезії лейкоцитів, % 188,8 -33 8,778 34 7,086 -20 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601