Спосіб специфічної протипухлинної імунотерапії хворих на рак молочної залози

Спосіб специфічної протипухлинної імунотерапії хворих на рак молочної залози, що включає видалення первинної пухлини та и метастазів, одержання суспензії сингенних пухлинних клітин та наступну люфілізацію і опромінення іонізуючою радіацією, ресуспендування в розчині хлориду натрію та введення препарату онкологічним хворим, який відрізняється тим, що сингенні пухлинні клітини піддаються крюдеструкцм, люфілізацм при -196°С - 269°С , потім мехаНОХІМІЧНІЙ модифікації протягом 3-6хв з інтенсивністю підводу механічної енергії 20-25Вт/г при ВІДНОСНІЙ вологості 50%, після чого проводиться одночасна радюактивація та стерилізація препарату опроміненням в дозі 50кГр і суспензія отриманого препарату вводиться хворому внутрішньошкірно на 5-10 добу після хірургічного втручання три рази з інтервалом в 5-7 днів по 0,41,2мг/мл Винахід відноситься до медицини, а саме - до онкології і може бути використаний для специфічної протипухлинної імунотерапії хворих на рак молочної залози Відомий спосіб специфічної протипухлинної імунотерапії онкологічних хворих включає видалення пухлини та и метастазів, одержання пухлинного матеріалу з цитокшами та їх наступну ліофілізацію, ресуспендування в розчині хлориду натрію, введення онкологічним хворим [1] Цей спосіб характеризується низькою вибірковістю протипухлинної дії Введення сингенних пухлинних клітин в організм-пухлиноносія з метою індукування протипухлинної резистентності не завжди супроводжується гальмуванням пухлинного росту, а в деяких випадках може його стимулювати За прототип нами взято спосіб специфічної протипухлинної імунотерапії онкологічних хворих (Jaffe Е М , Pardoll D М Consideration for the cytokme development of cytocme gene-transduced tumor cell vaccines Methods Companion to methods in enzymology, 1997, №12, p 143-153), який включає видалення первинної пухлини та и метастазів, одержання суспензії сингенних пухлинних клітин, опромінення їх малими дозами (до 1 Гр) іонізуючої радіації, наступну модуляцію опроміненими клітинами in vitro лімфоцитів хворого, ресуспендування в розчині хлориду натрію та введення препарату хворому внутрішньошкірно Позитивним в прототипі є те, що протипухлинна та антиметастатична дія цього способу заснована на ініціації імуномодулюючого ефекту препаратом в організмі хворого на рак Недоліком прототипу є те, що даний спосіб має низьку вибіркову протипухлинну дію внаслідок недостатності або повної відсутності пухлиноасоційованих антигенів на поверхні пухлинних клітин через їх велику фенотипічну гетерогенність Застосування антибіотиків для стерилізації пухлинних клітин, порушує синтез нуклеїнових кислот, функції рибосом та мембран, що викликає суттєве послаблення формування специфічної протипухлинної реакції Спосіб вимагає багато часу для приготування препарату через необхідність культивування клітин до 7 днів та великих економічних витрат Крім цього, використання відомого способу не дозволяє довго зберігати препарат, що має стабільні властивості для повторних курсів імунотерапії В основу винаходу поставлено задачу створити спосіб специфічної протипухлинної імунотерапії хворих на рак молочної залози шляхом видалення первинної пухлини та и метастазів, крюдеструкцм, люфілізацм, механохімічній модифікації, радюактивацм і стерилізації сингенних пухлинних клітин та введення препарату хворому внутрішньошкірно, що буде сприяти гальмуванню процесів метастазування, продовженню ремісії та безрецидивного періоду тривалості життя ю ю (О 61552 Поставлена задача вирішується шляхом виімунотерапії амбулаторне за місцем проживання далення первинної пухлини та її метастазів, крюпри незначних економічних затратах деструкцм пухлинного матеріалу, одержання суПрикладом реалізації заявленого способу спензії сингенних пухлинних клітин з їх наступною специфічної протипухлинної імунотерапії є витяг з люфілізацією, механохімічної модифікації, радюісторії хвороби №6569, хворої К-на Л І , вік 42 роки активацм та стерилізації препарату гаммаРак молочної залози T3N0M0 був верифікований опромшенням та введення препарату хворому морфологічно, рентгенологічно та КЛІНІЧНО Первнутрішньошкірно винну пухлину та метастази вилучали при радикальної мастектомм по Пейті Потім пухлину гомоПервинну пухлину та метастази вилучали при генізували в гомогенізаторі шляхом м'якого хірургічному втручанні під наркозом Потім пухлипродавлювання через сито Одержаний гомогенат ну гомогенізували в гомогенізаторі шляхом м'якого фільтрували та відмивали 0,9% розчином хлориду продавлювання через сито Одержаний гомогенат натрію шляхом центрифугування при ЗОООд Пефільтрували та відмивали 0,9% розчином хлориду ред люфілізацією одержані сингенні пухлинні натрію шляхом центрифугування при ЗОООд клітини попередньо піддавали крюдеструкцм Життєздатність клітин складала 95% Перед рідким азотом при температурі -196°С в чашках люфілізацією одержані сингенні пухлинні клітини Петрі упродовж ЗОхв в установці, заморожуванняпопередньо піддавали крюдеструкцм рідким азовисушування УЗВ10 00 00 00 Заморожені пухтом при температурі -196°С в чашках Петрі упролинні клітини піддавали вакуумній сублімаційній довж ЗОхв в установці заморожуваннясушці в камері люфілізатора протягом 12 годин висушування УЗВ10 00 00 00 Заморожені пухТемпература клітин не перевищувала 4-7°С і конлинні клітини піддавали вакуумній сублімаційній тролювалась термопарами Мінімальний тиск в сушці в камері люфілізатора протягом 12 годин камері під час висушування складав 0,6Па Потім Температура клітин не перевищувала 4-7°С і конлюфілізовані пухлинні клітини разом з 5 металетролювалась термопарами Мінімальний тиск в вими кульками розташовували в герметичній рекамері під час висушування складав 0,6Па Потім акційній камері мікровібромлина MMVE-0 005, люфілізовані пухлинні клітини разом з 5 металепісля чого проводили механохімічне мовими кульками розташовували в герметичній редифікування з інтенсивністю підводу механічної акційній камері мікровібромлина MMVE-0 005, енергії 20Вт/г протягом 5хв при 50% ВІДНОСНІЙ ВОпісля чого проводили механохімічне моЛОГОСТІ Механохімічно модифікований пухлинний дифікування з інтенсивністю підводу механічної матеріал розташовували в скляних флаконах і енергії 20-25 Вт/г протягом 5хв при 50% ВІДНОСНІЙ герметично закривали Потім флакони з пухлинВОЛОГОСТІ Механохімічно модифікований пухлинним матеріалом радюактивували та стерилізували ний матеріал розташовували в скляних флаконах і гамма-опромшенням в дозі 50кГр на установці герметично закривали Потім флакони з пухлин„МРХ-гамма-25М" Після чого одержували сусним матеріалом радюактивували та стерилізували пензію пухлинного матеріалу в фізіологічному розгамма-опромшенням в дозі 50-75кГр на установці чині і внутрішньошкірно вводили хворій на 7 добу „МРХ-гамма-25М" Після чого одержували суспісля хірургічного втручання три рази з інтервалом пензію пухлинного матеріалу в фізіологічному розв 7 днів по 0,5-1,0мг/мл чині і внутрішньошкірно вводили хворій на 5-10 добу після хірургічного втручання три рази з Імунологічні дослідження проведені 5 хворим інтервалом в 5-7 днів по 0,4-1,2мг/мл на рак молочної залози (Табл) Лабораторну імунодіагностику проводили на основі визначення Час приготування препарату не перевищував імунних комплексів [3] В таблиці представлені 24 год Приготовлений стерильний препарат, закузміни імунних комплексів під впливом імунотерапії, порений в спеціальних флаконах може зберігатись яка підвищувала в середньому на 29,6% величину до 2-х років Це дозволяє хворому після виписки з імунних комплексів в крові хворих онкологічної КЛІНІКИ проводити повторні курси Таблиця Імунологічні дослідження хворих на рак молочної залози, які пройшли курс специфічної протипухлинної імунотерапії в процесі комплексного лікування Класифікація П І Б , рік Діагноз, номер папухлинного про№ народження гопстолопчного висновку, цесу по системі Хірургічна операція хворої клінічна стадія TNM мастектомія по Холстеду після імунотерапії 60 75 мастектомія по Пейті 69 102 45 75 105 105 60 75 Рак правої молочної залози, 10439-42/98, 2Б Рак лівої молочної залози, 16751-4/98, 2Б T3N,M0 3 К-ра Л С , 1953 Рак лівої молочної залози, 5682/99, 2А T2N0M0 4 К-ко П Г, 1951 Л-ка М И , 1926 Рак лівої молочної залози, 5682/99, 2А Рак лівої молочної залози, 7248-9/99 2А T4N3Mi, MtsB кістках секторальна резекція, квадрантектомія з лімфоденектомією мастектомія по Холстеду T3N0M0 мастектомія підшкірна 2 5 T3N0M0 ЦІ) до імунотерапії П-ко Н А, 1941 К-на Л И , 1946 1 Імунні комплекси (ВІДНОСНІ ОДИНИ 61552 Аналіз результатів лікування на основі лабораторних показників свідчить про це, що використання запропонованого способу протипухлинної імунотерапії хворих на рак молочної залози підвищувало активацію макрофагів за рахунок збільшення в препараті, який вводиться, короткоживучих вільних радикалів хімічної та механохімічної природи ВІДПОВІДНО в 9 та 1,3 рази Дослідження були проведені методами хемілюмінесценції та механоемісм [4] При цьому адгезивність перитонеальних макрофагів підвищилась в середньому на 38%, що свідчить про зростання цитотоксичності макрофагів по відношенню до пухлинних клітин Результати санітарно-мікробіологічного дослідження механохімічно модифікованих люфілізованих пухлинних клітин після їх гаммаопромшення свідчать про повну стерильність препаратів Безпосередні КЛІНІЧНІ результати після 24 МІСЯЦІВ специфічної протипухлинної імунотерапії в процесі комплексного лікування хворих на рак молочної залози свідчать, що за КЛІНІЧНИМИ даними та показниками інструментальних досліджень (ультразвукового, рентгенівського та комп'ютерної томографії) відмічена позитивна динаміка лікування Спостерігалась місцева реакція в МІСЦІ внутрішньошкірного введення препарату у вигляді почервоніння шкіри в діаметрі до 1,0см, яке зникало протягом 12-24 годин безслідно У всіх Комп'ютерна верстка Т Чепелсва пролікованих хворих (20 пацієнток) спостерігали краще заживления післяопераційної рани, місцеві рубці були більш еластичні У однієї хворої (T4N3M1) з метастазами в кістки спостерігалась стабілізація пухлинного процесу У іншої хворої через 24 МІСЯЦІ був виявлений рецидив, хвора померла У 19 з 20 пацієнток після специфічної протипухлинної імунотерапії дані інструментальних досліджень свідчать про відсутність місцевого рецидиву та віддалених метастазів після закінчення курсу лікування, тоді як в контрольній групі, до якої були залучені хворі раком молочної залози тих же стадій, але без наступної вакцинації, через 24 МІСЯЦІ 4 хворих померло від метастазів рака молочної залози, у однієї пацієнтки розвинувся гострий лейкоз Джерела інформації 1 Патент Німеччини 19506483, МКИ 61К35/12, А61К38/19, Liophihsat-Vakzine, 29 08 1996р , 2 Jaffe Е М , Pardoll D М Consideration for the cytokme development of cytocme gene-transduced tumor cell vaccines Methods Companion to methods in enzymology, 1997, №12, p 143-153 (прототип), 3 Клиническая иммунология Руководство для врачей Под ред Е И Соколова - М Медицина, 1998, 4 Барабой В А , Орел В Э , Карнаух И М Перекисное окисление и радиация Киев Наук думка, 1991 Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119