Спосіб діагностики злоякісних пухлин легенів

Изобретение относится к медицине, а именно к патоморфологии и онкологии, и предназначено для диагностики злокачественных опухолей легкого. Известен способ диагностики рака, основанный на определении в сыворотке крови концентрации белка, связанного с ДНК, содержание которого существенно выше у больных с опухолью, чем без нее [1]. Однако данному способу присущи следующие недостатки: сложность воспроизведения, обусловленная использованием специальных реактивов, включающих флюро хромы, применением спектрофлюороколориметрии, а также большая продолжительность из-за многоступенчатой подготовки реагентов. Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является способ определения дифференцирующи хся клеток на препарате [2]. Способ заключается втом, что на препарате путем фиксации ткани, приготовления срезов и исследования клеток. ткань перед фиксацией обрабатывают 12% раствором трилона Б при рН 7,2-7,4 в течение 24-28 час. далее срезы инкубируют с" сывороткой крови при температуре 37°С в течение 22-24 час, после чего срезы помещают в 5% раствор азотнокислого серебра, а дифференцировку клеток определяют по содержанию в них серебра после почернения на ярком свету. Недостатками способа являются: сложности воспроизведения из-за необходимости забора ткани пораженного органа при эндоскопии, пункции, аутопсии, с последующим приготовлением гистологических срезов, что требует применения большого количества специального медицинского оборудования, необходимость длительного поддержания температурного режима, значительная продолжительность (2-е суток). В основу изобретения поставлена задача усовершенствования способа диагностики злокачественных опухолей легкого путем последовательного нанесения на мазок крови Донора 0 (I) группы и мазок крови заранее известного больного с опухолевым процессом в легком капли раствора трилона Б, крови исследуемого больного и раствора азотнокислого серебра, в результате чего достигается сокращение времени исследования и упрощение способа без снижения качества диагностики. Поставленная задача решается тем, что в способе диагностики злокачественных опухолей легкого, включающем исследование взаимодействия биологического материала с сывороткой крови, согласно изобретению, на мазок крови донора 0 (I) группы и мазок крови больного с опухолью легкого наносят раздельно по две капли 25% раствора трилона Б, затем через 10 мин в одну из капель на каждом мазке вводят каплю сыворотки крови обследуемого, а в другую - каплю сыворотки донора 0 (I) группы, после чего через 10 мин во все капли вносят по 1 капле 0,25% раствора азотнокислого серебра и при появлении в ярком свете через 3-4 час на мазке крови донора в капле, содержащей сыворотку обследуемого, черно-коричневой окраски, центрального пятна с нечеткими краями и гранул с размытыми очертаниями, а на мазке больного опухолью легкого в капле, содержащей сыворотку донора 0 (I) группы - черной окраски, центрального пятна с нечеткими краями и мелкой зернистостью гранул, имеющих четкие очертания. а также просветления окраски центра пятна в другой капле диагностируют злокачественную опухоль легкого. В необходимых случаях для объективной оценки интенсивности окрашивания капель на мазках применяли метод фотометрии. В сложных случаях патоморфологической верификации диагноза известными методами применение способа позволяло получить альтернативный результат, что подтверждалось дальнейшими клиническими наблюдениями. Опытным'путем установлено, что при концентрации трилона Б менее 25% значительно удлиняется время прохождения реакции и снижается интенсивность окраски, а при концентрации трилона Б более 25% происходит повреждение структур мазка и выпадение указанного вещества в осадок. Кроме того, обнаружено, что оптимальным для прохождения реакции является 0,25% раствор азотнокислого серебра, так как при уменьшении его концентрация также удлиняется время прохождения реакции, а при увеличении концентрации отмечается выпадение данного вещества в осадок и наблюдается нечеткость окрашивания структур капли. Опытным путем также определено, что оптимальным временем взаимодействия трилона Б и сыворотки крови с мазком является 10 мин, так как при сокращении времени взаимодействия данных компонентов реакции наблюдается резкое снижение интенсивности окраски, что не позволяет оценить результат реакции. При увеличении длительности взаимодействия трилона Б и сыворотки с мазком крови имеет место повреждающее действие трилона Б на структуры мазка и перекрашивание данных структур, обусловленное Действием на ингредиенты сыворотки, что не позволяет определить результат реакции. Примеры выполнения способа. Пример 1. Гражданин А., донор группы 0 (I), при клиническом обследовании патологии не выявлено, практически здоров. Для исключения Опухолевого процесса у обследуемого А, на мазки крови группы 0 (I) донора Б (контроль) и пациента с группой 0 (I) крови и опухолевым процессом в легком раздельно помещают по 2 капли 25% раствора трилона Б. Через 10 мин на каждом мазке в одну каплю раствора трилона Б вносят 1, равную по объему первой, каплю сыворотки обследуемого донора А, одновременно на том же мазке в другую каплю - 1 каплю сыворотки донора Б 0 (I) группы крови. Через 10 мин во все капли вводят по 1 капле такого же объема 0,25% раствора азотнокислого серебра. Способ осуществляют на ярком свете, оставляя мазки на 3-4 часа, после чего анализируют результаты. При этом капли А и Б мало отличаются по цвету и структуре, имеют четкие границы контуров центрального пятна (фиг. 1а), а на мазке крови группы 0 (I) больного с опухолью легкого отмечается потемнение коричневого цвета центрального пятна, как в капле А, так и в капле Б (фиг. 1б). В этом случае результаты применения способа свидетельствуют об отсутствии опухолевого процесса. При углубленном клиническом обследовании донора А патологии выявлено не было, практически здоров. Пример 2. Больной В., с подозрением на опухолевый процесс. После аналогичных первому примеру операций с сывороткой образца крови больного В. в аналогичных условиях, с использованием для контроля сыворотки 0 (I) гр уппы, получены следующие результаты (фиг. 2а, б). На мазке донора группы 0 (I) капля А: содержащая сыворотку больного В., приобрела черно-коричневую окраску (фиг. 2а). Ее центральное пятно имеет размытые края фистончатых контуров. Гранулы пятна нечеткими очертаниями сливаются между собой. На том же мазке в контрольной капле Б центральное пятно имеет более светлую коричневую окраску. Края центрального пятна относительно четкие, а мелкая зернистость - с четкими очертаниями (фиг. 2а). На мазке крови 0 (I) группы пациента с опухолевым процессом в легком (фиг. 2б) в капле А, содержащей сыворотку больного В., по сравнению с каплей А на мазке донора 0 (I) группы просветление окраски ее центрального пятна, а в контрольной Б, с сывороткой донора группы 0 (I) - потемнение коричневой окраски. Клинически, рентгенологически и морфологически у больного В. подтвержден диагноз злокачественной опухоли легкого. Пример 3. Больной З, с подозрением на опухолевый стресс. В результате применение способа аналогично предыдущим примерам получены следующие результаты (фиг. 3а, б). Капля А больного З. и капля Б донора группы 0 (I) почти не отличаются своим коричневым цветом и структурой центрального пятна (фиг. 3а). Наряду с этим, на мазке крови группы 0 (I) больного с опухолью легкого отмечается потемнение цвета центрального пятна в капле А и капле Б. Контуры центральных пятен относительно четкие. Структура пятен имеет мелкозернистый вид (фиг. 3б). У больного З. клинически, рентгенологически, морфологически опухолевый процесс исключен и установлен диагноз: инфильтративный туберкулез легких. Для оценки деталей структуры центрального пятна капель во всех наблюдениях использовали проектор с увеличением его изображения в 10-20 раз. В случаях нечеткости результатов, обусловленной техническими погрешностями, исследования с применением заявленного способа необходимо повторить. С целью определения диагностической специфичности (ДС) и прогностичности положительного результата (ППР) были изучеиы результаты исследований с применением способа 65 практически здоровых лиц (доноров) и 65 больных с морфологически подтвержденным раком легкого. Полученные результаты соответственно представлены в таблицах 1 и 2. По полученным данным в группе здоровых лиц диагностическая специфичность (ДС) составила: В группе больных злокачественной опухолью легкого диагностическая чувствительность (ДЧ) составила: По результатам применения способа в обеих группах прогностичность положительного результата (ППР) составила: Разработанный способ доступен и прост, не требует применения дорогостоящей аппаратуры, по сравнению с известным, сокращает время диагностики в 12 раз при достаточно высокой эффективности диагностики опухолей.