Спосіб консервування спорової культури streptomyces aureofaciens

Спосіб консервування спорової культури Streptomyces aureofaciens, який включає вирощування мікробних клітин на скошеному регламентному живильному середовищі, вилучення мікробної культури і заморожуваннявисушування, який відрізняється тим, що вилучення мікробних клітин здійснюють на агарових пластинках товщиною 1,0 мм. (19) (21) u200706914 (22) 19.06.2007 (24) 10.10.2007 (72) ЦУЦАЄВА АЛЛА ОЛЕКСАНДРІВНА, UA, АНАНЬЇНА ГАННА ЄВГЕНІВНА, UA, БЕЛИБЕРДА ЛЮДМИЛА МИХАЙЛІВНА, UA, ГРИША ІГОР ГЕОРГІЙОВИЧ, UA, ЧЕРНИШЕНКО ЛЮДМИЛА ГЕННАДІЇВНА, UA, ЩЕГЛОВ АНДРІЙ ВІТАЛІЙОВИЧ, UA, ПАВЛЕНКО НЕОНІЛА ВОЛОДИМИРІВНА, UA 3 27038 4 скорочує процес висушування, що дає можливість приводило до зниження життєздатності спорової скоротити час перебування мікробної культури під культури після висушування на 16,2%. Залишкова дією фізико-хімічних факторів, призводящих до вологість збільшувалася на 0,5%. При цьому загибелі клітин. Після зберігання ліофілізованих тривалість процесу висушування збільшувалася зразків при температурі 4-10°С протягом 4 років на 0,5 години, що підвищувало трудоємність життєздатність спорової культури Streptomyces способу і вимагало великих витрат засобів (електроенергія, рідкий азот, захисні середовища aureofaciens складає (2,64±0,1200)´102 кл/мл, тоді та інші). як мікробна культура, яка вказана у прототипі, гине Таким чином, у порівнянні з прототипом після 2 років зберігання. заявлений спосіб дає можливість підвищити Спосіб пояснюється наступними прикладами. життєздатність мікробної культури, зменшити Приклад 1. Спорову культуру Streptomyces тривалість процесу консервування і, крім того, aureofaciens вирощували протягом 14 діб при знизити витрати засобів. температурі 28°С на скошеному агаровому Приклад 3. Консервування спорової культури регламентному живильному середовищі при Streptomyces aureofaciens проводили згідно з наступному співвідношенні компонентів, мас.%: прототипом у різних захисних середовищах Екстракт кукурудзяний 1,0 (кінська сироватка, 10% сахароза +1% желатина Крохмаль картопляний 2,0 медична і знежирене молоко). КН2РО4 0,2 Спорову культуру Streptomyces aureofaciens, (NH4)2HPO4 0,4 як у прототипі, вирощували протягом 14 діб при MgSO4 0,025 температурі 28°С на скошеному агаровому СаСО3 0,1 регламентному живильному середовищі при Агар-агар 2,0 наступному співвідношенні компонентів, мас. %: Вода дистильована інше Екстракт кукурудзяний 1,0 Агарові пластинки з мікробними клітинами, Крохмаль картопляний 2,0 товщиною 1,0мм, знімали зі скошеного агарового КН2РО4 0,2 регламентного живильного середовища гострим (NH4)2HPO4 0,4 шпателем разом із шаром агарового середовища, MgSO4 0,025 потім їх містили на дно пеніцилінових флаконів. СаСО3 0,1 Флакони з агаровими пластинками ставили у Агар-агар 2,0 металеві касети, які розміщували на полках Вода дистильована інше установки заморожування-висушування УЗВ-2 Вилучення мікробної культури проводилося виробництва СКТБ з ДВ ІПКіК НАН України. Зразки шляхом зіскоблювання клітин мікроорганізмів з заморожували зі швидкістю 2°С/хв. до початкової поверхні скошеного агарового регламентного температури висушування -20°С та висушували живильного середовища у пробірках зі штамом протягом 1 години. Залишковий тиск у камері спорової культури. Потім у ці пробірки вносили установки заморожування-висушування складав однаковий об'єм захисного середовища (кінська 1,33Па. Після закінчення висушування флакони із сироватка, 10% сахароза + 1% желатина медична і зразками укупорювали у парах сухого азоту знежирене молоко), мікробні клітини гумовими пробками та завальцьовували перемішували із захисним середовищем. металевими ковпачками. Залишкова вологість Отриману клітинну суспензію розливали по 1мл у зразків після висушування складала 2%. пеніцилінові флакони, котрі вміщали у сосуд із Регідратацію ліофілізованих зразків проводили сумішшю вуглекислоти з етиловим спиртом протягом 10 хвилин шляхом додавання (температура суміші складала - 70-80°С) на 10 дистильованої води. Життєздатність мікробної хвилин для заморожування та переносили у культури оцінювали за числом сформованих вакуум-сушильний апарат для подальшого макроколоній на агаровому регламентному висушування протягом 6 годин. Залишкова живильному середовищі. Результати наведені у вологість висушеної мікробної культури складала таблиці 1. 3-5%. Результати наведені у таблиці 2. З таблиці 1 видно, що при консервуванні З таблиці видно, що після консервування мікробної культури способом, який заявляється, мікробної спорової культури відомим способом життєздатність складала 78,6%. Залишкова життєздатність складала 12,9%-44,9%, що нижче, вологість зразків дорівнювала 2,0%. Тривалість ніж у способі, який заявляється. При цьому процесу висушування становила 1 годину. залишкова вологість зразків після 6 годин Приклад 2. Спосіб здійснювали аналогічно висушування складала 3,1-4,8%. прикладу 1, за винятком того, що спори мікробної культури знімали гострим шпателем із шаром живильного середовища різної товщини: 0,5мм та 1,5мм. Результати наведені в таблиці 1. Життєздатність спорової культури Streptomyc З таблиці видно, що при товщині агарових після консервування на агарових пластинках пластинок 0,5мм після консервування мікробної спорової культури її життєздатність була на 5% нижче, ніж при використанні агарових пластинок Життєздатність мікробної культури, Товщина агарового товщиною 1мм. Залишкова вологість зразків була в кл/мл (´107) шару, менш на 0,5%. Але тривалість процесу мм x±Sx % висушування не змінювалася і складала 1 годину. 0,5 4,27 ± 0,1400 73,6 Збільшення товщини агарових пластинок до 1,5мм 5 1,0 1,5 27038 4,58 ± 0,1000 3,62 ± 0,1200 78,6 62,4 6 2,0 2,6 60 90 Таблиця 2 Життєздатність спорової культури Streptomyces aureofaciens консервованої за прототипом Захисні середовища Кінська сироватка 10%сахароза+ 1% медичної Знежирене молоко желатини Вихідна життєздатність, кл/мл (´107) х± Sx 4,0 ± 0,0013 Життєздатність після ліофілізації х± Sx % 0,57 ± 0,1415 12,9 Тривалість ліофілізації % 6 2,10 ± 0,1990 0,46 ± 0,1431 21,9 6 1,5 ± 0,0280 0,69 + 0,1415 44,9 6 Джерела інформації: 1. Семенов С.М. Сравнительная оценка сред суспендирования при лиофилизации актиномицетов //Антибиотики.-1973.-т.18.-№11.С.1026-1029.