Спосіб отримання комплексу біологічно активних речовин з противиразковою, протизапальною та мембраностабілізуючою дією

Спосіб отримання комплексу біологічно активних речовин з противиразковою, протизапальною та мембраностабілізуючою дією, що включає трикратну водну екстракцію рослинної сировини, упарювання та сушіння одержаного сумарного екстракту, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують листя ліщини звичайної або грабу звичайного, або їх суміш, екстракцію здійснюють водою при температурі 50-60°С при співвідношенні сировина : екстрагент (1-10) : (1-15) протягом 4-5 годин. (19) (21) 20041109603 (22) 22.11.2004 (24) 15.01.2007 (46) 15.01.2007, Бюл. № 1, 2007 р. (72) Хворост Ольга Павлівна (73) НАЦІОН АЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ (56) UA A 59681 15.09.2003 UA A 20932 07.10.1997 RU C1 2004248 15.12.1993 3 77795 4 що вона має високу екстрагуючу здатність по відекологічно чистих реактивів. Експериментальні ношенню до БАР листя ліщини звичайної, або лидані з вибору виду екстрагенту наведені в таблиці стя грабу звичайного, або їх суміші, та, окрім того, 1. являє собою один з найдоступніших та найбільш Таблиця 1 Вибір виду екстрагенту в залежності від виходу гото вого продукту № п/п 1. 2. 3. 4. Вид екстрагенту Вода Етанол 30% Етанол 60% Етанол 96% Вихід готового продукту, % від повітряне сухої сировини 14 12 10 5 Температура екстрагенту 50-60°С вибрана експериментальне, пов’язана з отриманням максимально високого виходу кінцевого продукту, сприяє збереженню термолабільних сполук. Дані експерименту наведені в табл. 2. Таблиця 2 Вибір оптимального температурного режиму екстракції у залежності від виходу готово го продукту № п/п 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Температура екстрагенту, °С 20 30 35 40 45 50 55 60 65 Вихід готового продукту, % від повітряне сухої сировини 7 8 8 10 12 14 17 15 13 Співвідношення сировина:екстрагент 1:10-1:15 є оптимальним для обраної сировини та екстрагенту. Зменшення співвідношення призводить до зменшення виходу кінцевого продукту внаслідок неповного вилучення БАР, а збільшення співвідношення недоцільне, тому що повнота екстракції та максимально високий вихід кінцевого продукту досягається при обраному співвідношенні 1:10-1:15. Експериментальні дані наведені в табл. 3. Таблиця 3 Вибір оптимального співвідношення сировина:екстрагент в залежності від виходу готово го продукту № п/п Співвідношення сировина:вода (Т-55°С) 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 1:5 1:7 1:10 1:12 1:15 1:17 1:20 Час екстракції також суттєво впливає на ви хід кінцевого продукту. Оптимальний термін екстрагування 4,5 години визначено шляхом експерименту. Зменшення часу екстрагування призводить до Вихід готового продукту, % від повітряне сухої сировини 4,5 10,0 14,0 17,2 15,5 11,5 11,0 неповного вилучення БАР з рослинної сировини, а подовження - недоцільне внаслідок припинення екстракції БАР. Результати визначення оптимального часу екстрагування наведені в табл. 4. 5 77795 6 Таблиця 4 Вибір оптимального часового терміну екстрагування БАР листя ліщини звичайної в залежності від виходу го тового продукту № п/п 1. 9 3. 4. 5. 6. 7. 8. Час екстрагування, год 0,5 1 1,5 2 2,5 3 4,5 6 Вихід готового продукту, % від повітряне сухої сировини 4,5 8,0 10,0 11,2 13,5 15,5 17,0 17,4 Кратність етапів екстрагування також впливає на вихід кінцевого продукту. Цей параметр визна чено експериментальним шляхом. Результати досліджень наведені в таблиці 5. Таблиця 5 Вибір оптимальної кратності етапів екстрагування в залежності від виходу готового продукту № п/п Співвідношення сировина:вода (Т-55°С) 1. 2. 3. 4. 5. 1 2 3 4 5 З даних табл. 5 витікає, що оптимальними для заявленого способу є 3-кратна екстракція сировини. Заявлений спосіб здійснюється наступним чином. Листя ліщини звичайної, або грабу звичайного, або їх суміші, подрібнюють до розміру часток 0,5-1,0 мм та екстрагують водою, підігрітою до 5060°С, при оптимальному співвідношенні сировина:екстрагент 1:10-1:15.Сировину піддають екстракції тричі. Загальний час екстракції 4-5 годин. Отримані екстракти об’єднують, концентрують у вакуумі та сушать у вакуум-сушильній шафі до видалення залишків екстрагенту (оста точна вологість 6-25%). Вихід готового продукту за заявленим способом не менш 14%. Винахід ілюструється прикладами. Приклад №1 5,0 кг сировини (листя ліщини звичайної) подрібнюють та тричі по 1,5 години екстрагують водою, підігрітою до 50°С, при співвідношенні сировина:ектсрагент 1:10. Загальний час екстракції 4,5 години. Отримані екстракти концентрують у вакуумі та досушують до остаточної вологи 8% у вакуум-сушильній шафі. Ви хід готового продукту у перерахунку на повітряно-суху сировину становить 710 г або 14,2%. Приклад №2 5,0 кг сировини (листя грабу звичайної) подрібнюють та тричі екстрагують водою, підігрітою до 55°С, при співвідношенні сировина:екстрагент 1:12 по 1,5 години. Отриманий сумарний екстракт концентрують у вакуумі та досушують до остаточної вологи 8% у вакуумсушильній шафі. Вихід готового продукту у пере Вихід готового продукту, % від повітряне сухої сировини 5,5 10,0 17,0 17,2 17,5 рахунку на повітряно-суху сировину становить 875 г або 17,5%. Приклад №3 5,0 кг сировини (суміші листя ліщини звичайної та листя грабу звичайного) подрібнюють та тричі екстрагують водою, підігрітою до 60°С, при співвідношенні сировина:екстрагент 1:15. Отриманий сумарний екстракт концентрують у вакуумі та досушують до остаточної вологи 8% у вакуумсушильній шафі. Вихід готового продукту у перерахунку на повітряно-суху сировину становить 775 г або 15,5%. Приклад №4 Вивчення протизапальної активності комплексу БАР з листя ліщини звичайної у вигляді екстракту, одержаного за заявленим способом, було проведено на моделі карагенінового набряку лап у щурів, яка дозволяє визначити антиексудативні властивості досліджуваного екстракту і оцінити його вплив на метаболізм та визволення простогландінів, які за даною моделлю є основними медіаторами запалення. Дослідних тварин було поділено на 3 групи: контрольну та 2 дослідні. Тварини першої дослідної групи одержували екстракт, отриманий за заявленим способом, тварини другої дослідної групи одержували препарат порівняння - вольтарен. Величину набряку розраховували за різницею між обсягами здорової та ураженої лапи. Протизапальну активність досліджуваного екстракту та вольтарену у досліді визначали за ступенем зменшення набряку у дослідних тварин у порівнянні з контрольними. Результати дослідів наведені в таблиці 6. 7 77795 8 Таблиця 6 Вивчення протизапальної активності досліджуваного екстракту у порівнянні з вольтареном на моделі карагенінового набряку Умови досліду Доза, мг/кг Контроль Досліджуваний екстракт Вольтарен 25,0 8,0 Кількість тварин в групі 6 6 6 За даними таблиці 6 досліджуваний комплекс БАР з листя ліщини звичайної у вигляді екстракту за протизапальною активністю перевищує препарат порівняння вольтарен. Ефективна доза антиексудативної активності комплексу БАР з листя ліщини звичайної становить 25 мг/кг. Приклад №5 При вивченні противиразкової активності екстракту листя ліщини звичайної, одержаного за заявленим способом, використовували модель ураження слизової оболонки шлунку сумішшю спирту з преднізолоном. Величина набряку, мм 27,83+1,76 0,19+0,08 6,17+1,31 Протизапальна активність, % 82,84+17,95 77,8+15,54 Досліди проводили на 5 групах тварин. Перша була контрольною, 2-5 групи за годину до відтворення деструктивного ураження шлунку перорально отримували екстракт листя ліщини в дозах 500, 100, 50 і 25 мг/кг відповідно. Через 24 години проводили мікроскопічне дослідження слизової оболонки шлунку у тварин усі х гр уп, при цьому враховували площу виразок у балах, число тварин з виразками та розраховували противиразковий індекс (ВІ). Дані наведені в таблиці 7. Таблиця 7 Вивчення противиразкової активності досліджуваного комплексу БАР Умови досліду Контроль Екстракт листя ліщини звичайної -“-“-“ Доза, мг/кг Стан слизової оболонки шлунка Кількість тварин Площа виразок, Тварини з виу групі ВІ бали разками ,% 8 25,88+4,40 100 2,07 500 4 25,25+10,0 9 100 1,01 100 50 25 4 4 4 19,00+9,27 6,50+3,84 5,50+2,18 100 50 50 0,76 0,13 0,11 За даними табл. 7 досліджений екстракт проявляє виражену противиразкову активність на даній моделі. Зі зменшенням дози активність його збільшується. Противиразкова активність дослідженого екстракту в дозі 50 мг/кг в 8 разів більша за дозу 500 мг/кг, а в дозі 25 мг/кг - вираженіша за дозу 50 мг/кг. Таким чином, проведені дослідження показали, що екстракт листя ліщини звичайної в дозі 25 мг/кг має виражену противиразкову активність на моделі спирто-преднизолонової виразки у щурів. Приклад №6 Вивчення мембраностабілізуючої активності екстракту з листя лі щини звичайної, одержаного за заявленим способом, вивчали за допомогою удосконаленого методу Шрека. Для визначення цитотоксичної дії у пробірки вносили по 5 мл клітинної зависі (з концентрацією 240 000 кліток в мл3) і 0,125 мл 2% розчину. За контроль обрано серії з додаванням 0,125 мл фізіологічного розчину. Час експозиції становив 15 хвилин. Була використана модель, на фоні якої тестувався препарат порівняння ессенціале. Результати наведені в табл. 8. Дані таблиці 8 свідчать, що екстракти листя ліщини звичайної та листя грабу звичайного мають виражену мембраностабілізуючу активність, що перевищує дію ессенціале. Таблиця 8 Вивчення мембаностабілізуючої дії комплексу БАР з листя лі щини звичайної Умови досліду Контроль(нативний стан) Ессенціале Екстракт листя ліщини звичайної Екстракт листя грабу звичайного Мембраностабілізуча активність, % 98 87 97 92 Таким чином заявлено спосіб одержання комплексу БАР з листя ліщини звичайної, або листя грабу звичайного, або їх суміші, з вираженою противиразковою, протизапальною та мембрано 9 77795 10 стабілізуючою дією. Заявлений спосіб простий, Спосіб одержання поліфенольного комплексу економічний, передбачає використання доступної "Флавітін" з протизапальною, анальгетичною, провітчизняної сировини та екологічно безпечних ретивиразковою та антиокисдантною активністю. З. активів, може бути здійснений на будь-якому фар№2002119121, заявл. 15.11.2002, опубл. мацевтичному підприємстві зі стандартним облад15.09.2003, Бюл. №9. нанням. Комплекс БАР, одержаний за заявленим 2. Патент 24032, Україна, МПК А 61 К 35/78, способом, може бути використаний у якості Спосіб одержання комплексу полісахаридів пролікарського засобу у формі густого екстракту або тиалергічної дії та лікарських препарат "Глюяк лікарська субстанція для створення препаратів корібін", який містить вказаний комплекс. З. у різних лікарських формах. №95125519, заявл. 28.12.95, опубл 31.08.98, Бюл. Джерела інформації: №4. 1. Патент 59681, Україна, МПК А 61 К 35/78, Комп’ютерна в ерстка М. Клюкін Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601