Мікробіологічне середовище для накопичення бактерій роду listeria

Мікробіологічне середовище для накопичення бактерій роду Listeria, до складу якого входить панкреатичний гідролізат казеїну (ПГК), екстракт 3 листерий ), яке складається з наступних компонентів: Панкреатичний гідролізат рибної 12,0-18,0; муки Панкреатичний гідролізат казеїну 8,0-12,0; Екстракт пекарських дріжджів 1,5-2,0; Літій хлориду 14,0-16,0; Натрій хлориду 3,0-4,0; Ескулін 0,7-0,9; Цитрат амонійного заліза 0,45-0,55; Поліміксін В сульфату 0,005-0,015; Налідіксова кислота 0,015-0,025; Акріфлавіна 0,005-0,015; Агар-агар 12,0-14,0; Дистильована вода решта. Недоліком цього середовища є те, що це багатокомпонентне середовище є диференційним щільним, має високу вартість та не придатне для накопичення бактеріальної маси лістерій. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити мікробіологічне середовище для накопичення бактерій роду Listeria до складу якого входить панкреатичний гідролізат казеїну (ПГК), екстракт пекарських дріжджів (ЕПД), літію хлорид, натрію хлорид, цитрат амонійного заліза, вода дистильована, шляхом додавання як джерела азоту-панкреатичного гідролізату кільки з утриманням амінного азоту 0,15-0,20г/% за рН середовища 7,2-7,4 при наступному співвідношенні компонентів, г/л: ЕПД 1,8-2,3; ПГК 9,5-10,5; Літію хлорид 14,0-15,5; Натрію хлорид 2,5-3,5; Цитрат амонійного заліза 0,4-0,6; Панкреатичного гідролізату 14,0-16,0; кільки Дистильована вода решта. щоб забезпечити ефективність мікробіологічного середовища. Панкреатичний гідролізат кільки, який пропонується в якості живильної основи, є продуктом глибокого розщеплення білків з вмістом широкого спектру амінокислот. Крім того, вміст амінного азоту в даному поживному середовищі доповнює панкреатичний гідролізат казеїну та м'ясо-пептонний бульйон. Внесення гідролізату дріжджів сприяє інтенсивному росту лістерій, тому, що він є джерелом вітамінів групи В. Порівняльний аналіз технічного рішення з прототипом дозволяє зробити висновок, що мікробіологічне середовище відрізняється від існуючого спрощенням складу,не містить дорогих компонентів, має більш виражені ростові властивості, що відповідає критерію "новизна" Приклад 1. Середовище готують таким чином: беруть наступні наважки компонентів, г/л. ЕПД 1,8 ПГК 9,5 Літію хлориду 14,0; Натрію хлориду 2,5; Цитрату амонійного заліза 0,4; Панкреатичного гідролізу кільки 14,5 29973 4 Готують панкреатичний гідролізат кільки за Хотінгером, відповідно до методики (Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, Биргер О.М. /М.: 1967. С.53-54). До одного літру гідролізату кільки, який містить 14,5г сухого панкреатичного гідролізату додають наважки, кип'ятять до розчинення компонентів. Після охолодження доводять рН до 7,2-7,4, фільтрують та стерилізують за 0,5атм. протягом 30 хвилин. Бактеріальний контроль середовища проводили відповідно з прикладом 3 (таблиця). Приклад 2. Готують середовище за прописом прикладу 1 при наступному співвідношенні компонентів, г/л: ЕПД 2,1 ПГК 10,5 Літію хлориду 15,5; Натрію хлориду 3,5; Цитрату амонійного заліза 0,6; Панкреатичного гідролізу кільки 16,0 До одного літру гідролізату кільки, який містить 16,0г сухого панкреатичного гідролізату додають наважки, кип'ятять до розчинення компонентів. Після охолодження доводять рН до 7,2-7,4, фільтрують та стерилізують за 0,5атм. протягом 30 хвилин. Бактеріальний контроль середовища проводили відповідно з прикладом 3 (таблиця). Приклад 3. Ефективність середовища перевіряли з використанням тест штамів: Listeria monocytogenes №924002, Listeria ivanvii №924004, Listeria inocua №924005. Для порівняння ростових властивостей різних середовищ використовували МПБ, бульйон Хотінгера, середовище Мартену, МПБ з додаванням 1% гідролізату казеїну та 0,2% ПГК. Для визначення ростових властивостей, спочатку робили посів кожного тест-штаму на скошений МПА. Готували у стерильному 0,9% розчині хлориду натрію мікробну завись, яка за стандартом каламутності відповідала 500млн. м.к./см3. Далі робили засів кожної культури по 0,1см3 на 3 6см кожного рідкого середовища: МПБ, МПБ з додаванням 1% гідролізату казеїну і 0,2% гідролізату дріжджів, середовища Мартена та бульйону Хотінгера (3 пробірки). Інкубували 24 години за температури (35±0,5)°С. Далі готували з кожної пробірки кожного рідкого середовища десятикратні розведення на стерильному фізіологічному розчині до розведення 10-8. З розведення 10-5-10-8 засівали по 0,1см3 мікробної зависі на чашку Петрі з МПА, (n=3). Посіви інкубували протягом 48 годин за температури (35±0,5)°С. Колонії Listeria monocytogenes, Listeria ivanvii, Listeria inocua на МПА були круглими прозорими з сирувато-білим відтінком, розміром 0,2-1,0мм. Облік результатів проводили за допомогою пристрою для підрахунку колоній (таблиця). Інтенсивність росту бактеріальної біомаси оцінювали у динаміці часу, перші дві години кожні 30 хвилин, потім через 3, 4, 5, 6, 8, 12, та 24 години за 5 29973 оптичною густиною суспензії мікробних клітин, яку реєстрували у відповідній термін, фотометрично при довжині хвилі 590нм. З таблиці видно, що передбачуване середовище має високі ростові властивості. Так фаза адаптації (лаг-фаза) її у порівнянні з бульйоном Мартена займала менше часу в 4,8 раз та в 4,1 рази з бульйоном Хотінгера, а фаза активного росту більше в 2,7 та в 1,3 рази, відповідно. Таким чином, запропоноване рідке поживне середовище для накопичення біомаси лістерій, має наступні переваги: 6 - не містить дорогих компонентів; - компоненти середовища виробляються на промисловому рівні, тому вони стандартизовані; - склад середовища спрощується, при цьому ростові властивості перевищують такі відомих бактеріальних середовищ; - на основі запропонованого середовища можна виготовити диференційне рідке і щільне поживне бактеріальне середовище. Таблиця Мікробіологічне середовище для накопичення бактерій роду Listeria Вид поживного середовища МПБ МПБ+ 1,0%ПГК+ 0,2 % ЕПД Бульйон Мартена Бульйон Хотінгера Технічне рішення, приклад 1 Технічне рішення, приклад 2 Показники процесу культивування лістерій Концентрація Тривалість лаг-фази, Тривалість лог-фази, мікроорганізмів через годин годин 24г. КУО/см3, lg 1,1±0,07 6,2±0,5 5,68±0,16 Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 1,3±0,08 5,3±0,3 5,76±0,23 1,4±0,15 1,2±0,1 6,1±0,45 12,1±0,7 7,67±0,18 8,55±0,34 0,29±0,03 16,3±0,6 10,24±0,57 0,31±0,04 16,0±0,5 10,32±0,43 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601