Спосіб ідентифікації м.triviale

Спосіб ідентифікації М. triviale, що включає посів дослідного матеріалу на живильне середовище 31676 горизонтальному положенні на одну добу. Потім пробірки парафінують та витримують у термостаті 30 днів при температурі +38°С. Облік результатів засіву проводять щоденно. При відсутності росту культур мікобактерій на середовищі Левенштейна-Ієнceнa з 0,1% синтайодом культур у відносять до М. avium або де М. triviale. Надалі проводять дослідження на лабораторних тваринах. Для цього готують суспензію з культур мікобактерій на стерильному фізіологічному розчині із розрахунку 1 мг/см 3, які не дали росту на середовищі Левенштейна-Ієнсена з 0,1% синтайодом. Біологічну пробу ставлять на клінічно здорових дво х кролів, масою 2 кг або на двох курях віком 5 міс, нереагуючи х на туберкулін. Суспензією бактеріальної маси вивчаємих культур заражають кролів у крайову вен у вуха, а кур-у підкрильцеву вену в дозі 1 мг мікобактерій у 1 см 3. Догляд за тваринами проводять на протязі 90 діб. Мікобактерії пташиного виду - у кролів спричиняють сепсіс (тип Ієрсена), а у кур на печені і селезінки туберкульозні вузлики та загибель тварин через 18-30 діб. Диференційним показником для М. tri viale є відсутність патогенних властивостей для кролів та кур. Приклад 1. Для дослідження відібрали чотирнадцять видів культур а типових мікобактерій (M. Kansasіi, M. Scrofulaceum, M. gordonaе, M. a vium, M. intracellulare, M. triviale, M. xenopi, M. nonchromogeni, M. forluitum, M. smegmatis, M. plilei, M. vaccae, M. thamnofcus, M. dicrnhoferi), які знаходяться у колекції лабораторії вивчення туберкульозу, що одержані із Центрального науководослідного інститута туберкульозу (м. Москва). Як контроль використовували середовище Левенштейна-Ієнсена, що не містило синтайод. Із вирощених на середовищі Павловського одно-двухтиждневих культур атипових мікобактерій готували суспензію на стерильному фізіологічному розчині із розрахунку 1 мг/см 3, яку стерильними піпетками засівали по 0,5 см 3 у п'ять пробірок з середовищем Левенштейна-Ієнсена, містила 0,05% синтайоду. Рост колоній мікобактерій на середовищі, що містило синтайод спостерігали через 5-20 днів у всіх 14 видів культур та на середовищі без синтайоду (контроль). Приклад 2. Так само, як у прикладі 1, але середовище Левенштейна-Ієнсена містить 0,1% синтайоду. Рост колоній мікобактерії на середовищі, що містить 0,1% синтайоду спостерігали на 5-20 день у 12 культур та у всі х культур на середовищі без синтайоду (контроль). У двох культур видів М. avium та М. triviale росту колоній не виявили. Приклад 3. Так само, що у прикладі 1, але середовище Левенштейна-Ієнсена містить 0,15% синтайоду. Рост колоній мікобактерій на середовищі, що містить 0,15% синтайоду спостерігали на 520 день у 12 культур і на середовищі у контролі. У культур М. a vium і М. tri viale росту колоній не виявили. Зведені дані по прикладах 1, 2 та 3 подані у таблиці. При внутрішньовенному зараженні суспензією культури М. a vium двох кур та дво х кролів у дозі 1 мг/см 3 встановили, що кури загинули на 3060 день. Післязабійним дослідженням у загиблих кур на печені і селезінки виявили туберкульозні вузлики. Кролі загибли на 20-30 день від бактеріального сепсіса (тип Ієрсена). На розтині у тварин виявили збільшену у 2-3 раза селезінку. Внутрішньовенне зараження суспензією культури М. tri viale двох кур і дво х кролів у той же дозі показало, що культура не викликала загибелі тварин, а при післязабійному дослідженні во внутрішніх органах характерних щодо туберкульозу уражень не виявили. Порівняльний аналіз запропонованого способу з прототипом показав, що запропонований спосіб дає можливість провести ідентифікацію М. tri viale від М. avium та інших атипових мікобактерій і не вимагає проведення додаткових досліджень. Таким чином, використання розробленого способу ідентифікації виду М. triviale від збудника туберкульозу пташиного виду та від інших атипових мікобактерій дозволить швидше визначити його роль у епізоотології і епідеміології туберкульозу у тварин та людей з метою удосконалення противотуберкульозних заходів. 2 31676 Таблиця Результати іспиту “Запропонованого способу” та “Прототипу” № п/п 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Вид культури M. M. M. M. M. M. M. M. M. M. M. M. M. M. Kansasii Scrofulaceum gordonaе avium intracellulare tri viale xenopi nonchromogenicum fortuitum Smegmatis phlеi Vaccae thamnofeus dicruhoferi Група по Раніону 1 ІІ -"ІІІ -"-"-"-"IV -"-"-"-"-" Запропонований спосіб концентрація синтайоду біопроба на у середовищі (%) кро0,05 0,1 0,15 курях лях + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Прототип Контроль + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Примітка: + позитивний результат - негативний результат __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 35 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3