Спосіб пригнічення синаптичного гальмування гладеньких м’язів кишечнику людини в експерименті

Спосіб пригнічення синаптичного гальмування гладеньких м'язів кишечнику людини в експериме 3 роль нехолінергічних процесів в усуненні побічних ефектів галоперидолу та розробляти раціональні методи корекції порушень моторики кишечнику. Поставлену задачу досягають тим, що у відомому способі блокування синаптичного гальмування шляхом внесення в середовище інкубації (розчин Кребса) блокаторів кальцій-залежних калієвих каналів згідно корисної моделі як блокатори кальцій-залежних калієвих каналів в середовище інкубації вносять фосфорильовану форму вітаміну В6 піридоксаль-5'-фосфат (1·10-4М) та нейролептик галоперидол (1·10-5М), при цьому тривалість інкубації складає не менше 30 хвилин. Перевагами способу, що пропонується є одночасне блокування Р2-пуринорецепторів за рахунок внесення в середовище інкубації фосфорильованої форми вітаміну В6 піридоксаль-5'-фосфат в концентрації 1·10-4М та пригнічення кальційзалежної калієвої провідності інтестинальних гладеньких м'язів за рахунок нейролептика галоперидол в концентрації 1·10-5М, з використанням при цьому фармакологічних агентів, які на цей час широко використовуються в клінічній практиці. Сутність способу, що пропонується, пояснюється графічно, де на Фіг.1 представлена ілюстрація пригнічувальної дії піридоксаль-5'-фосфату та галоперидолу на синаптичне гальмування гладеньких м'язів кишечнику людини А1 - контроль; А2 - пригнічення амплітуди гальмівних синаптичних потенціалів гладеньких м'язів ободової кишки людини за умов додавання в середовище, що являє собою розчин Кребса, блокатору Р2пуринорецепторів піридоксаль-5'-фосфату (1·104 М) на протязі не менше 30 хвилин; A3 - пригнічення амплітуди гальмівних синаптичних потенціалів гладеньких м'язів ободової кишки людини за умов додавання в середовище, що являє собою розчин Кребса, який містить піридоксаль-5'-фосфат (1·10 -4М), нейролептика галоперидолу (1·10-5М) на протязі не менше 30 хвилин. Б1 - контроль; Б2 - пригнічення амплітуди гальмівних синаптичних потенціалів гладеньких м'язів ободової кишки людини за умов додавання в середовище, що являє собою розчин Кребса, блокатору кальційзалежної калієвої провідності нейролептика галоперидолу (1·10-5М) на протязі не менше 30 хвилин. Б3 - пригнічення амплітуди гальмівних синаптичних потенціалів гладеньких м'язів ободової кишки людини за умов додавання в середовище, що являє собою розчин Кребса, який містить нейролептик галоперидол (1·10-5М), блокатору P2пуринорецепторів піридоксаль-5'-фосфату (1·104 М) на протязі не менше 30 хвилин. Спосіб здійснюють таким чином: З резекційних фрагментів візуально нормальних повношарових ділянок стінки кишки людей, яким в хірургічних клініках за медичними показаннями було проведено операції отримували ділянку стінки довжиною 20мм і шириною 10мм смужки. В операційній, одразу після вирізання, повношарову ділянку кишки ретельно промивають розчином Кребса, який має кімнатну температуру. Склад розчину Кребса містить (ммоль/л): NaCl - 120,4, 33269 4 KCl - 5,9, NаНСО3 - 15,5, NaH2PO4 - 1,2, СаСІ 2 2,5, MgCl2 - 1,2, глюкоза - 11,5. В лабораторії під бінокулярним стереомікроскопом з повношарової ділянки кишки вирізають ізольовані гладеньком'язові смужки кільцевого шару довжиною 10мм і товщиною 1-2мм. Для цього, на першому етапі послідовно відшаровують слизову оболонку разом з підслизовим шаром. Потім м'язовий препарат стінки кишки знову ретельно промивають розчином Кребса. З цього фрагменту отримують ізольовані гладеньком'язові смужки кільцевого шару, які занурюють у розчин Кребса, що має температуру 3536°С і витримують в ньому не менше ніж 2 години до початку електрофізіологічних досліджень. Усі розчини, у яких проводять інкубацію ізольованих смужок гладеньких м'язів, містять для попередження холінергічних впливів блокатор Мхолінорецепторів атропін (1·10-6М). (Фіг.1 - контроль 1А, 1Б). Для блокування синаптичного гальмування в середовище інкубації (розчин Кребса) вносять послідовно блокатор Р2-пуринорецепторів піридоксаль-5'-фосфат в концентрації 1·10-4М на протязі 40 хвилин та блокатор кальцій-залежної калієвої провідності нейролептик галоперидол в концентрації 1·10 -4М на протязі 60 хвилин. Можливо провести блокування інакше: спочатку в середовище інкубації (розчин Кребса) вносять послідовно блокатор кальцій-залежної калієвої провідності нейролептик галоперидол в концентрації 1·10-5М на протязі 60 хвилин, а потім блокатор Р2пуринорецепторів піридоксаль-5'-фосфат в концентрації 1·10 -4М на протязі 40 хвилин (Фіг.1 - 2А, 2Б, 3А, 3Б). Таким чином, запропонований спосіб дозволяє найбільш ефективно пригнічувати синаптичне гальмування в гладеньких м'язах кишечнику в умовах експерименту, що дозволить більш досконало вивчати роль нехолінергічних процесів в усуненні побічних ефектів галоперидолу та розробляти раціональні методи корекції порушень моторики кишечнику. Джерела інформації: 1. Tack. J. Receptors of the enteric nervous system: potential targets for drug therapy // Gut. 2000 - 47(Suppl. IV). - P.iv20-iv22. 2. R.K. Goyal, "Targets of enteric motor neurons: smooth muscle cells", Gut. 2000 - 47(Suppl. IV) P.iv38-iv39. 3. Шуба М.Ф., Владимирова І.А., Єрмакова Т.О., Юркевич Н., Юркевич А. Механізми неадренергічної синаптичної передачі в гладеньком'язових клітинах шлунково-кишкового тракту // Нейрофизиология/Neurophysiology. 1998. - 30, №4/5. С.265-270. 4. Загороднюк В. П., Шуба М. Ф. Природа неадренергического торможения в гладких мышцах человека // Нейрофизиология. - 1986. - Т.18, №3. С.373-381. 5. Xue L., Farmia G., Sarr M.G., Szurszewski J.H. ATP is a mediator of the fast inhibitory junction potential in human jejunal circular smooth muscle // Am.J. Physiol. 276 (Gastrointest. Liver Physiol. 38): G1373-G1379,1999. 5 33269 6. Gallego D., Hemandez P., Clave P., Jimenez М., Pzyi receptors mediate inhibitory purinergic neuromuscular transmission in the human colon // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. - 2006. Vol.291. - P.G584-G594. 7. M.F. Shuba, І.А. Vladimirova, I.B. Philipov, "Mechanisms of the inhibitory action of Комп’ютерна верстка А. Рябко 6 neurotransmitters on smooth muscles". Нейрофизиология / Neurophysiology, 35, №3/4, 252-261 (2003). 8. Загороднюк В.П., Вовк Э.В., Черпак Б.Д., Шуба М.Ф. Исследование синаптических потенциалов в гладких мышцах тонкого кишечника человека // Физиол. журн. -1986. - Т.32, №2. - С.172179. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601